黑龍江省西瓜細菌性果斑病防治藥劑的篩選

賈云鶴　王喜慶　付永凱　尤海波　劉思宇　趙會娟

摘要：為了豐富黑龍江省露地西瓜果斑病的防治藥劑和方法，通過平板抑菌試驗和種子消毒處理等方法對硫酸鏈霉素等17種藥劑進行篩選。結果表明，在平板抑菌試驗中，有噻霉酮等7種藥劑的抑菌圈i>20mm，抑菌效果較好；在種子處理試驗中篩選出3%雙氧水浸種30min和2000mg·L^-1噻霉酮浸種30min抑菌效果較好；雙氧水處理種子的發芽率和發芽勢為95.6%和12.7mm，噻霉酮處理種子的發芽率和發芽勢為97.8%和14mm；噻霉酮和雙氧水處理種子的發芽率分別比對照提高22.6%和20.4%，發芽勢分別比對照提高47.4%和33.7%。試驗篩選出一種新型藥劑噻霉酮，對黑龍江省露地西瓜果斑病菌的抑菌效果較好。

關鍵詞：西瓜；黑龍江??；果斑??；病原菌；防治藥劑

西瓜細菌性果實腐斑病，又稱西瓜果斑病、果腐?。˙aeterial Fmit Blotch，簡稱BFB），百姓俗稱陰皮病、尿炕病，是種傳細菌性病害，近年來由國外傳人中國。該病害發病、傳播迅速，危害嚴重，目前國內外尚沒有免疫品種，也缺乏特效的防治藥劑。

近年來，黑龍江省西瓜主產區果斑病爆發嚴重。以黑龍江省西瓜主產區雙城市為例，根據作者所在的國家西甜瓜產業技術體系哈爾濱綜合試驗站（黑龍江省農科院園藝分院西瓜研究室）的調查，雙城市2010-2014年果斑病的自然發病率分別為70%、60%、30%、15%、20%。

本試驗針對以上情況，對黑龍江地區露地西瓜的果斑病病原菌進行分離、純化，以分離得到的果斑病病原菌和當地主栽的露地西瓜品種為試材，期待篩選出適合防治黑龍江省西瓜果斑病的有效藥劑。

1.材料與方法

1.1黑龍江省露地西瓜果斑病病原菌的分離、純化

從黑龍江省露地西瓜主產區哈爾濱、雙城等地進行病樣采集。取樣部位為病瓜內表皮（西瓜皮白色的部分）。病原菌的分離純化方法為平板劃線法。

1.2黑龍江省露地西瓜果斑病的防治藥劑篩選

1.2.1多種藥劑的平板抑菌試驗本試驗應用的病原菌為雙城地區采集、分離的病原菌。應用的藥劑包括，1、抗生素5種：72%農用硫酸鏈霉素粉劑（華北制藥）、100萬單位獸用硫酸鏈霉素注射用粉劑（哈爾濱獸藥二廠）、90%新植霉素可濕性粉劑（德瑞豐）、2%春雷霉素水劑（華北制藥）、6%春雷霉素可濕性粉劑粉劑（山東立邦農化）；2、銅制劑4種：47%加瑞農可濕性粉劑（先正達），33.5%喹啉銅懸浮劑（浙江海正化工）、20%噻菌銅懸浮劑（浙江龍灣化工），53.8%氫氧化銅水分散顆粒（美國杜邦）；3、消毒劑3種：40%福爾馬林（廣州萬從化工）、30%雙氧水（山東盛通）、10%次氯酸鈉（青島興發）；4、酸劑2種：鹽酸（新光化工）、乙酸（煙臺三和化工）；5、新型藥劑3種：噻·硫（中國農科院植保所趙廷昌研究員提供）、溴硝醇（中國農科院蔬菜花卉所王懷松副研究員提供）、噻霉酮（西大華特產品）。共計17種藥劑。每種藥劑設3個濃度，每個濃度3次重復，清水為對照，進行平板抑菌試驗。紙碟為10mm，所以設定抑菌圈直徑（從紙碟的圓心開始測量）>20mm為抑菌效果較好的藥劑。藥劑濃度見表1，每個紙碟上用1000μL移液槍滴加藥液1滴（約200μL），數據取3次重復的平均值。

1.2.2種子處理藥劑篩選應用的西瓜種子品種為雙城當地主栽品種‘帝王花冠（無菌種子：種子浸提液平板培養48h無菌落生長確定為無菌種子），應用的病原菌為雙城地區采集、分離的病原菌。l0⁸cfu·mL^-1的菌液浸泡種子1h制備帶菌種子，瀝水后充分晾干。每個處理30粒種子，每種藥劑浸種設3個時間，每個處理3次重復。應用的藥劑及其濃度、劑型為：3%雙氧水、2000mg·L^-1硫酸鏈霉素粉劑、2000mg·L^-1噻霉酮粉劑、0.4%福爾馬林、2000mg·L^-1氫氧化銅水分散顆粒、2000mg·L^-1春雷霉素粉劑、2000mg·L^-1新植霉素可濕性粉劑。處理后漂洗3次，每次30min，每處理90粒種子加人100mL錐形瓶內加無菌水25mL，重復震蕩，離心，沉淀，再加3mL無菌水懸浮，吸取100μL涂板，28℃培養48h觀察帶菌量，>10個菌落為++++，6-10個菌落為+++，3—5個菌落為++，l～2個為+，0個為一。然后把90粒種子分成3份30粒，浸泡8h，29℃催芽48h，觀察48h發芽率和48h發芽勢（發芽長度，mm）。數據取3次重復的平均值。

