標本存放對胰島素和C肽檢測結果的影響

摘要：目的 探討標本放置時間和溫度對胰島素和C肽結果的影響，以期建立實驗室標本存放標準。方法 30例標本采用化學發光的方法檢測其胰島素和C肽水平，并置于室溫（21℃）、4℃和-20℃，測定不同保存時間的胰島素和C肽水平。結果 血清置-20℃溫度24h和1w，4℃溫度4h與即時檢測結果相比無統計學意義（P>0.05）；血清置室溫溫度（21℃）1h，置4℃溫度12h與即時檢測結果相比均有統計學意義（P<0.05）；標本經室溫保存2、3h，4℃保存72h與-20℃保存4w（672h）后，胰島素和C肽水平顯著下降（P<0.01）。結論 標本冷凍是準確檢測血清胰島素和C肽的金標準，而室溫下保存可能降低分析物的檢測水平。血漿樣品儲存在4℃，應在靜脈穿刺后4h內進行分析。

關鍵詞：胰島素；C肽；保存溫度；保存時間

Abstract：Objective To investigate the impact of storage time and temperature on test results of insulin and C-peptide， and to develop laboratory Standards for Samples Storage . Methods The serum insulin and C peptide levels in 30 blood samples were determined by chemiluminescence immunoassay. Samples were stored at room temperature， 4℃ and -20℃， and then analyzed at different times. Results Compared with Point-Of-Care Testing（POCT）， there was no substantial change in insulin and C peptide levels when blood samples stored at -20℃for 24 or 168 hours and 4℃for 4 hours（P>0.05）.At room temperature for 1 hour and 4℃ for 12 hours，There was significantly difference of insulin and C peptide levels when compared to POCT（P<0.05）. Significant changes were also observed for insulin and C peptide （decrease at 2 and 3 hours， room temperature； 72hours， 4℃； 672hours，-20℃）（P<0.01）.Conclusion Our study confirmed that sample freezing is the gold standard for accurate determination of serum insulin and C peptide， that storage at room temperature may decrease the analyte levels. Plasma samples should be stored at 4°C and analysed within 4 hours of venepuncture.

Key words：Insulin ； C peptide ；Storage temperature；Storage time

胰島素C肽檢測（INS，C-P）是目前臨床為診斷糖尿病和治療糖尿病最重要的輔助檢查[1]，為使胰島素C肽檢測（INS，C-P）結果準確可靠，加強實驗室分析前、分析中、分析后質量管理非常必要。國內多數實驗室缺乏標本分析前后的管理標準。全血標本保存時間及溫度的不同，胰島素C肽檢測（INS，C-P）結果可能會發生較大變化。本文通過不同溫度，不同時間存放標本，探討標本存放條件對胰島素C肽檢測（INS，C-P）結果的影響，以期建立實驗室胰島素C肽檢測（INS，C-P）標本存放標準，對實驗質量管理有所改進。

1資料與方法

1.1一般資料 標本是隨機抽取本院30例患者標本（空腹+餐后），患者32～79歲，男14例，女16例。標本外觀無黃疸，無脂血和溶血。

1.2方法 30例標本使用無添加試管采血，離心后血清。儀器采用北京科美東雅全自動發光檢測儀。試劑為科美東雅INS和C-P試劑，批號INS 20130528，C-P 20130528，規格均為96管。試驗分多次完成，即時正常檢測INS和C-P，同時取3份血清各1ml分別入室溫溫度（21℃）、4℃溫度冰箱內、-20℃溫度冰箱內。室溫溫度（21℃）內血清分別1h、2h、3h進行檢測。4℃溫度冰箱內血清分別4h、12h、72h進行檢測。-20℃溫度冰箱內血清分別24h、72h、4w進行檢測。實驗室質控 質控品采用科美東雅公司提供的INS和C-P高低兩個質控點。

