蒙藥花錨總雙苯吡酮提取工藝研究

邰巴達拉胡，娜 拉，拉喜那木吉拉，巴根那

(內蒙古民族大學，內蒙古 通遼 028000)

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蒙藥花錨總雙苯吡酮提取工藝研究

邰巴達拉胡，娜 拉，拉喜那木吉拉，巴根那*

(內蒙古民族大學，內蒙古 通遼 028000)

目的：確定蒙藥花錨雙苯吡酮提取工藝。方法：首先用單因素試驗法考察花錨雙苯吡酮提取的主要影響因素，然后采用正交試驗法，以花錨雙苯吡酮的量為指標，優化蒙藥花錨總雙苯吡酮提取的最佳工藝。結果：花錨雙苯吡酮提取的最佳工藝為乙醇濃度90%，料液比為1∶40，提取時間8h，提取量可達到13.826mg/g。結論：該實驗確定的最佳工藝簡便易行，提取率和提取量較高，可為花錨雙苯吡酮工業化生產提供參考依據。

花錨；雙苯吡酮；提取工藝

蒙藥花錨(HaleniacorniculataL. Cornaz.)，蒙藥名為希依日-地格達，是蒙醫傳統藥材。系龍膽科(Gentianaceae)花錨屬(Halenia)一年生植物的干燥全草[1]，生于山溝、林緣、林下、水池濕草地[2]，主要分布在大興安嶺林區各地以及蒙古、西伯利亞、遠東、歐洲等地[3]。該藥味苦，性平，效柔、膩，主要功能為退黃，平息“協日”，利膽，愈傷。臨床用于肝、膽熱，口苦，目黃，頭痛，高燒，尿黃，“協日”熱，肺熱，傷熱等疾病[4]。據文獻[5]報道，目前已從蒙藥花錨中分離得到了雙苯吡酮及其苷類、黃酮及其苷類、裂環烯醚萜類、三萜類和生物堿等類型成分，其中雙苯吡酮(xanthones)類化合物是龍膽科植物的主要化學成分，也是蒙藥花錨的主要成分之一，有苯并色原酮、呫噸酮、氧雜蒽酮等別名。是一種黃色的酚性化合物,植物中多為淡黃或無色的苷類形式存在[6-7]。本文采用正交試驗法，以總雙苯吡酮含量為指標，研究提取時間、溶劑量和乙醇濃度對蒙藥花錨中雙苯吡酮提取的影響，從中優化提取的最佳條件，為工業化生產提供參考依據。

1 實驗材料

UV-2501型紫外-可見分光光度計(島津)，Rotavapor R-210旋轉蒸發儀(瑞士)Vacuum Pump V-700 真空泵(瑞士)，ISO9001電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。蘆丁20086569(中國藥品生物制品檢定所)，亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉和乙醇等均為分析純。蒙藥花錨采集于內蒙古錫林郭勒盟東烏珠穆沁旗，經內蒙古民族大學蒙醫藥學院巴特爾教授鑒定為龍膽科(Gentianaceae)花錨屬(Halenia)一年生植物花錨(HaleniacorniculataL. Cornaz.)的干燥全草。

2 雙苯吡酮測定方法

2.1 蘆丁對照液制備

精密稱取蘆丁對照品5.0mg，置于10mL容量瓶中，加無水乙醇溶解，并用無水乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2 總雙苯吡酮溶液制備

稱取蒙藥花錨粉末10.0g，精密稱定，置于250mL圓底燒瓶中，加95%乙醇200mL，回流提取8h，濾過，濾液即為樣品液。

2.3 檢測波長掃描

分別取樣品液和對照液0.6mL，分別置于25.0mL和50.0mL容量瓶中，其余按線性關系考察操作。在400～800nm范圍內進行掃描，結果見圖1。

A為樣品液；B為對照液

2.4 標準曲線繪制

分別取對照液0、0.5、1.5、2.0、2.5、3.0mL，于50mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1.5mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1.5mL，搖勻，放置6min，加 4%氫氧化鈉20mL，加水至刻度，搖勻，放置20min后以第一管為空白對照參比按分光光度法，在510nm波長處測定吸光度，以吸光度為橫坐標，濃度為縱坐標，回歸方程為：y=0.083 7x+0.035 1，R2=0.999 3，線性范圍為2.5～60μg/mL。結果見圖2。

圖2 標準曲線

2.5 精密度試驗

取樣品液6份，每份0.6mL，按“2.4”項下測定其吸光度，測得吸光值的RSD為1.82%。

2.6 穩定性試驗

精密吸取樣品液0.6mL，置于25mL容量瓶中，按“2.4”項下測定其吸光度，每隔30min測定1次，連續3h，測得吸光值的RSD為1.96%。

2.7 重復性試驗

稱取蒙藥花錨粉末6份，每份5.0g，精密稱定，按“2.2”項下制備供試液。分別取供試液0.6mL，按“2.4”項下測定其吸光度，測得吸光值的RSD為1.94%。

2.8 加樣回收試驗

精密吸取樣品液6份，每份0.6mL，分別加對照品溶液0.6mL，其他試劑加入量及時間同“2.4” 項下操作。測定其吸光度，計算平均加樣回收率為99.87%，RSD為1.97%。

3 單因素試驗

3.1 測定方法

分別精密吸取單因素試驗和正交試驗項下溶液0.6mL，置于25.0mL容量瓶中，按“2.4”項下操作，測定其吸光度并計算總雙苯吡酮含量。

3.2 乙醇濃度對花錨總雙苯吡酮的影響

稱取花錨粉末5份，每份10.0g，于 500mL圓底燒瓶中，分別加入不同濃度的乙醇溶液(50%、60%、70%、80%、90%)200mL，回流提取8h，濾過。分別精密吸取濾液0.6mL，其他試劑加入量及時間同“2.4” 項下操作。測定其吸光度，計算其百分含量，結果見圖3。

