HPLC法測定西洋參不同部位中人參皂苷含量

朱 秋

(駐馬店市第一中醫院，河南 駐馬店 46300)

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HPLC法測定西洋參不同部位中人參皂苷含量

朱 秋

(駐馬店市第一中醫院，河南 駐馬店 46300)

目的：通過化學方法測定西洋參中人參皂苷的資源含量，確保西洋參中的人參皂苷資源被充分利用，為那些以中藥材為原料的制藥工業提供可靠數據[1-4]。方法：使用高效液相色譜法測定西洋參不同部位的人參皂苷含量。結果：該方法成功測定西洋參不同部位的人參皂苷成分含量。結論：高效液相色譜法準確、迅速、簡便，可作為評價人參屬植物質量的有效分析方法。

西洋參；人參皂苷；含量測定；產地差異

北美花旗參(西洋參)是多年生草本植物，原產于北美東北硬木森林[4-5]。西洋參的藥用價值主要是由于其含有人參皂苷的成分[6]，參的各個部位中都含有相關的成分，目前已知種類約有30多種[4]，種類比較復雜。單獨對某種西洋參進行人參皂苷的分析目前已經較為普遍[1]，但是對于西洋參不同部位的人參皂苷分析目前尚未見到。根據之前的研究數據和經驗，本次研究主要選擇測試3種皂苷的Rb1、Rc和Rg1在不同部位的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器與試藥Agilent 1100 Series高效液相色譜儀；色譜柱為德國Nucleosil-C18(4.6mm×150mm，5μm)；TGL-16g高速離心機，BUCH I旋轉蒸發器。乙腈、甲醇、正丁醇為色譜純；Milli Q超純水。

1.2 材料

西洋參產地東北吉林。樣品提取，干燥的根、莖、葉樣品通過植物粉碎和篩分以獲得均勻樣品，稱重以后，取3份，每份約1 500mg，精密稱定，用氯仿90mL脫脂，過濾，再用甲醇120mL提取24h，過濾，蒸干，水溶，然后在水飽和正丁醇狀態下萃取，回收溶劑，將正丁醇層提取物轉移到10mL量瓶中，用正丁醇定容至刻度線，備用[5-6]。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 標準曲線建立

精密稱定,取人參皂苷Rb1、Rc和Rg1適量,加甲醇制成濃度分別為0.984、1.020、0.992 g/L的溶液,作為對照溶液儲備液,密封置冰箱保存。主要檢測成分為人參皂苷，分別取對照品儲備液0.08、0.16、0.32、0.64、1.28 mL，用流動相定容到2mL，搖勻，從而得到一系列濃度的標準液。通過連續3次等量進樣，每次20μL，分析和記錄色譜數據，以對照品濃度( μg/L)為橫坐標(X)，對照品的峰面積為縱坐標(Y)，得到以下人參皂苷的回歸方程。根的各組分方程：Rb1:Y=3575.98X +8.09，R=0.9999；Rc:Y=3141.08X +18.11，R=0.9991；Rg1:Y=6101.07X-9.98，R=0.9997；莖的各組分方程:Rb1:Y=3489.98X-2.88，R=0.9996，Rc:Y=2971.69X +87.07，R=0.9997；Rg1:Y=5891.07X +1.97，R=0.9994；葉的各組分方程:Rb1:Y=2095.57X-76.91，R=0.9995；Rc:Y=2671.69X+17.98，R=0.9998；Rg1:Y=4891.85X +11.44 ，R=0.9991。

2.2 人參皂苷含量測定

在上述色譜條件下,分別進樣10μL,測定不同部位藥材中人參皂苷含量。人參藥材主根中人參皂苷Rb1含量較高,而Rc、Rg1含量相對較低,莖部位中，Rc較其他部位要高而Rb1高于葉中的含量卻明顯低于根部，同時Rg1也略高于其他部位；在葉部位中含量均較低，但是這可能與葉的材質有關，一些葉部位的提取率較低。

