無梗五加果實抗疲勞活性研究

管美玉，劉玉強，才 謙，劉禹彤，曾申磊

(遼寧中醫藥大學 藥學院,遼寧 大連 116600)

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無梗五加果實抗疲勞活性研究

管美玉，劉玉強，才 謙*，劉禹彤，曾申磊

(遼寧中醫藥大學 藥學院,遼寧 大連 116600)

目的：研究無梗五加果實各提取物的抗疲勞作用，為無梗五加的廣泛應用提供依據。方法：采用小鼠力竭游泳實驗，考察連續灌胃無梗五加果實提取物2周對小鼠抗疲勞能力的影響，并對給藥后小鼠體內血乳酸、血尿素氮、肝糖原和肌糖原的變化進行檢測。結果：無梗五加果實提取物能夠延長小鼠力竭游泳時間、降低小鼠運動后的乳酸堆積和血尿氮的生成,增加肝糖原、肌糖原的儲備量。結論：無梗五加果實具有抗疲勞作用，尤以無梗五加果實醇提物抗疲勞作用最顯著。

抗疲勞；無梗五加果實；血乳酸；血尿素氮；肝糖原；肌糖原

無梗五加[Acanthopanaxsessiliflorus(Ruqr.et Maxim)Seem.]又名短梗五加、烏鴉子，主要分布于東北、華北、陜西等地，與刺五加同為五加科(Araliaceae)五加屬植物，刺五加具有調節免疫、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老功效[1]。并且同科屬植物藥理作用有很多相似之處，馮穎等[2]曾在研究中提到無梗五加果實多糖具有抗疲勞作用，但對無梗五加果實醇提物抗疲勞作用缺乏研究，本研究采用小鼠力竭游泳實驗分別對無梗五加果實乙醇提取物和2種不同提取方法所得到的多糖的抗疲勞活性進行了研究，初步明確無梗五加果實抗疲勞作用及其作用機理,為無梗五加果實抗疲勞的藥理作用的進一步開發利用奠定基礎。

1 儀器和試藥

1.1 試藥

無梗五加果實購自遼寧省丹東農業科學院，由遼寧中醫藥大學藥用植物教研室王冰教授鑒定為Acanthopanaxsessiliflorus(Ruqr.et Maxim)Seem.的干燥果實。1，6-二磷酸果糖購自大連美侖生物技術有限公司(批號：20130921)。

1.2 動物

昆明種小鼠，SPF級，體重18～22g，雄性，由遼寧長生生物技術有限公司提供，許可證號：SCXK(遼)2010-0001 。

1.3 儀器和試劑

RE-52C型旋轉蒸發儀(鞏義市予華儀器有限責任公司)；酶標儀(DNM9602G型號，北京普朗公司)；萬分之一克電子天平(上海越平科學儀器有限公)；低溫冷凍離心機(TGL-16，大連松譜瑞特貿易公司)冷凍干燥機(LGJ-10壓蓋型，北京博醫康實驗儀器有限公司)；數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)；101型電熱鼓風干燥箱(天津泰斯特儀器有限公司)。尿素氮試劑盒購自上海科興商貿有限公司(批號：201409)；血乳酸試劑盒購自上海科興商貿有限公司(批號：201409)；肝糖原試劑盒購自上海科興商貿有限公司(批號：201409)；肌糖原試劑盒購自上海科興商貿有限公司(批號：201409)。

2 方法

2.1 無梗五加果實各提取物制備

2.1.1 乙醇提取物制備 干燥的無梗五加果實粉末，加80%乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，合并提取液，濃縮至1.25g/mL,1mL無梗五加果實乙醇提取液相當于1.25g生藥。

2.1.2 多糖1制備 醇提后的果實殘渣自然晾干后，以10倍的水進行回流提取3次，每次2h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至250mL，加入一定量95%乙醇使含醇量達到80%，靜置放置24h，除去上層溶液，留下層多糖沉淀，然后將下層沉淀濃縮一定程度后進行冷凍干燥，得棕色的無梗五加多糖1，1g多糖1相當于14.58g生藥。

