花生殼中黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性

周巾英　朱雪晶　潘潤(rùn)天　等

摘要：采用不同方法測(cè)定花生殼中黃酮類(lèi)物質(zhì)的抗氧化活性，并與常用的合成抗氧化劑的抗氧化性能進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明，天然抗氧化劑黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性高于合成抗氧化劑TBHQ，且超聲波輔助提取法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性明顯高于索氏萃取法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性。可見(jiàn)，超聲波輔助法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物是一種簡(jiǎn)單、可行的方法。

關(guān)鍵詞：花生殼；黃酮類(lèi)化合物；抗氧化劑；抗氧化性；自由基

中圖分類(lèi)號(hào)： S565.201文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）01-0306-02

收稿日期：2014-02-27

基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專(zhuān)項(xiàng)（編號(hào)：201303072）；國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（編號(hào)：31301590）；江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士啟動(dòng)基金（編號(hào)：2013CBS002） 。

作者簡(jiǎn)介：周巾英（1983—），女，江西吉安人，博士，助理研究員，從事天然抗氧化劑研發(fā)及其活性的研究。E-mail：lyjgstgzy@126.com。

通信作者：馮健雄，研究員，從事農(nóng)副產(chǎn)品加工研究。E-mail：fjx630320@163.com。抗氧化劑可分為天然抗氧化劑、合成抗氧化劑，目前使用最多的合成抗氧化劑包括叔丁基-4-甲氧基苯酚（butylated hydroxyanisole，BHA）、定基羥基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）、叔丁基氫醌（ter-butylhydroquinone，TBHQ）等，合成抗氧化劑能有效捕捉自由基，從而達(dá)到抑制氧化反應(yīng)進(jìn)行的目的，但是合成抗氧劑存在危害人類(lèi)健康的風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。由于人工合成的抗氧化劑存在安全隱患，因此，尋求高效、安全的抗氧劑已成為研究熱點(diǎn)[3-5]。花生殼營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，含有多種具有抗氧化活性的物質(zhì)，其中粗蛋白含量為4.8%～72%，粗脂肪含量為1%，粗纖維含量為65.7%～79.3%，可溶性碳水化合物含量為10.6%～21.2%。花生殼不僅具有降低血壓、血脂等作用，還具有抗氧化、抗菌抗炎、增強(qiáng)免疫等藥理活性[6-8]。筆者研究采用不同方法提取出的花生殼中黃酮類(lèi)物質(zhì)的抗氧化活性，并與常用的合成抗氧化劑的抗氧化性能進(jìn)行對(duì)比，以期為花生殼提取物的應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

二苯基苦味酰基苯肼（2，2-diphenyl-1-picryhydrazyl，DPPH）、2，2-連氮-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸磷酸氫二胺鹽）[2，2′-Azion-（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid diammonium salt），ABTS]、無(wú)水乙醇、磷酸、高硫酸鉀、磷酸鈉、鉬酸銨、硫酸、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、分子電子天平、離心機(jī)。叔丁基對(duì)苯二酚（tertiary butylhydroquinone，TBHQ）、超聲波輔助法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物（ultrasonic assisted extraction of peanut shell，UEPS）、索氏萃取法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物（soxhlet extraction of peanut shell，SEPS）。

1.2方法

1.2.1DPPH·自由基清除率的測(cè)定根據(jù)Hatano等的方法[9]清除DPPH·自由基。在樣品管中加入一定量的樣品及DPPH·溶液（樣品最終濃度為5、7.5、10、12.5、15 μg/mL），搖勻并于30 ℃下放置30 min。在515 nm處測(cè)定不同濃度樣品與DPPH·反應(yīng)后的吸光度、樣品在無(wú)水乙醇溶劑中的吸光度、DPPH·在無(wú)水乙醇溶劑中的吸光度，以無(wú)水乙醇溶劑為空白樣品，TBHQ為參照物，每處理重復(fù)3次。

