雅解沙把對小鼠同種被動皮膚過敏的影響*

王維麗，段小花，張 超，陳 普，陳清華，鄭 進

(云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650000)

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雅解沙把對小鼠同種被動皮膚過敏的影響*

王維麗，段小花，張 超，陳 普，陳清華，鄭 進△

(云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650000)

目的 觀察雅解沙把對卵蛋白(OVA)誘導的小鼠同種被動皮膚過敏反應(PCA)及血液免疫球蛋白E(IgE)的影響。方法 Balb/c小鼠隨機分為正常組、模型組、撲爾敏組、雅解沙把低劑量組和雅解沙把高劑量組。給予相應藥物灌胃，采用OVA皮下注射方式致敏，制備大鼠OVA 抗體血清，并分別注射各對應組的抗體血清，進行被動致敏48 h后，各組小鼠尾靜脈注射對應組的0.5%伊文思蘭溶液，觀察各組小鼠耳廓藍染情況，并測定吸光度(OD值)。末次致敏后第分離血清，采用武漢華美IgE酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。結果 與正常組比較，模型組的OD值明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，雅解沙把高劑量組的OD值明顯降低(P<0.05)。與模型組比較，撲爾敏組、雅解沙把高劑量組小鼠血清的IgE含量顯著性的降低，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，雅解沙把低劑量組有降低小鼠血清IgE含量的作用趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論 雅解沙把具有抗過敏作用，機制可能與抑制Ⅰ型變態(tài)反應有關。

雅解沙把；被動皮膚過敏；IgE

傣醫(yī)學歷史悠久，有自己的醫(yī)學理論體系，是我國傳統(tǒng)醫(yī)學的重要組成部分。傣族人民在長期的實踐中，形成了“四塔”(地、水、火、風)“五蘊”(色、識、受、想、行)為核心的醫(yī)學理論。四塔構成世界萬物和人體最基本的物質(zhì)元素，五蘊是人體各種物質(zhì)和精神要素的總和，只有四塔五蘊平衡才能保持健康。而“雅解”也是傣醫(yī)中重要、特色的理論，主張未病先治，先解后治。傣藥“雅解沙把”(百解膠囊)在臨床有良好治療效果，在傣族地區(qū)廣泛使用，主要有清熱解毒，保肝護腎，解酒，延年益壽等作用。雅解沙把在治療食物，藥物引起的不適及濕疹等現(xiàn)象提示其可能有抗過敏的作用[1-3]。

PCA是一種常用的測試藥物過敏的經(jīng)典方法，具有方法簡單、操作簡便、高靈敏的特點[4]。在本試驗中將用PCA建立Ⅰ型變態(tài)反應模型，并測定IgE的含量，進一步明確雅解沙把的作用機制，為傣醫(yī)理論更好地指導臨床用藥打下基礎。

1 實驗材料

1.1 動物 Balb/c小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，(昆明醫(yī)學院實驗動物科，批準文號：SCXK 滇P0005-0008)

1.2 藥品與試劑 藥物：卵蛋白(Sigm，批號：9006-s-9-1)，撲爾敏(昆明振華制藥廠，批號：20130507)，雅解沙把(百解膠囊)，滇藥制字(Z)20122252，云南省西雙版納州傣醫(yī)院院內(nèi)制劑，按人和動物的體表面積計算法，計算得出“雅解沙把”小鼠口服給藥的等效量為0.39 g生藥/kg，再參考前期完成的“雅解沙把”抗炎、解酒等實驗的有效(P<0.05)劑量為9倍臨床等效劑量，故本實驗選擇3.51 g生藥/kg，0.39 g生藥/kg為高、低劑量。

試劑：伊文思藍(中國醫(yī)藥集團上海試劑公司，批號：20120714)、磷酸(重慶川東有限公司試劑廠，批號：20051017)、丙酮(上海申博化工有限公司，批號：0607101)、氫氧化鉀(天津市化學試劑三廠，批號：20120925)、氫氧化鈉(成都化學試劑廠，批號：050918)、氯化鋁(廣東臺山化工廠生產(chǎn)，批號：100604)。

1.3 藥物制備 雅解沙把實驗用藥的制備 雅解沙把生藥粉末250 g，用無紡布袋分裝后分3次包煎，將3次濾液合并，濃縮成稠浸膏，置冰箱中冷藏保存?zhèn)溆茫R用前按需要現(xiàn)配至所需濃度。

氫氧化鋁凝膠的制備 氫氧化鋁凝膠的配制：稱取無水Al(Cl)31.7 g緩慢加入25 mL蒸餾水中，不斷攪拌使其溶解，在不斷攪拌下緩慢滴加10 mol/L NaOH至PH8-9，終濃度約4%。