2.1.3 多糖2制備 干燥的無梗五加果實粉末，以10倍量水進行回流提取3次，每次2h，合并提取液，濾過、減壓濃縮至600mL,加入一定量95%乙醇使含醇量達到80%，靜置放置24h，除去上層溶液留下層多糖沉淀，然后將下層沉淀濃縮一定程度后進行冷凍干燥，得棕色的無梗五加多糖2，1g多糖2相當于11.90g生藥。

2.2 動物分組與給藥

將實驗動物分為8組，每組10只，分別為空白組(蒸餾水)，陽性對照組(1,6-二磷酸果糖0.5g/(mL·d))，無梗五加果實醇提物高劑量組(0.58g/(mL·d))、無梗五加果實醇提物低劑量組(0.29g/(mL·d))、多糖1高劑量組(800mg/(kg·d))、多糖1低劑量組(400mg/(kg·d))、多糖2高劑量組(980mg/(kg·d))、多糖2低劑量組(490mg/(kg·d))，給藥體積為0.2mL/(10g·d)，給藥方式均為灌胃給藥，并且保證給藥各組生藥量相等(陽性組除外)，每日給藥1次，連續給藥2周。

2.3 測定指標

2.3.1 力竭游泳實驗[3-4]末次給藥30min后，將小鼠尾巴系上一塊質量為2g的鉛塊，將小鼠置于水深30cm的游泳箱中，水溫控制在(25±2)℃左右，強迫小鼠游泳直到力竭，以小鼠全身沒于水面以下，8s內不能浮出水面即為力竭，記錄開始游泳至力竭的時間，為小鼠力竭游泳時間，計算給藥后各組小鼠平均游泳時間。

2.3.2 血乳酸(LAC)和血清尿素氮(BUN)的含量測定 末次給藥30min后，將小鼠尾巴系上一塊質量為2g的鉛塊，將小鼠置于水深30cm的游泳箱中，水溫控制在(25±2)℃左右，游泳30min，出水休息30min 后立即摘眼球取血，4℃下靜置1h后，5 000r·min-1離心15min，取血清，按ELISA試劑盒要求測定小鼠給藥后血清BUN、LAC的含量。

2.3.3 肝糖原和肌糖原的含量測定[5]同“2.3.2”操作，出水休息30min后立即脫頸椎處死，取肝臟和大腿肌肉并用生理鹽水清洗后，用濾紙吸干，分別稱取小鼠肝臟和大腿肌肉約60mg，加入一定量的PBS(PH 7.4)，用勻漿器將標本勻漿化，離心20min左右(2 000～3 000r·min-1)。仔細收集上清液，按照ELISA試劑盒要求測定小鼠給藥后肝糖原、肌糖原的含量。

2.4 統計學分析

3 結果

3.1 無梗五加果實各提取物對小鼠力竭游泳時間的影響

與空白組比較無梗五加果實醇提物、多糖1、多糖2、陽性藥均能延長小鼠力竭游泳時間，其中醇提物高劑量組、多糖2高低劑量組、陽性藥組能顯著延長小鼠力竭游泳時間，差異有統計學意義(P<0.05)，詳見表1。

表1 無梗五加果實各提取物對小鼠力竭游泳時間的影響

注：與空白組比較，*P<0.05。

3.2 無梗五加果實各提取物對小鼠體內血乳酸和血尿素氮水平的影響

與空白組比較無梗五加果實醇提物高低劑量組、多糖1高低劑量組、多糖2高低劑量組、陽性藥組均能顯著降低小鼠運動后乳酸的積累量和降低小鼠運動后血尿素氮的生成，差異有統計學意義(P<0.05)，詳見表2。

3.3 無梗五加果實各提取物對小鼠體內肝糖原、肌糖原的影響

與空白組比較，無梗五加果實醇提物高低劑量組、多糖1高低劑量組、多糖2高低劑量組、陽性藥組均能增加小鼠運動后體內肝糖原、肌糖原的儲備量。其中無梗五加果實醇提物高劑量組、無梗五加果實多糖2高劑量組及陽性藥組能極顯著同時增加小鼠運動后體內肝糖原、肌糖原的儲備量(P<0.01)，具體數值見表3。

