白藜蘆醇對大鼠膠原誘導性關節炎抑制作用及機制研究

蔣 瑩，劉芳蘭

(江西醫學高等專科學校，江西 上饒 334000)

?

白藜蘆醇對大鼠膠原誘導性關節炎抑制作用及機制研究

蔣 瑩，劉芳蘭

(江西醫學高等專科學校，江西 上饒 334000)

目的：研究白藜蘆醇(RES)對大鼠膠原誘導性關節炎(CIA)的作用及其機制。方法：建立牛Ⅱ型膠原蛋白大鼠CIA模型，測定大鼠足爪炎癥腫脹度，HE染色對關節組織進行檢查，ELISA法檢測血清中炎癥因子IL-6、TNF-α水平。結果：灌胃給予RES能減輕CIA大鼠的關節炎癥狀，降低血清中IL-6、TNF-α水平，且呈現劑量依賴性趨勢(P<0.05或P<0.01)；HE檢查發現RES可改善局部關節炎癥狀。結論：RES對CIA大鼠具有治療作用，該機制可能與其調節CIA大鼠異常免疫功能有關。

膠原性關節炎；白藜蘆醇；炎癥；免疫功能

類風濕性關節炎是以慢性、對稱性、多滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現，尚未明確病因的全身性炎癥性自身免疫炎性疾病[1]。目前，類風濕性關節炎的治療以迅速緩解疼痛癥狀為主，但其副作用較強，有一定的局限性。我國傳統中藥具有毒副作用小等特點，在類風濕性關節炎的治療方面有廣泛的應用前景。白藜蘆醇(RES)是一種多酚類化合物，其生物學功能主要有抗腫瘤、抗菌消炎、抗氧化、抗自由基等。目前針對RES的研究熱點之一是其抗炎作用。本文研究RES對類風濕關節炎是否具有治療作用，初步探討其作用機制。

1 材料與儀器

白藜蘆醇(純度>80%，湖南省洪江華光生物有限責任公司，批號：20130205)；BCA蛋白定量試劑盒(Pierce公司)；牛II型膠原、大鼠TNF-α、IL-6 ELISA檢測試劑盒(Sigma公司)；弗氏不完全佐劑(美國Sigma公司)。實驗動物：健康雄性4月齡SD大鼠，體重250～275g,由江西中醫藥大學實驗動物中心提供,標準環境飼養，許可證號SCXK(贛)2012-0016。

2 方法

2.1 實驗分組及給藥方案

將SD大鼠隨機分為6組：正常組，CIA模型組，RES低劑量組(20mg·kg-1)、中劑量組(40mg·kg-1)、高劑量組80mg·kg-1)和陽性對照組(布洛芬10mg·kg-1)。各用藥組于致炎后第21～35天灌胃給藥，每天1次，正常組和CIA模型組灌胃給予等容量的0.5%羧甲基纖維素鈉。

2.2 大鼠CIA模型制備與評價[3]

牛II膠原500μg溶于0.05mol·L-1醋酸0.2mL中，與等體積弗氏完全佐劑混合充分，注射至大鼠尾根部皮下。初次致敏后第21天，再次大鼠尾根部皮下注射同體積試劑。每日觀察關節皮下結節、紅腫程度等情況。評價標準：4分：全部足爪腫脹；3分：踝關節以下的足爪腫脹；2分：足趾和趾關節有腫脹；1分：趾關節有紅腫；0分：無紅腫。

2.3 足爪容積測定及病理檢查

足爪儀測定致炎前每只小鼠左后足容積，自第21 天起，每4天測定1次相應足容積，腫脹度=(Vt-Vn)/Vn×100%，Vn指模型前足容積，Vt指模型后足容積。第35天處死小鼠后，剪取左踝關節制病例切片待查。

2.4 血清中炎性因子的檢測

第1次免疫后35天麻醉大鼠，眼底靜脈叢取血，分離取血清，并按照ELISA試劑盒說明操作，檢測血清中IL-6、TNF-α水平。

2.5 統計學處理

3 結果

3.1 RES對大鼠多發性關節炎指數的影響

RES可劑量依賴性地抑制CIA大鼠繼發性足腫脹，其足爪腫脹度明顯輕于模型組，差異具有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，見表1。

3.2 病理切片觀察

常規HE染色病理切片顯微鏡檢發現：健康對照組滑膜關節結構完整，關節軟骨表面完整，腔內無滲出液，滑膜組織正常；CIA模型組大鼠鏡下可見滑膜關節結構破壞，關節間隙狹窄，可見炎性細胞浸潤，并且伴有血管翳形成。CIA陽性對照組可見滑膜關節結構較完整，關節間隙清晰。見圖1。

表1 RES對大鼠多發性關節炎指數的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

A:健康對照組；B:CIA模型組；C:CIA陽性藥物組

3.3 RES對炎性因子表達的影響

經ELISA法檢測，相較于正常組，CIA模型組炎性因子IL-6、TNF-α的表達明顯增加，而RES給藥組可呈劑量依賴性地抑制促炎因子的表達，見表2。

表2 各組大鼠血清炎性因子水平

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

4 討論

本研究觀察了RES對各實驗組大鼠體重的影響。經RES治療35天后，正常對照組、CIA模型組、CIA陽性對照組、及RES高、中、低劑量組大鼠平均體重比較發現：各實驗組兩兩比較平均體重均無統計學差異(P>0.05)，表明RES對SD大鼠無明顯毒副作用。此外，已經出現關節炎癥狀的CIA大鼠使用RES處理35天，其關節炎指數、足爪容積及滑膜組織病理評分與模型組比較明顯下降，與陽性對照藥物布洛芬比較，下降稍緩，提示RES對CIA大鼠的關節炎有抑制作用，其作用強度不及布洛芬。本研究首次通過實驗動物模型顯示RES對CIA大鼠的關節炎有抑制作用，機制可能與其調節CIA大鼠異常免疫功能有關。

[1] ETTESJO H,NORDSTROM E,STROM H,et a1.Synovial fluid cytokines in patients with rheumatoid arthritis or other arthritis lesions[J].Scand J Immunol,1998,48(3):285-292.

[2] ZHENG WF,CAO XW,GU Q,et al.Antitumor acivity of daphnodorins from Daphen genkwa roots[J].Int Immunopharmacol,2007,7(2):128-134.

[3] 李洪忠,萬敬員,張力,等.積雪草苷對小鼠膠原誘導性關節炎的抑制作用[J].藥學學報,2007,42(7):698-703.

[4] WARZECHA Z,DEMBINSKI A,CERANOWICZ P,et al．Ischemic preconditioning inhibits development of edematous cerulein-induced pancreatitis：involvement of cyclooxygenases and heat shock protein [J].World J Gastroenterol,2005,11(38):5958-5965.

(責任編輯：魏 曉)

2015-04-24

蔣瑩(1985-)，女，江西醫學高等專科學校助理實驗師，研究方向為生理學。

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0014-02

10.11954/ytctyy.201519007