高效液相色譜法測定唑來膦酸制劑含量

摘 要：目的 建立注射用唑來膦酸含量測定方法。方法 采用離子對高效液相色譜法，色譜柱為Ultimate柱（150mm*4.6mm，5um），以甲醇：四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)pH至3.5）（35：65）為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為215nm。結(jié)果 輔料不干擾本品含量測定，耐用性試驗符合規(guī)定，溶液溶度在4.1ug/mL～60ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確度平均回收率為99.3%，RSD為0.6%，重復(fù)性及中間精密度符合規(guī)定，溶液穩(wěn)定性研究結(jié)果表明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論 所建立的含量測定方法操作簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于本品含量測定。

關(guān)鍵詞：唑來膦酸 方法學(xué) 含量測定

中圖分類號：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）04（b）-0090-01

唑來膦酸的藥理作用主要是抑制骨吸收，其作用機(jī)制尚不完全清楚，可能與多方面作用有關(guān)。唑來膦酸在體外可抑制破骨細(xì)胞活動，誘導(dǎo)破骨細(xì)胞調(diào)亡，還可通過與骨的結(jié)合阻斷破骨細(xì)胞對礦化骨和軟骨的吸收。唑來膦酸還可以抑制由腫瘤釋放的多種刺激因子引起的破骨細(xì)胞活動增強(qiáng)和骨鈣釋放[1]。我們采用高效液相色譜法測定唑來膦酸制劑含量，建立本品含量測定方法[2-4]。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 Series高效液相色譜儀（VWD檢測器），色譜柱AQ-C18 5μm Ultimate 4.6×150mm。

唑來膦酸對照品（含量：99.8%），注射用唑來膦酸由哈藥集團(tuán)生物工程公司提供，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

色譜條件：用烷基硅烷鍵合硅膠（C18）為填充劑，用甲醇與四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)pH至3.5）（35∶65）為流動相，檢測波長為215nm。理論板數(shù)按唑來膦酸峰計算應(yīng)不低于5000。

測定法取本品，精密稱定，用流動相溶解并制成每1mL含20μg的溶液，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另精密稱取對照品，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

2.1 專屬性試驗

唑來膦酸、空白輔料（檸檬酸鈉、甘露醇）、起始物料及中間體，流動相溶解，按照擬定方法進(jìn)樣，結(jié)果唑來膦酸與其他物質(zhì)可有效分離，唑來膦酸峰純度符合規(guī)定，表明輔料、中間體及起始物料不干擾含量測定。在該色譜條件下，主峰對稱因子0.98，塔板數(shù)8000。

2.2 耐用性試驗

更換3根不同型號色譜柱、所用流動相比例（所用流動相變化范圍為±5%）、色譜柱的柱溫（25℃、30℃、35℃）及實驗時的流速（0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min），評價各項試驗指標(biāo)的變化對含量測定影響，結(jié)果表明各項指標(biāo)變化對含量測定結(jié)果無明顯影響，符合耐用性試驗的規(guī)定。色譜峰的對稱因子在0.9～1.1之間，理論塔板數(shù)均大于5000。

2.2 線性試驗范圍

取唑來膦酸對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用作對照品的儲備液。分別精密量取唑來膦酸對照品儲備液1mL、2mL、4mL、8mL、16mL，置50mL容量瓶中，加流動相分別稀釋至刻度，搖勻。制成系列溶度溶液，分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以唑來膦酸的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果當(dāng)進(jìn)樣量為20μL時，唑來膦酸濃度在4.1μg/mL～60μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 準(zhǔn)確度試驗

稱取唑來膦酸對照品，精密稱定，加實驗用流動相溶解對照品并稀釋制成濃度約為20μg/mL的溶液，作為準(zhǔn)確度實驗的對照品溶液。取唑來膦酸原料適量各3份，分別精密稱定樣品，將樣品各置于100mL的容量瓶中，加流動相溶解（必要時超聲）并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2mL，加流動相稀釋至10mL，作為準(zhǔn)確度實驗的供試品溶液德80%、100%、120%組。精密量取對照品溶液及供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄測定的色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算唑來膦酸藥品的含量，并計算各回收率。結(jié)果平均回收率為99.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%，準(zhǔn)確度試驗符合要求。

2.4 重復(fù)性及中間精密度試驗

取供試品6份，分別精密稱定。分別加實驗用流動相使溶解并定量稀釋制成供試品溶液。按照擬定的含量測定方法進(jìn)行試驗，結(jié)果表明本品平均含量為99.8%，RSD為0.4%，方法的重復(fù)性符合要求。

取供試品，照含量測定方法進(jìn)行測定，變動因素為人員、實驗時間及實驗儀器（安捷倫、島津液相），考察含量測定結(jié)果一致性情況。結(jié)果12次測定的平均含量為99.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%，中間精密度符合規(guī)定。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

取供試品適量，精密稱定供試品，25℃條件下放置8 h，分別于0 h、1 h、2 h、4 h、5 h及8 h進(jìn)樣測定?？疾鞓悠泛孔兓闆r，結(jié)果8 h含量基本無變化，表明供試品溶液在25℃條件下放置8 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.6 樣品含量測定

取本品10瓶，精密稱定，用流動相溶解制成20ug/mL的溶液，按照所確定含量測定方法，測定唑來膦酸供試品的含量，結(jié)果分別為99.6%、100.5%、99.3%。

3 結(jié)語

所建立含量測定方法可行，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可用于唑來膦酸制劑含量測定。

參考文獻(xiàn)

[1]彭六保，崔巍.唑來膦酸的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國新藥與臨床雜志，2007，3（26）：237-240.

[2]鄭國鋼，方瀅芝.高效液相色譜法測定注射用唑來膦酸的含量[J].藥學(xué)實踐雜志，2003，21（6）：55-56.

[3]王玲玲.高效液相色譜法測定注射用唑來膦酸含量和有關(guān)物質(zhì)[J].中國新藥雜志，2006，15（8）：11.

[4]鄭朝華，陳寶龍.反相離子對高效液相色譜法測定唑來膦酸粉針劑中主藥和有關(guān)物質(zhì)[J].中國新藥雜志，2004，13（10）：919-920.