致敏液的制備 取OVA(用生理鹽水配成20 mg/mL)，再與氫氧化鋁凝膠以1：1混合成相應組別的致敏乳液。

激發(fā)液的制備 取20 mg/mL OVA與1%伊文思蘭溶液以1：1混合成激發(fā)溶液。

2 實驗方法

2.1 抗體的制備 致敏：取Balb/c小鼠100只，分為5組，分別為正常組、模型組、撲爾敏組、雅解沙把低劑量組和雅解沙把高劑量組。除正常組外每組小鼠皮下注射OVA致敏乳液，0.3 mL/只，隔天1次，共注射3次，同時連續(xù)以0.1 mL/10 g灌胃給以蒸餾水、撲爾敏、雅解沙把低劑量和雅解沙把高劑量7天。末次致敏后第14天小鼠摘眼球取血，3000轉(zhuǎn)/分離心10 min，分離血清，同組小鼠血清混合，分裝于EP管中-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 模型組的制備 取Balb/c小鼠40只，分為4組，分別為正常組、10 μL組、20 μL組和30 μL組。以0.3%戊巴比妥鈉麻醉，兩只耳廓皮下分別注射對應組所需的抗體血清，進行被動致敏。被動致敏48 h后，各組小鼠尾靜脈注射對應組的0.5%伊文思蘭溶液：注射量均為0.3 mL/只進行激發(fā)。激發(fā)后30 min脫頸處死小鼠，剪下雙耳，每對耳朵用0.75 mL 1mol/L KOH溶液浸泡，在37℃恒溫過夜消化，次日加3.5 mL 0.6 mol/L 磷酸丙酮(5：13)混合液，振搖，3500 r/min，離心15 min，上清液在630 nm波長處測定其吸光度(OD值)。

2.3 被動致敏與激發(fā)[5]另取Balb/c小鼠50只，雌雄各半，如上分為5組，以0.3%戊巴比妥鈉麻醉，兩只耳廓皮下分別注射各對應組的抗血清20 μL，進行被動致敏。被動致敏48小時后，各組小鼠尾靜脈注射對應組的0.5%伊文思蘭溶液：注射量均為0.3 mL/只進行激發(fā)。激發(fā)后30 min脫頸處死小鼠，剪下雙耳，每對耳朵用0.75 mL 1mol/L KOH溶液浸泡，在37℃恒溫過夜消化，次日加3.5 mL0.6 mol/L 磷酸丙酮(5：13)混合液，振搖，3500 r/min，離心15 min，上清液在630 nm波長處測定其吸光度(OD值)。

2.4 小鼠血清IgE檢測 取Balb/c小鼠100只，如上分為5組。除正常組外每組小鼠皮下注射OVA致敏乳液，0.3 mL/只，隔天一次，共注射3次，同時連續(xù)以0.1 mL/10 g灌胃給以蒸餾水、撲爾敏、雅解沙把低劑量和雅解沙把高劑量7天。末次致敏后第14天小鼠摘眼球取血，3000 r/min分離心10 min，分離血清，采用武漢華美IgE酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。

3 結果

3.1 模型的制備 20 μL和30 μL抗體血清耳廓皮下注射均可制備小鼠同種被動皮膚過敏模型(P<0.05，0.01)，結果見表1。

表1 小鼠同種被動皮膚過敏模型的制備

注：與正常組比較：△P<0.05，△△P<0.01

與正常組相比，模型2、3均具有顯著性意義，考慮到30μl抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動皮膚過敏模型太嚴重，藥物難以糾正，所以之后實驗均選用20μl抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動皮膚過敏模型。

3.2 雅解沙把對小鼠同種被動皮膚過敏的影響 見表2。

表2 雅解沙把對小鼠同種被動皮膚過敏的影響

注：與正常組比較：△P<0.05；與模型組比較：*P<0.05；與正常組比較，模型組的OD值明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，雅解沙把高劑量組的OD值明顯降低(P<0.05)。

表3 雅解沙把對卵蛋白(OVA)誘導的小鼠同種被動皮膚過敏IgE含量的影響

注：與正常組比較：△P<0.05，與模型組比較：*P<0.05

由表3可見與正常組比較，卵蛋白誘導的小鼠同種被動皮膚過敏模型的血清的IgE含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示模型組造模成功。與模型組比較，撲爾敏組、雅解沙把高劑量組小鼠血清的IgE含量顯著性的降低，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，雅解沙把低劑量組有降低小鼠血清IgE含量的作用趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

由上述可以得出：與模型組比較，雅解沙把高劑量組能顯著性降低小鼠血清IgE的含量，提示其具有一定的抗過敏的作用，尤其對于以IgE為主的Ⅰ型變態(tài)反應具有較好的治療作用。