圖3 乙醇濃度對花錨雙苯吡酮的影響

3.3 提取時間對花錨總雙苯吡酮提取率的影響

稱取花錨粉末5份，每份10.0g，于 500mL 圓底燒瓶中，分別加90%乙醇200mL，于同一溫度下分別回流提取4、6、8、10h，每份提取1次，濾過。分別精密吸取濾液0.6mL，按“2.4” 項下操作。測定其吸光度，計算其百分含量，結果見圖4。

圖4 提取時間對花錨總雙苯吡酮的影響

3.4 料液比對花錨雙苯吡酮含量的影響

稱取花錨粉6份，每份10.0g，于 500mL 圓底燒瓶中，分別加90%乙醇1∶5、1∶10、1∶20、1∶30、1∶40 ，回流提取8h，濾過。分別精密吸取濾液0.6mL，其他試劑加入量及時間同“2.4” 項下操作。測定其吸光度，計算其百分含量，結果見圖5。

圖5 溶劑量對花錨總雙苯吡酮提取率的影響

4 正交實驗

4.1 影響因素及水平

根據單因素試驗結果，確定乙醇濃度、料液比、提取時間作為考察因素，以雙苯吡酮含量為評價指標，用L9(34)正交表安排試驗，因素水平見表1。

表1 影響因素和水平

4.2 正交實驗結果與分析

稱取藥材，共計9份，每份10.0g，按正交試驗表安排實驗，以雙苯吡酮測得量為考察指標，結果如表2所示。

表2 提取工藝正交實驗設計

對表2進行數據處理，由直觀分析可知，以總黃酮含量為評價指標，主要因素依次為提取時間、料液比、乙醇濃度，最佳工藝為A3B2C2。花錨總雙苯吡酮提取的最佳工藝為：乙醇溶劑濃度為90%，提取時間為8h，料液比1∶40，提取量可以達到13.826mg/g。為確認是否為雙苯吡酮，對提取物進行理化鑒別。

5 花錨雙苯吡酮的定性鑒別

按照優化提取工藝得到的花錨總雙苯吡酮通過如下幾種鑒別實驗進行定性研究：①濃氨水反應：取該樣品溶液點滴在濾紙上，將濾紙在氨水上方蒸熏0.5min，立即置于紫外光下觀察，呈明顯的黃褐色熒光斑點；②AlCl3反應：取樣品溶液點滴在濾紙上，滴加1% AlCl3乙醇溶液，風干后在可見光下觀察，呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點；③乙酸鎂反應：取樣品溶液點滴在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，風干后在紫外光下觀察，呈黃色斑點；④鹽酸-鎂粉反應：取乙醇提取液1mL于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數滴(1次性加入)，在泡沫處呈橙黃色。

6 討論

從方法學考察結果看，在實驗條件下蘆丁具有良好的線性關系，精密度、準確度和穩定性均較高，可作為蒙藥花錨總雙苯吡酮含量測定的依據?；ㄥ^總雙苯吡酮提取的最佳工藝為：乙醇溶劑濃度為90%，提取時間為8h，料液比1∶40，提取量可以達到13.826mg/g。通過理化鑒別實驗進一步驗證，優化工藝條件下得到的花錨提取物主要為雙苯吡酮。

[1] 內蒙古衛生廳.內蒙古蒙藥材標準[S].赤峰:內蒙古科學技術出版社,1987:418.

[2] 占布拉·道爾吉.蒙醫正典[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社,2006:227.

[3] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準·蒙藥分冊[S].北京:中國醫藥科技出版社,1998:45.

[4] 內蒙古自治區革命委員會衛生局.內蒙古中草藥[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社,1972:104.

[5] 中華本草編委會.中華本草·蒙藥卷[M].上海：上?？茖W技術出版社,2004:157.

[6] 譚沛,劉永隆.植物口山酮貳類化合物[J].天然產物研究與開發,1995,7(1):45-54.

[7] 馬昌.山酮在植物中的分布及其藥理作用[J].安徽農業科學,2009,37(31):15244-15245.

(責任編輯：余 婷)

Study on the Extraction Technology of Total Xanthones fromHaleniaCorniculata

Taibadalahu, Nala, Laxinamujila, Bagenna

(Inner Mongolia University For The Nationalities, Tongliao 028000,China)

Objective:To optimize the extraction process of total xanthones fromHaleniacorniculata. Methods:The single factor test was used to study the main factors affecting the extraction of total xanthones from Halenia corniculata,then With the amount of total xanthones as index,the optimum extraction process of total flavonoids from Halenia corniculata was optimized by orthogonal test.Results:The optimum process of total xanthones from Halenia corniculata was ethanol concentration 90%,the ratio of solid to liquid was 1∶40,extraction time 8 h.extraction rate can reach 13.826mg/g. Conclusion:The optimum process is simple,the extraction rate and content is higher,it can provide some reference for the industrialproduction of Halenia xanthone.

Haleniacorniculata;Xanthones;Extraction Process

2015-04-23

國家自然科學基金項目(81360673)；內蒙古民族大學校級研究生資助項目(NMDSS1432)

邰巴達拉胡(1988-)，男，蒙古族，內蒙古民族大學碩士研究生，研究方向為蒙藥與方劑學。

巴根那(1960-)，男，博士，內蒙古民族大學教授、博士生導師，研究方向為蒙藥與方劑學。

R284

A

1673-2197(2015)19-0016-03

10.11954/ytctyy.201519008