

摘要:目的 檢測Pre-S1抗原,并與乙型肝炎大三陽患者HBV-DNA含量進行比較分析。方法 收集267例乙型肝炎大三陽患者血清和20例正常體檢者血清,用ELISA方法檢測Pre-S1抗原,用熒光定量PCR方法定量檢測HBV-DNA。結(jié)果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性(大三陽)患者HBV-DNA檢出率為76.8%,Pre-S1抗原檢出率為70.8%。結(jié)論 相當(dāng)數(shù)量的乙肝大三陽患者存在病毒復(fù)制,HBV-DNA與Pre-S1抗原相關(guān)性較好,對于乙型肝炎患者在常規(guī)血清學(xué)標(biāo)志物檢測的基礎(chǔ)上對HBV-DNA數(shù)量進行動態(tài)檢測有助于臨床診斷、療效觀察及預(yù)后判斷。
關(guān)鍵詞:乙型肝炎;HBV-DNA;Pre-S1抗原
乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測方法有多種,高效、敏感性和特異性是選擇檢測方法的重要指標(biāo)。Pre-S1抗原已成為乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個重要標(biāo)志。HBV-DNA定量測定可以反映乙型肝炎病毒的量的變化,是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接依據(jù)。本研究觀察了乙肝大三陽患者血清標(biāo)志物、Pre-S1和HBV-DNA三者之間的相關(guān)性及其臨床意義。
1資料與方法
1.1一般資料 收集267例乙型肝炎大三陽患者血清,其中男178例,平均年齡32.1歲,女89例,平均年齡31.3歲,健康對照20例,男10例,平均年齡28.8歲,女10例,平均年齡26.6歲。留取清晨空腹靜脈血,分離血清,-20℃保存待檢。
1.2儀器 德國DadeBehring公司BEPⅢ全自動酶免疫分析儀,廈門安普利生物技術(shù)有限公司Genelight9800 PCR熒光定量儀。
1.3方法
1.3.1血清標(biāo)志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)檢測 應(yīng)用ELISA方法,試劑由上海科華生物技術(shù)有限公司提供。加樣(包括質(zhì)控血清、陰陽性對照及待檢血清),然后用BEPⅢ全自動酶免疫分析儀進行檢測,判定方法嚴(yán)格按照說明書進行。
1.3.2 Pre-S1抗原檢測 采用雙抗體夾心ELISA法,用抗-Pre-S1和抗-HBs作為固相化抗體和酶標(biāo)抗體,單抗捕獲待檢標(biāo)本中的乙肝病毒表面抗原,用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗Pre-S1單抗作為檢測抗體。嚴(yán)格按照試劑盒說明書的檢測步驟進行操作,根據(jù)酶底物反應(yīng)后的呈色吸光值,測定血清中乙肝病毒Pre-S1,試劑由北京貝爾生物工程有限公司提供。
1.3.3 HBV-DNA定量測定 采用PCR方法結(jié)合熒光探針體外擴增檢測技術(shù),試劑由廈門安普利生物技術(shù)有限公司,該試劑盒的檢測上限為1.0×109copies/ml。
1.4統(tǒng)計分析計數(shù)資料 采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理
2結(jié)果
2.1 HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性組(大三陽組) HBV-DNA檢出率為76.8%,其HBV-DNA平均含量為9.7×105copies/ml;Pre-S1抗原檢出率為70.8%。可見部分HbeAg陽性患者存在病毒高復(fù)制。20例健康對照者血清HBV標(biāo)志物、HBV-DNA及Pre-S1均為陰性,見表1。
2.2乙型肝炎大三陽患者Pre-S1與HBV-DNA的關(guān)系 267例乙型肝炎大三陽患者血清中,HBV-DNA陽性為205例,Pre-S1陽性為189例,其陽性檢出率分別為76.8%(205/267)、70.8%(189/267)。HBV-DNA陽性組中Pre-S1檢出率為71.2%(146/205),HBV-DNA陰性組中Pre-S1檢出率為69.4%(43/62),Pre-S1與HBV-DNA檢出率有偏差,HBV-DNA與Pre-S1檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.5,P<0.05),見表2。
3討論
HBV血清標(biāo)志物檢測是目前診斷乙肝最常用的指標(biāo),它主要反映人體對乙肝病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài),但不能直接反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況。由于HBV血清標(biāo)志物復(fù)雜多樣,臨床上難以根據(jù)這些結(jié)果對HBV感染復(fù)制情況進行準(zhǔn)確判斷。
HBV的外衣殼蛋白包括S蛋白、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白,研究顯示,Pre-S1蛋白含有肝細(xì)胞膜受體,與病毒侵入肝細(xì)胞以及HBV復(fù)制關(guān)系密切。ELISA抗原檢測方法對病毒感染后\"窗口期\"則會出現(xiàn)假陰性結(jié)果。熒光定量PCR技術(shù)的出現(xiàn),解決了病原體感染后的發(fā)病時間、病情輕重與病原體數(shù)量的關(guān)系。探討HBV血清標(biāo)志物、Pre-S1、HBV-DNA檢測及其相互間的關(guān)系對于乙型肝炎臨床診斷、療效觀察和預(yù)后判斷具有重要意義。
本研究采用ELISA及PCR方法檢測267例乙型肝炎大三陽患者血清標(biāo)本的Pre-S1、HBV-DNA,結(jié)果顯示大三陽患者血清中HBV-DNA檢出率達(dá)76.8 %。HBV-DNA平均含量為9.7×105 copies/ml;Pre-S1檢出率為70.8%。
Pre-S1與HBV-DNA檢出率存在偏差,可能是Pre-S1和HBV-DNA檢測所表達(dá)的意義并不完全一致,慢性乙型肝炎病程早期(HBsAg陽性),HBV-DNA陽性而Pre-S1陰性;病程后期,部分病例Pre-S1陽性而HBV-DNA為陰性。因此,不能僅依照Pre-S1來判斷病毒是否復(fù)制,Pre-S1不能完全代替HBV-DNA的檢測,只能作為其補充的指標(biāo)。有研究認(rèn)為Pre-S1抗原與HBV復(fù)制有更密切關(guān)系,Pre-S1作為病毒復(fù)制的重要指標(biāo),較HBeAg敏感。在本研究中,Pre-S1與HBV-DNA高度相關(guān),表明Pre-S1與HBV的復(fù)制具有一致性,但HBV-DNA陽性組中Pre-S1檢出率為71.2%,和HBV-DNA的檢出率有差異,因此認(rèn)為臨床上判斷病毒的復(fù)制及其活躍程度不能單靠HBeAg或Pre-S1的陽性指標(biāo),準(zhǔn)確的方法是熒光定量PCR方法對HBV-DNA進行定量檢測。血清中HBV-DNA的量是反映病毒復(fù)制的最直接標(biāo)志,是評價傳染性的最可靠的方法。熒光定量PCR技術(shù)能從DNA水平鑒別其潛伏性和活動性,可以作為HBV感染的分子診斷標(biāo)準(zhǔn),對乙型肝炎的診斷、抗病毒治療的藥物療效評價、指導(dǎo)乙型肝炎合理治療方案的制訂以及預(yù)后判斷有非常重要的意義。
參考文獻:
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編輯/申磊