含黃芪制劑中黃芪甲苷的含量測定

摘 要：該文旨在建立某黃芪制劑中黃芪甲苷的高效液相色譜法測定含量。所采用方法：采用蒸發光散射檢測器（ELSD）以黃芪甲苷為對照品對黃芪中黃芪甲苷進行HPLC-分析，色譜柱為C18柱，甲醇-水（75∶25）為流動相，流速1.0 mL/min，柱溫40 ℃；漂移管溫度83.8 ℃，載氣（空氣）流速2.0 L/min。結果：所建立的含量測定方法結果準確，便捷，專屬性強，無干擾，可用于控制該制劑的質量。

關鍵詞：黃芪甲苷 HPLC-ELSD 含量測定 含黃芪制劑

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）01（b）-0036-02

中藥黃芪含有黃芪甲苷、黃芪多糖等多種成份，其中黃芪甲苷為主要活性成分，具有降壓、保護心肌、減輕心肌缺血和增強免疫力等作用[1-2]。該研究建立某黃芪制劑（六類新藥，研發中。主要含黃芪、砂仁等）中黃芪甲苷的含量測定方法，為該制劑的質量控制提供方案。

1 儀器、試藥與樣品

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜議；Alltech2000蒸發光散射檢測器； AB250D十萬分之一電子天平。

1.2 試藥

黃芪甲苷標準品（中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純和分析純；其余所用試劑均為分析純；黃芪等藥材購自廣州致信藥業有限公司。

1.3 樣品的制備

按制劑處方稱取黃芪30 g和其他藥材。將除黃芪外的其他藥材置圓底燒瓶中，加12倍量水，接揮發油提取器，提取1 h，所得揮發油棄去，水提液過濾，保留待用；藥渣加入黃芪，加8倍量水，加熱回流提取1 h，所得水提液過濾，保留待用；再加6倍量水，加熱回流提取0.5 h，水提液過濾，與前兩次水提液合并，濃縮至每毫升藥液中含藥材1 g，攪拌加入95%的乙醇至含醇量為60%，放置過夜，抽濾取濾液，即樣品液。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的黃芪甲苷對照品15 mg置100 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含黃芪甲苷30 μg）。

2.1.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品液3 g，置蒸發皿中水浴上蒸干，加水20 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次10 mL，取正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10 mL，取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 陰性對照溶液的制備

用缺黃芪藥材的處方按1.3項的方法制得陰性樣品。精密稱取陰性樣品液3 g，按2.1.2項的方法制備，即得。

2.2 色譜條件的選擇

色譜柱DiscoverC18柱（25 cm×4.6 mm， 5 μm），流動相甲醇-水（75：25），流速1.0 mL/min，柱溫40℃；ELSD：漂移管溫度83.8℃，載氣（空氣）流速2.0 L/min，撞擊器關閉。在上述色譜條件下，黃芪甲苷的保留時間合適，大約在8.7 min且峰形較好（圖1）；在與對照品對應的位置上，供試品溶液中也有一色譜峰，且前后沒有其它組分干擾，達到基線分離（圖2）；而陰性對照溶液在該位置上沒有色譜峰（圖3）。

2.3 線性關系考察

用對照品溶液分別進樣10，20，30，40，50 μl，按上述色譜條件測定，以峰面積的常用對數為縱坐標（Y），進樣量的常用對數為橫坐標（X），進行線性回歸，得回歸方程：Y=1.5341X+7.3418；r=0.9994。表明黃芪甲苷在0.3～1.5 μg范圍內具有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

重復進樣對照品溶液5次，每次25 μl，分別測定峰面積，按上述回歸方程計算出進樣量，結果RSD=2.00%。

2.5 穩定性試驗

精密吸取對照品溶液25 μl，每隔4 h進樣一次，8 h內共測定3次，分別測定峰面積，按上述回歸方程計算出進樣量，RSD=1.28%。

2.6 重復性試驗

取樣品液，平行取樣6份，制成供試品溶液，依法測定，計算黃芪甲苷的含量，結果平均含量為0.0034%，RSD=4.23%。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取已測知含量的樣品液6份，分別精密加入一定量的黃芪甲苷，依法測定，計算回收率，結果平均加樣回收率為99.47%，RSD=3.46%（表1）。

3 討論

ELSD是高效液相色譜儀新一代通用型質量檢測器，其檢測樣品組分應是非揮發性的而流動相應是易揮發的溶劑，其中載氣流速和漂移管溫度是該檢測器的2個重要的可調參數，流速過高或過低會直接影響信噪比，從而影響峰面積和保留時間，而溫度過高或過低會直接影響溶劑的揮發程度，以致影響基線的穩定性，因此，在試驗中應反復認真進行調試，本實驗經反復試驗與觀察，確定載氣流速為2.0 mL/min，漂移管溫度為83.8℃。所確立的方法可準確測定該制劑中黃芪甲苷的含量。

參考文獻

[1]南京中醫藥大學.中藥大辭典[M].上海：上海科學技術出版社，2006： 2813.

[2]孔祥瑞.中華醫學微量元素研究進展[M].烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1996：42-44.

[3]溫燕梅.黃芪的化學成分研究進展[J].中成藥，2010，28（6）：879-883.

[4]馬曉豐，田曉明，陳英杰，等.蒙古黃芪中黃酮類成分的研究[J].中草藥，2005，36（9）：1293-1296.