2.結果與分析

2.1黑龍江省露地西瓜果斑病病原菌的分離、純化

從黑龍江省農科院園藝分院的露地西瓜試驗地和黑龍江省高效現代化大農業示范園區（雙城）的西瓜地塊采集病樣，采集部位都為西瓜內果皮。分離出西瓜果斑病病原菌4份，分別為H-hrb-1、H-hrb-2、H-so-1、H-se-2。經過致病性測定，H-hrb-1、H-sc-2對西瓜具有致病性（致病性測定的西瓜材料為園藝分院自育品種‘龍盛喜悅，2個菌株接種后7d西瓜的發病率分別為77%和69%，致病力較強）。以下皆采用H-se-2為試驗菌株。

2.2黑龍江省露地西瓜果斑病的防治藥劑篩選

2.21多種藥劑的平板抑菌試驗由圖l可以看出，和對照相比，除了噻菌銅和喹啉銅，其他藥劑都對果腐病菌有一定的抑制作用，抑菌效果隨著藥劑濃度的加大而增強。平板抑菌試驗篩選出7種抑菌圈直徑>20mm的有效藥劑及其濃度、劑型為：3%（濃度3）雙氧水（抑菌直徑26.7mm）、2000mg，L^-1（濃度3）硫酸鏈霉素粉劑（抑菌直徑26.0mm）、2000mg·L^-1（濃度3）噻霉酮（抑菌直徑25.7mm）、0.4%（濃度2）福爾馬林（抑菌直徑25.0m）、2000mg·L^-1（濃度3）氫氧化銅水分散顆粒（抑菌直徑24.0mm）、2000mg·L^-1（濃度3）春雷霉素粉劑（抑菌直徑23.3mm）、2000mg·L^-1（濃度3）新植霉素可濕性粉劑（抑菌直徑22.0mm）。

同一種藥劑我們應用了不同的劑型，從上述試驗可以看出，硫酸鏈霉素和春雷霉素粉劑的抑菌效果比注射劑和水劑好。上述7種藥劑及其濃度將被應用于后續的種子處理試驗。

將上述試驗篩選出的各種藥劑最佳濃度的抑菌效果進行比較，發現17種藥劑和清水對照相比，對果斑病菌的抑菌效果都達到極顯著差異。其中3%雙氧水、2000mg·L^-1硫酸鏈霉素粉劑、2000mg·L^-1噻霉酮、0.4%福爾馬林、2000 mg·L^-1氫氧化銅水分散顆粒、2000 mg·L^-1春雷霉素粉劑、2000mg·L^-1新植霉素可濕性粉劑這7種藥劑及其濃度與其他10種藥劑相比，抑菌效果差異達到極顯著水平，見圖2。

2.2.2種子處理藥劑篩選由表2可以看出，和對照相比，7種藥劑對果斑病菌都有明顯的抑制作用，并且抑菌作用隨著處理時間的增加而增強。

從圖3和圖4可以看出，除了新植霉素、氫氧化銅，其他5種藥劑在較高濃度、較長時間下對種子的發芽率和發芽勢都沒有明顯的影響。和對照相比，7種藥劑對西瓜種子的發芽率和發芽勢都有不同程度的促進作用，雙氧水、硫酸鏈霉素、噻霉酮、福爾馬林、春雷霉素5種藥劑處理西瓜種子的發芽率提高17.5%～27.6%，發芽勢提高9，7%～35.9%。7種藥劑中，2000 mg·L^-1噻霉酮處理種子30min、3%雙氧水處理種子30min，處理種子的表面和種仁的帶菌量都為一；處理種子的發芽率分別為97.8%和95.6%，對照發芽率為75.2%，噻霉酮和雙氧水處理種子的發芽率分別比對照提高22.6%和20.4%；處理種子的發芽勢分別為14mm和12.7mm，對照發芽勢為9.5mm，噻霉酮和雙氧水處理種子的發芽勢分別比對照提高47.4%和33.7%?？梢哉J為這兩種藥劑適用于被黑龍江省露地西瓜細菌性果斑病病原菌侵染的西瓜種子處理。

3.結論與討論

1）分離出黑龍江省露地西瓜果斑病病原菌4份，經過致病性測定，2份對西瓜具有致病性，分別是H-hrb-1、H-sc-2。為了確保平板抑菌試驗等后續試驗的真實性和準確性，必須對分離的病原菌進行致病性測定。

2）平板抑菌試驗及種子處理試驗的結果表明：雙氧水等7種藥劑都對雙城地區采集、分離的果斑病病原菌有較好的抑制作用（抑菌圈>20mm）。趙廷昌等研究表明1 000倍的72%農用鏈霉素和0.4%的福爾馬林對果斑病的抑菌效果較好；牛慶偉等研究表明0.4%的福爾馬林浸種lh對西瓜果斑病幼苗的果斑病防效達到100%，且無不良影響；何毅等研究表明2%春雷霉素400倍或以2%春雷霉素400倍搭配其他殺菌劑使用防治西瓜嫁接苗果斑病效果好。本研究結果與前人研究結果大體相似，但需要進一步在幼苗期果斑病的發病率上驗證。此外，篩選出了新型藥劑噻霉酮，噻霉酮不但抑菌效果較好，還對種子的發芽率和發芽勢有促進作用，與對照藥劑相比較發芽率和發芽勢分別提高了22.6%和47.4%。

3）帶菌種子經過藥劑處理后，播種長出幼苗的發病情況如何還有待進一步研究，噻霉酮對西瓜幼苗果斑病及成株期果斑病的防治效果還有待進一步驗證。