2.3 精確度和重復性測試

精確度采用6次重復的實驗數據采集，得到的可重復性數據為：0.22%、0.18%、0.19%、0.28%、0.33%、0.15%、0.21%、0.41%、0.42%，均處于較好的可控范圍內。重復性測試，通過同一批樣本不同時間點檢測，時間間隔為24、48、72h，RSD值為1.7%，屬于正常范圍。另外，對于樣本的回收率基本可以達到95%以上。

2.4 西洋參不同部位人參皂苷含量比較

每次將20μL樣本加入HPLC中，重復3次，取平均值進行比對。我們通過2次不同進樣量的測試，最終基本驗證了之前的數據，各部位的基本含量與10μL進樣量的數據基本可以進行比較歸納，具體數據見表1。

表1 不同部位人參皂苷的含量 (mg/g)

3 討論

人參皂苷是西洋參的重要有效成分，皂苷含量的高低直接決定了西洋參的品質和價格，也是工業制藥和科研的重要參考數據。已知人參皂苷有30余種，其結構均比較類似，都含有由30個碳原子排列成4個環的甾烷類固醇核，其中比較主要的是達瑪烷類型，包括人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2及糖苷基PD，Re、Rg1、Rg2、Rh1及糖苷基PT。由于結構極為類似，因此也給實際操作中的分析提出了更高要求。目前比較實用的方法為HPLC法檢測，也有其他檢測方法聯用，如HPLC-ELSD。無論哪種方法檢測，最主要的目的是為了分選出不同種類人參皂苷的含量。我們有選擇性地測試了3種主要的皂苷含量，最主要的目的是為了驗證不同部位的皂苷含量是否有差別。從實驗結果觀察，我們發現西洋參根部含有較高的人參皂苷Rb1，莖則含有較高的Rc，但是3個部位的Rg1含量都不高，有專家認為Rg1的含量可能在西洋參的蘆頭上含量較高。西洋參中其他種類的皂苷并沒有在此一一檢測。從數據上分析，我們發現不同產地的西洋參人參皂苷含量均有較大差別，這可以考慮到人參藥材中皂苷類成分含量受生長環境影響較大，西洋參的活性成分含量與其生產地的多種因素有關，如經緯度、無霜期、日光照射時間、降水量、土壤特性等；另外，采收季節、采收年限、干燥和保存的方法也有非常重要的影響作用。本實驗分析的3種部位人參皂苷含量具有顯著特征,可作為區分道地和非道地人參藥材的初步依據，同時也可以幫助區分市場上不同種類產品的優劣和真偽。目前我們對于西洋參皂苷含量與外界因素的相關性分析還處于初級階段，在下次建立回歸方程的時候，我們會考慮更多的其他因素，如，西洋參的具體產地，西洋參的參齡和保存方法等。這將為參類制品的種植、生產、制備和保存提供重要的參考依據。

[1] 蔡治綱,張莉偉,龔曉英.不同來源西洋參中人參總皂苷及人參皂苷Rb1含量的比較[J].中草藥,2002,33(2):121-122.

[2] 王旭.引種栽培西洋參中人參皂苷Rb1含量的比較分析[J].首都醫藥,2004,11(6):31-32.

[3] 陳軍輝,謝明勇,張中偉,等.西洋參皂苷的HPLC測定及不同提取方法比較[J].天然產物研究與開發,2006(18):120-125.

[4] 王玉堂.人參中人參皂苷的提取、分離和測定[D].長春：吉林大學,2008.

[5] 郜玉鋼,郝建勛,臧埔，等.高效液相色譜法測定農田人參中9種人參皂苷單體含量[J].食品科學，2012(2):189-193.

[6] 林美妤,劉海宇,劉金平，等.人參皂苷的化學研究進展[J].人參研究,2011,23(4):43-46.

(責任編輯：余 婷)

2015-04-14

朱秋(1972-)，男，河南省駐馬店市第一中醫院主管中藥師，研究方向為中藥鑒別與中藥制劑。

R284

A

1673-2197(2015)19-0023-02

10.11954/ytctyy.201519010