圖1 A為正常組小鼠，B為模型組小鼠，C為撲爾敏組小鼠，D為雅解沙把低劑量組，E為雅解沙把高劑量組

4 討論

傣醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥重要的組成之一，聚集了歷代傣族人民智慧的結晶，形成了獨特的理論體系。傣藥“雅解沙把”(百解膠囊)以“先解后治”理論為指導，在臨床治療上有良好效果，其中包含治療過敏反應的作用，但是作用機制不明確，缺乏理論依據(jù)，本實驗以I型變態(tài)反應證實其作用機制。

I型變態(tài)反應主要由IgE介導，測IgE的含量在臨床診斷I型變態(tài)反應有重要意義。在正常情況下IgE在機體含量較低，當受到抗原刺激之后，IgE顯著增多，與肥大細胞表面的特異性受體結合，形成復合體結構，機體處于致敏狀態(tài)。當機體再次受到同種或異種抗原的刺激，IgE的構型發(fā)生改變，肥大細胞脫落，同時釋放大量組胺等過敏介質(zhì)，使血管通透性升高，此時在血液中的伊文思藍即可在此部位從血漿中滲出，形成藍斑[6-9]，由于抗原越多滲出依文思藍越多(圖1)，因此可以對過敏進行定量分析，對該反應進行評價。

實驗中考慮到30 μL抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動皮膚過敏模型太嚴重，藥物難以糾正，所以之后實驗均選用20 μL抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動皮膚過敏模型。實驗結果顯示：雅解沙把高劑量組的OD值明顯降低，并能顯著的性降低小鼠血清IgE的含量，提示其具有一定的抗過敏的作用，尤其對于以IgE為主的Ⅰ型變態(tài)反應具有較好的治療作用，但雅解沙把在抑制過敏反應中是否抑制肥大細胞的脫落還需要進一步研究。

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[2]唐琭璐.傣醫(yī)“雅解”學說運用規(guī)律的初步研究[D].2012，云南中醫(yī)學院.

[3]張婷.傣醫(yī)解藥“雅解沙把”抗過敏作用的實驗研究及治療濕疹的臨床觀察[D].2012，云南中醫(yī)學院.

[4]張冬梅，劉廷珍，單淑香，等.豚鼠和大鼠被動皮膚過敏試驗.動物醫(yī)學進展[J].2013，34(12)：241-243.

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Effect ofYajianshabaon Passive Cutaneous Allergy of Mice with the Same Kind

WANG Wei-li, DUAN Xiao-hua, ZGHANG Chao, CHEN Pu, CHEN Qing-hua, ZHENG Jin

(YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To observe the passive cutaneous anaphylaxis (PCA) and blood immunoglobulin E (IgE) effect ofYajianshabaon ovalbumin (OVA) induced mice of the same kind. Methods: Balb/c mice were randomly divided into a normal group, a model group, a chlorpheniramine group andYajianshabalow and high dose groups. The mice were administered with corresponding drugs. OVA subcutaneous injection was given to induce to allergy. OVA antibody serum of the rats was prepared. Each corresponding group was injected with serum antibodies to cause 48 hour passive allergy. The mice tails of each group were given intravenous injection of corresponding 0.5 % Evans blue solution to observe the mouse ear Aizen situation and determine the absorbance (OD). After the last allergy, serum was separated and IgE ELISA kits made by Cusabio Biotech Co., Ltd were used for detection. Results: Compared with the normal group, OD values of the model group significantly increased (P<0.05). Compared with the model group, the OD value ofYajianshabahigh-dose group significantly reduced (P<0.05). Compared with the model group, the IgE serum contents of the chlorpheniramine group and theYajianshabahigh-dose group significantly decreased, and the difference was statistically significant (P<0.05). TheYajianshabalow-dose group showed a trend to lower mouse serum IgE levels, but the difference was not statistically significant (P>0.05). Conclusion:Yajianshabahas an anti-allergic effect and its mechanism has something to do with abnormal reaction of inhibition type I .

Key words:Yajianshaba, passive skin allergy, IgE

(1)國家自然科學基金 傣醫(yī)解藥“雅解沙把”解“食物毒”、“藥物毒”的作用機制研究(NO：81160555)；(2)云南省衛(wèi)生廳民族醫(yī)藥文獻整理及中藥民族藥院內(nèi)制劑研發(fā)項目“基于文獻和實驗的傣醫(yī)雅解理論整理研究”(KY14)< class="content">作者簡介：王維麗(1991-)，女，云南大理人，研究生，研究方向：中藥藥理與應用。

王維麗(1991-)，女，云南大理人，研究生，研究方向：中藥藥理與應用。

△通信作者：鄭進，E-mail：zhengjinynkm@126.com

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