扁蓄提取物對(duì)小菜蛾生物活性的影響

摘要：研究扁蓄（Polygonum aviculare L.）乙醇提取物對(duì)小菜蛾（Plutella xylostella L.）觸殺、胃毒、拒食及抑制生長的影響，比較扁蓄不同部位的活性，并對(duì)提取溶劑進(jìn)行選擇。結(jié)果表明，扁蓄乙醇提取物對(duì)小菜蛾的主要作用方式為觸殺。

關(guān)鍵詞：扁蓄（Polygonum aviculare L.）；小菜蛾（Plutella xylostella L.）；生物活性

中圖分類號(hào)：S482.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）07-1593-03

扁蓄（Polygonum aviculare L.）又名扁竹、竹節(jié)草、烏蓼等，為蓼科一年生或多年生草本植物[1]。中國大部分地區(qū)都產(chǎn)扁蓄，以河南、四川、浙江、山東、吉林、河北等地產(chǎn)量較大，歐、亞、美三洲北溫帶的國家也有分布[2]。扁蓄具有利尿、降壓、利膽、保肝和抗菌等功效。以枸杞蚜蟲、小菜蛾為試蟲，測試了扁蓄的殺蟲活性，研究表明其具有較高的活性[3，4]。因此，本試驗(yàn)以扁蓄提取物對(duì)小菜蛾的生物活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究，旨在為扁蓄活性成分的分離提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試植物 扁蓄采自寧夏六盤山區(qū)，采集時(shí)間為夏季。將采集的扁蓄陰干，用植物粉碎機(jī)磨碎，過40目篩，制得干粉。

1.1.2 供試?yán)ハx 小菜蛾（Plutella xylostella L.）采自寧夏大學(xué)試驗(yàn)田，羽化后的成蟲喂食蜜糖水，產(chǎn)卵材料為盆栽油菜苗，幼蟲用油菜苗飼喂，選擇健康的3齡幼蟲供試（養(yǎng)蟲室溫度18～23 ℃，相對(duì)濕度75%～80%，光照L∶D=12∶12）。

1.2 提取方法

準(zhǔn)確稱取植物干粉50.00 g，放入1 000 mL的錐形瓶中，加入10倍量的溶劑，浸泡24 h，超聲波處理30 min，抽濾，將抽濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得浸膏。

1.3 生物活性測定

1.3.1 觸殺活性測試 挑選健康、大小一致的小菜蛾3齡幼蟲，放入用紗網(wǎng)制成的圓柱形容器，在供試藥液中浸泡10 s，迅速取出，并用干凈的吸水紙吸去多余藥液，然后將浸藥試蟲轉(zhuǎn)入墊有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，飼喂新鮮甘藍(lán)葉片。分別在處理后24、48、72 h記錄幼蟲的死亡情況。每組處理設(shè)10頭幼蟲，設(shè)6次重復(fù)。計(jì)算死亡率及校正死亡率[5，6]。

1.3.2 胃毒活性測試 采用載毒葉片法測試藥液對(duì)小菜蛾的胃毒活性[7]。將試蟲置于直徑6 cm的培養(yǎng)皿中，每皿1條幼蟲，停止進(jìn)食8 h后，夾取約1 cm2的新鮮甘藍(lán)葉片于供試藥液中浸漬3 s，取出待丙酮揮干后放入培養(yǎng)皿中飼喂。每個(gè)處理組設(shè)10頭試蟲，設(shè)6次重復(fù)，在處理后24、48、72 h后檢查中毒及死亡情況。計(jì)算其死亡率及校正死亡率。

1.3.3 拒食活性測定 非選擇性拒食作用測定采用葉碟法[8]。將新鮮甘藍(lán)葉片用圓形打孔器（直徑1.6 cm）打成葉碟，放入到供試藥液內(nèi)浸3 s，取出晾干后放入墊有濾紙（去離子水保濕）的培養(yǎng)皿（直徑6 cm）中，每個(gè)培養(yǎng)皿中放入1片處理過的葉碟，接入己停止進(jìn)食12 h的3齡小菜蛾。每處理設(shè)10個(gè)重復(fù)， 24 h和48 h后用坐標(biāo)紙測量取食葉面積，計(jì)算平均取食面積和拒食率。拒食率=（對(duì)照平均每頭取食量-處理平均每頭取食量）/（對(duì)照平均每頭取食量）×100%。