1.3 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件進行分析，組間差異比較采用配對設計的兩樣本均數t檢驗。

2結果

2.1室溫結果 從表1中結果可見，即時結果與室溫溫度（21℃）1h結果發生差異（P<0.05），隨放置時間的延長，室溫檢測結果濃度不斷降低。即時結果與室溫溫度（21℃）2h，3h結果發生顯著差異（P<0.01）。

2.2 4℃結果 從表2中結果可見，即時結果與4℃溫度冰箱內4h結果無變化，無統計學意義。隨放置時間的延長，4℃溫度冰箱內的結果濃度開始降低，即時結果與4℃溫度冰箱內12h結果發生差異（P<0.05）。隨放置時間的再次延長即時結果與4℃溫度冰箱內72h結果發生顯著差異（P<0.01）。

2.3 -20℃結果 從表3中結果可見，即時結果與-20℃溫度冰箱內24h，1w結果無統計學意義。但長時間放置后，即時結果與-20℃溫度冰箱內4w結果發生顯著差異（P<0.01）。

3討論

胰島素C肽檢測（INS，C-P）可用于診斷Ⅰ.Ⅱ型糖尿病，用于判斷Ⅱ型糖尿病胰島素治療效果，指導臨床具有重要作用，對臨床診斷非常必要[2]。胰島素，C肽均從胰島素原分裂而成，每一個胰島素原分子均在胰島B細胞中特殊蛋白酶的作用下裂解為1分子胰島素，一分子C肽。胰島素分子量5734，C肽分子量3617，它們生物半衰期都很短，胰島素為15min而C肽也只有20min[3，4]，以上結構和特性存放胰島素和C肽在室溫條件下極不穩定，存放溫度和時間的變化可能對檢測結果有影響。從上表中可以看出，胰島素C肽在室溫溫度（21℃）保存1h后和4℃保存12h后與即時檢測相比，其結果就會發生統計學意義的差異（P<0.05）。胰島素C肽在室溫溫度（21℃）保存2h和3h后檢測和4℃保存72h后與即時檢測相比，其結果既有統計學意義的顯著差異（P<0.01），而-20℃保存72h后無變化，直到4w后結果與即時結果發生顯著差異（P<0.01）。以上結果表明同一份標本室溫保存比4℃保存和-20℃保存結果更低，說明低溫能抑制酶的活性[4]，而長時間冷藏和室溫均使生物活性降低，結果出現錯誤。說明標本冷凍能有效減少干擾。因此在血液標本的采集﹑運輸﹑轉移﹑保管和分離過程中應保持低溫環境，以最大程度降低生物活性。

面對免疫學檢驗質量速度的要求，免疫項目檢測4h內完成標本的分離與檢測，所以我們以4℃保存4h為界限來評價胰島素C肽檢測（INS，C-P）標本放置時間對胰島素C肽檢測（INS，C-P）的質量影響，結果在4h以內可以滿足質量要求。如有復查標本可進行-20℃保存，可穩定4w，不會造成結果差異。確保胰島素C肽檢測（INS，C-P）的準確性，保證實驗室質量要求。

參考文獻：

[1]王艷艷.C肽胰島素在糖尿病診治中的作用[J].中外醫療，2009，28（27）：99.

[2]張鳳杰.化學發光檢測C肽，胰島素對糖尿病的診斷價值[J].中國誤診雜志，2011，11（34）：8362.

[3]McDonald TJ， Perry MH， Peake RW， et al. EDTA improves stability of whole blood C-peptide and insulin to over 24 hours at room temperature [J]. PLoS One ，2012，7（7）∶e42084.

[4]Jones AG， Hattersley AT. The clinical utility of C-peptide measurement in the care of patients with diabetes [J].Diabet Med， 2013， 30（7）：803-817.

Sapin R.Insu lin asssays：previously known and new analytical[J].Clin Lab，2003， 49（3-4）：113-121.

編輯/申磊