乳腺腫瘤組織中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF蛋白的表達*

郭茂華, 鄭瑞鋒，申培紅, 胡景團, 汪晟坤, 藺紅麗, 喬亞光, 陳峰杰, 李彥偉, 趙 瓊

1)河南護理職業學院病理學教研室 安陽455000 2)中國人民武裝警察部隊河南總隊醫院腫瘤中心 鄭州450052 3)鄭州大學基礎醫學院 鄭州450009 4)鄭州大學第五附屬醫院病理科 鄭州450052

乳腺腫瘤組織中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF蛋白的表達*

郭茂華1), 鄭瑞鋒2)，申培紅1,3)#, 胡景團1), 汪晟坤3), 藺紅麗1), 喬亞光1), 陳峰杰1), 李彥偉4), 趙 瓊1)

1)河南護理職業學院病理學教研室 安陽455000 2)中國人民武裝警察部隊河南總隊醫院腫瘤中心 鄭州450052 3)鄭州大學基礎醫學院 鄭州450009 4)鄭州大學第五附屬醫院病理科 鄭州450052

#通信作者，女，1967年4月生，博士，教授，主任醫師，研究方向：腫瘤病理，E-mail:13838122660@163.com

乳腺腫瘤；乳腺癌特異性基因；細胞外基質蛋白；基質金屬蛋白酶；血管內皮生長因子；浸潤和轉移

以往研究[1-6]顯示，在乳癌細胞的生長、浸潤、轉移過程中，乳癌特異基因1(breast cancer specific gene-1, BCSG1)、基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)、基質金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)均起到一定的作用。作者對乳腺纖維腺瘤、浸潤性導管癌旁乳腺組織、無腋窩淋巴結轉移浸潤性導管癌和伴腋窩淋巴結轉移浸潤性導管癌組織中BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白的表達進行了檢測，分析其表達特征，為判斷乳癌惡性進程和評估預后提供依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源 標本來源于鄭州大學第五附屬醫院及河南省腫瘤醫院病理科2008年1月至2010年12月手術切除的乳腺腫瘤標本。患者均為女性，年齡32～65歲，術前均未經任何抗腫瘤治療。纖維腺瘤40例，乳腺浸潤性導管癌旁增生組織(浸導癌旁)48例，乳腺浸潤性導管癌無淋巴結轉移組織(浸導癌1組)13例，乳腺浸潤性導管癌伴淋巴結轉移組織(浸導癌2組)49例，術后均經常規病理檢查確診。

1.2 BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF的檢測 取手術切除標本，常規固定、脫水、石蠟包埋, 3 μm厚連續切片。采用免疫組化SP法進行檢測。 陽性對照為已知陽性切片，陰性對照采用 PBS代替一抗。BCSG1鼠抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術有限公司，MMP-2、TIMP-2鼠抗人單克隆抗體購自福州邁新生物技術有限公司，VEGF兔抗人多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司，SP免疫組化試劑盒購自上海太陽生物技術有限公司。

1.3 結果判定 參考Mohsin等[7]報道的標準并加以改良進行結果判定。BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白陽性細胞均表現為細胞漿呈棕黃或棕褐色著色。每張切片選取10個熱點，在高倍鏡視野下計數細胞，計算陽性細胞百分數。陽性細胞百分數<25%計0分，25%～計1分，51%～計2分，>75%計3分；輕度著色計1分，中度著色計2分，重度著色計3分。兩項得分之和<3分為陰性，≥3分為陽性[8]。

1.4 統計學處理 實驗結果采用SPSS 17.0分析，4種組織中蛋白陽性率的比較采用χ2檢驗，用列聯系數描述乳腺浸潤性導管癌組織中各指標間的關聯程度。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 4組乳腺組織中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF的表達 見表1。在纖維腺瘤、乳腺浸潤性導管癌旁、乳腺浸潤性導管癌無淋巴結轉移以及乳腺浸潤性導管癌伴淋巴結轉移組織中BCSG1、MMP-2、VEGF陽性率逐漸增高，TIMP-2陽性率逐漸降低。

表1 4組乳腺組織中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF的表達 例(%)

2.2 乳腺浸潤性導管癌組織中VEGF、BCSG1、 MMP-2、TIMP-2表達之間的關系 乳腺浸潤性導管癌組織中， BCSG1與VEGF、MMP-2的表達有一定的關聯性，與TIMP-2的表達無關。VEGF與MMP-2的表達有一定的關聯性，與TIMP-2的表達無關。見表2、3。