表2 無梗五加果實各提取物對血乳酸和血尿素氮的影響

注：與空白組比較，*P<0.05。

表3 無梗五加果實提取物對肝糖原、肌糖原的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

疲勞是由運動引起的機體一系列生化指標改變而導致的肌肉力量的降低。傳統對運動疲勞產生機制的認識主要在于能量耗竭學說、代謝產物堆積學說、內環境穩態失調學說、機體突變理論、神經疲勞學說和自由基學說[6],因此對疲勞的評價方法應以耐力實驗和生化指標為主。耐力實驗主要包括運動跑臺、爬桿和游泳[7]。生化指標包括血乳酸、血尿素氮、肝糖原、肌糖原等。根據1996年頒布的《保健食品功能學評價程序和檢測方法》,如果14項或1項以上的耐力運動試驗(負重游泳和爬桿試驗)和2項或2項以上的生化指標(血乳酸、血清尿素氮、肝糖原、肌糖原等)結果呈陽性,就可以得出受試藥物具有抗疲勞活性。

本實驗主要考察的是負重游泳實驗、血乳酸、血尿素氮、肝糖原、肌糖原5項指標。研究發現，無梗五加果實各提取物能延長小鼠力竭游泳時間、降低小鼠運動后的乳酸堆積和血尿氮的生成、增加肝糖原、肌糖原的儲備量，其中以無梗五加果實醇提物抗疲勞作用最顯著。但對于抗疲勞的機制尚不明確，有待進一步深入研究。

[1] 王祥.中藥刺五加藥理作用的研究進展[J].求醫問藥，2012,10(5):320-321.

[2] 馮穎,孟憲軍,王建國,等.無梗五加果多糖組成及生物活性的研究[J].食品科學，2008,29(4):378-380.

[3] 張穎,張立木,李同德,等.紫荊葉對模型小鼠的消炎鎮痛及耐缺氧抗疲勞作用的研究[J].中國藥房，2009,20(36):2817.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學 [M]. 第2版.北京:人民衛生出版社，2006:717.

[5] 叢登立,王浩天,高笑一,等.刺五加果的抗疲勞作用[J].吉林大學學報，2010,36(5):891-893.

[6] 李曉莉,王斌,劉架麟.枸杞多糖對小鼠耐常壓缺氧能力的影響[J].營養學報，2000(4):337-340.

[7] BONGIOVANNI,LGANDHAGBARTH,K-E.Tonic vibration reflexes elicited during fatigue from maximal voluntary contractions in man [J].Journal of Physiology Online,1990,423(1):1-14.

(責任編輯：宋勇剛)

Study on the Anti-fatigue Effect of Acanthopanax Sessiliflorus Fruits

Guan Meiyu,Liu Yuqiang,Cai Qian*,Liu Yutong,Zeng Shenlei

(College of Pharmacy,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600，China)

Objective:To study on the anti-fatigue effect of the extract of Acanthopanax sessiliflorus fruits,to provide the basis for the wide application of Acanthopanax sessiliflorus.Methods:Exhaustive swimming test were employed to evaluate anti-fatigue effect of extracts of Acanthopanax sessiliflorus fruits in mice,extract orally administraded for two weekends consecutively.Further,lactic acid level and urea nitrogen level were examined,and hepatic gly-Cogen and muscle glycogen level after swimming were determined.Results:The extract of Acanthopanax sessiliflorus fruits extended swimming time,lactic acid level and urea nitrogen level were decrease-d,hepatic glycogen and muscle glycogen level were increased after Treatment.Conclusion:Acanthopanax sessiliflorus fruits have obvious anti-fatigue effects.the alcohol extract the of Acanthopanax sessiliflorus fruits showed more remarkable anti- fatigue.

Anti-fatigue;Acanthopanax Sessiliflorus Fruits; Blood Lactic Acid;Blood Urea Nitrogen;Hepatic Glycogen;Muscle Glycogen

2015-04-17

管美玉(1989-)，女，遼寧中醫藥大學碩士研究生，研究方向為中藥化學。

才謙(1972-)，女，遼寧中醫藥大學教授，研究方向為中藥化學和中藥炮制學。E-mail：caiqianmail@sina.com

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0010-03

10.11954/ytctyy.201519005