1.3.4 生長發(fā)育抑制作用 將直徑3 cm的甘藍(lán)葉在0.05 g/mL供試藥液浸漬3 s，取出晾干后放入墊有濾紙（去離子水保濕）的培養(yǎng)皿（直徑6 cm）中，然后接入已稱重的小菜蛾3齡幼蟲1頭，置于25 ℃，光照12L∶12D培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用50%丙酮作對(duì)照，設(shè)5次重復(fù)，分別在取食24 h和48 h后稱量小菜蛾幼蟲的體重，計(jì)算生長發(fā)育抑制率，然后換新鮮無毒的甘藍(lán)葉飼養(yǎng)，一直至化蛹，記錄蛹重和化蛹率[9，10]。生長發(fā)育抑制率=（對(duì)照組體重增加量-處理組體重增加量）/對(duì)照組體重增加量×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 觸殺作用

扁蓄乙醇提取物對(duì)小菜蛾3齡幼蟲具有一定的觸殺活性（表1），并且作用迅速，在供試藥液濃度為0.05 g/mL時(shí)，72 h校正死亡率為90.0%，室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明其對(duì)小菜蛾的LC50為0.011 80 g/mL。

2.2 胃毒作用

扁蓄乙醇提取物對(duì)小菜蛾3齡幼蟲有一定的胃毒活性（表2），在供試液濃度為0.05 g/mL時(shí)，72 h的校正死亡率僅為33.3%，胃毒作用較弱。

2.3 拒食作用

扁蓄乙醇提取物對(duì)小菜蛾2齡幼蟲的拒食活性不明顯（表3），在供試藥液濃度為0.05 g/mL時(shí)，24 h和48 h的拒食率分別為0.23%和-17.58%。

2.4 生長發(fā)育抑制作用

扁蓄乙醇提取物對(duì)小菜蛾2齡幼蟲在24 h內(nèi)無生長發(fā)育抑制作用（表4），但在48 h內(nèi)表現(xiàn)出了一定的抑制作用，抑制率為44.68%；化蛹率為81.31%（CK為86.43%），羽化率為89.28%（CK為94.86%）。

2.5 不同部位活性比較

扁蓄不同部位對(duì)3齡小菜蛾活性存在差異（表5），活性由高到低依次為葉、全草、根、莖。濃度為0.03 g/mL時(shí)，72 h校正死亡率分別為75.0%、73.3%、70.0%和40.0%。說明活性物質(zhì)主要分布在根和葉中。

2.6 提取溶劑選擇

準(zhǔn)確稱取l0.00 g扁蓄干粉6份，分別用10倍的正己烷、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醇、水浸泡24 h，超聲提取30 min，提取3次，提取率分別為1.17%、1.20%、2.30%、5.71%、6.77%、13.49%。6種溶劑的提取率從大到小為水、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、正己烷（表6）。殺蟲活性測定結(jié)果見表7，在6種不同提取溶劑中，扁蓄乙醇提取物的生物活性最高，綜合考慮提取率和活性，選擇乙醇為提取溶劑。

3 小結(jié)與討論

扁蓄乙醇提取物對(duì)小菜蛾的作用方式主要表現(xiàn)為觸殺作用，蟲體接觸供試藥液后，先是經(jīng)歷短時(shí)間劇烈擺動(dòng)，然后蟲體癱瘓、麻痹，部分蟲體不能恢復(fù)，直接死亡。死亡狀態(tài)蟲體成“C”形或“V”形；部分蟲體雖經(jīng)歷一段時(shí)間后還可以恢復(fù)，但取食量明顯減少或不吃直至死亡。說明藥物可能是通過試蟲表皮滲入體內(nèi)發(fā)揮作用。扁蓄的各部位（根、莖、葉以及全草）乙醇提取物的生物活性測定結(jié)果表明，對(duì)小菜蛾活性最強(qiáng)的為扁蓄葉的提取物，但與其全草比較，活性相差不大，而全草量大，易采易得。因此綜合考慮，選用其全草為原料。在6種不同提取溶劑中，扁蓄的乙醇提取物的生物活性最高，綜合考慮提取率和活性，選擇乙醇為提取溶劑。

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