表2 乳腺浸潤性導管癌組織中BCSG1與MMP-2、TIMP-2、VEGF表達的關系 例

*:rP=0.255,P=0.038;#：rP=0.112,P=0.374;△:rP=0.268,P=0.029。

表3 乳腺浸潤性導管癌組織中VEGF與MMP-2、TIMP-2表達的關系 例

*:rP=0.300,P=0.013;#：rP=0.104,P=0.409。

3 討論

BCSG1是由Ji等[9]從人乳癌cDNA文庫中分離出的基因，編碼合成1條含127個氨基酸的蛋白。文獻[1]報道，BCSG1在乳腺良性疾病中表達較低,在乳癌中則呈現高表達,其在乳癌發展過程中屬中晚期事件，高表達與乳癌進程有關。MMP-2屬Ⅳ型膠原酶類，主要降解包括明膠、纖維蛋白、基底膜Ⅳ、Ⅴ和Ⅶ型膠原等在內的多種膠原蛋白，在腫瘤細胞突破基底膜屏障和浸潤轉移過程中發揮至關重要的作用[10-11]。TIMP-2為MMP-2的特異性抑制因子[12]，多項研究[1-2，13]表明二者在肝癌、胃癌、大腸癌、乳癌、卵巢癌等多種腫瘤組織中均表達較高。VEGF是一類血管淋巴管內皮生長因子的總稱，在眾多促血管生長因子中作用力最強，與腫瘤的侵襲轉移關系密切；在多種腫瘤組織中，如乳腺腫瘤、胃癌、大腸癌、胰腺癌、上皮性卵巢癌、結直腸癌等，VEGF表達均明顯升高[5-6,14]。

該研究結果表明，在纖維腺瘤、乳腺浸潤性導管癌旁、乳腺浸潤性導管癌無淋巴結轉移以及乳腺浸潤性導管癌伴淋巴結轉移組織中BCSG1、MMP-2、VEGF陽性率逐漸增高，TIMP-2陽性率逐漸降低，與上述相關報道結果一致。可以看出，BCSG1、MMP-2、VEGF為乳腺腫瘤進程中的危險因子，而TIMP-2發揮一定的保護作用。相關性分析結果顯示，乳腺浸潤性導管癌組織中BCSG1與MMP-2、VEGF表達均呈正關聯，與TIMP-2表達無關，而VEGF與MMP-2表達亦呈正關聯，與TIMP-2表達無關。因此，作者認為BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF均與乳癌發生、發展、浸潤、轉移關系密切，其檢測對指導判斷患者乳癌惡性進程和估計預后具有重要的指導價值。

[1]Shen PH,Fan QX,Li YW,et al.SNCG shRNA suppressed breast cancer cell xenograft formation and growth in nude mice[J].Chin Med J (Engl),2011,124(10):1524

[2]Gu YM,Tan JX,Lu XW,et al.BCSG1 methylation status and BCSG1 expression in breast tissues derived from Chinese women with breast cancer[J].Oncology,2008,74(1/2):61

[3]Mroczko B,Lukaszewicz-Zaj?c M,Gryko M,et al.Clinical significance of serum levels of matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) and its tissue inhibitor (TIMP-2) in gastric cancer[J].Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):125

[4]Angulo JC,Ferruelo A,Rodríguez-Barbero JM,et al.Detection and molecular staging of bladder cancer using real-time RT-PCR for gelatinases (MMP-2, MMP-9) and TIMP-2 in peripheral blood[J].Actas Urol Esp,2011,35(3):127

[5]歐玉萊，康敏，周蕾，等.胃癌中幽門螺桿菌L型感染與MIF、MMP-9、VEGF表達的關系[J].南方醫科大學學報，2014,34(2)：180

[6]Taira T,Yamamoto N.Anti-VEGF therapy for lung cancer[J].Nihon Rinsho,2012,70(12):2159

[7]Mohsin SK,Zhang M,Clark GM,et al.Maspin expression in invasive breast cancer: association with other prognostic factors[J].J Pathol,2003,199(4):432

[8]張志剛,張祥宏,劉巍,等.BCSG1 survivin在浸潤性乳腺癌中的表達及預后相關性的研究[J].中國腫瘤臨床,2008,35(18):1060

[9]Ji H,Liu YE,Jia T,et al.Identification of a breast cancer-specific gene, BCSG1, by direct differential cDNA sequencing[J].Cancer Res,1997,57(4):759

[10]Singer CF,Kronsteiner N,Marton E,et al.MMP-2 and MMP-9 expression in breast cancer-derived human fibroblasts is differentially regulated by stromal-epithelial interactions[J].Breast Cancer Res Treat,2002,72(1):69

[11]Mohammad MA,Zeeneldin AA,Abd Elmageed ZY,et al.Clinical relevance of cyclooxygenase-2 and matrix metalloproteinases (MMP-2 and MT1-MMP) in human breast cancer tissue[J].Mol Cell Biochem,2012,366(1/2):269

[12]Remacle A,Mccarthy K,No?l A,et al.High levels of TIMP-2 correlate with adverse prognosis in breast cancer[J].Int J Cancer,2000,89(2):118

[14]Waldner MJ,Neurath MF.Targeting the VEGF signaling pathway in cancer therapy[J].Expert Opin Ther Targets,2012,16(1):5

(2014-06-18 收稿 責任編輯王 曼)

10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.036

*鄭州市科技局科技領軍人才項目 10LGRC173