樣品的消除率=[1-（D樣品-D對(duì)照）/D空白]×100%。（1）

式中：D空白代表DPPH·與溶劑混合液的吸光度，D樣品代表DPPH·與樣品反應(yīng)后的吸光度，D對(duì)照代表樣品與溶劑混合的吸光度。

1.2.2ABTS+·自由基清除率的測(cè)定ABTS+·工作液配制方法：將5 mL 7 mmol/L ABTS與88 μL 140 mmol/L高硫酸鉀混合，室溫下避光放置過(guò)夜，制成ABTS+·自由基貯備液[10]。使用前用無(wú)水乙醇稀釋成工作液，并要求其在734 nm處的吸光度約為0.70±0.02。取0.1 mL不同濃度的樣品與19 mL ABTS+·工作液混合均勻，室溫下避光放置10 min，在734 nm處測(cè)定其吸光度，以無(wú)水乙醇為空白，TBHQ為參照物，每處理重復(fù)3次。

樣品的消除率=[1-（D樣品-D對(duì)照）/D空白]×100%。（2）

式中：D空白代表ABTS+·空白對(duì)照吸光度，D樣品代表ABTS+·與樣品反應(yīng)后的吸光度，D對(duì)照代表樣品空白吸光度。

1.2.3總抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAC）的測(cè)定分別取不同樣品溶液1.0 mL加入10 mL離心管中，再加入3.0 mL磷鉬試劑溶液（磷鉬試劑溶液包括0.6 mol/L硫酸、28 mmol/L 磷酸鈉、4 mmol/L鉬酸銨）混合均勻，混合液在 95 ℃ 水浴鍋中分別水浴30、60、90、120、150、180 min，放置冷卻至室溫，在695 nm處檢測(cè)樣品的吸光度[11]，以蒸餾水為空白，TBHQ為對(duì)照，重復(fù)3次，取平均值。

1.2.4還原性能力（reducing power）的測(cè)定在10 mL離心管中分別加入2.5 mL 0.2 mol/L pH值為 6.6 的磷酸緩沖液及不同含量（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/mL）的黃酮提取液1 mL，加入2.5 mL 1%鐵氰化鉀，混合均勻后50 ℃下放置20 min，取出冷卻至室溫后加入2.5 mL 10%三氯乙酸，4 000 r/min 離心10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水及0.5 mL FeCl3，混勻后靜置10 min，在700 nm處檢測(cè)樣品的吸光度，TBHQ作為對(duì)照。endprint

2結(jié)果與分析

2.1DPPH·自由基清除率

DPPH·自由基是一種以氮為中心的穩(wěn)定自由基，其乙醇溶液為紫紅色，在波長(zhǎng)515 nm處有最大吸光度。此方法是基于抗氧化劑能給自由基提供氫原子或電子引起紫紅色消褪來(lái)檢測(cè)樣品的抗氧化活性。自由基分為羥基自由基、烷基自由基、過(guò)氧自由基。若提取物能夠清除DPPH·自由基，則表示它含有降低羥基自由基、烷基自由基、過(guò)氧自由基有效濃度的能力，可以有效阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而抑制氧化過(guò)程。抗氧化劑清除DPPH·自由基的清除率越高，其抗氧化能力越強(qiáng)。由圖1可知，UEPS、SEPS對(duì) DPPH· 自由基清除能力較強(qiáng)，并且清除率與黃酮含量呈正相關(guān)性，隨著黃酮含量的增大，其對(duì)DPPH·自由基的清除能力也逐漸增強(qiáng)。UEPS、SEPS對(duì)DPPH·自由基的清除率均高于TBHQ，UEPS對(duì) DPPH· 自由基的清除能力高于SEPS。

2.2ABTS+·自由基清除率

ABTS法可用于親水性、親脂性物質(zhì)抗氧化能力檢測(cè)，ABTS與過(guò)硫酸鉀反應(yīng)可生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色工作液即ABTS+·自由基。向ABTS+·工作液中加入抗氧化劑，該抗氧化劑可與ABTS+·反應(yīng)，ABTS+·將會(huì)減少，在734 nm處溶液的吸光度也發(fā)生變化，同時(shí)ABTS+·工作液褪色，褪色越明顯，表明該抗氧化劑的抗氧化能力越強(qiáng)。由圖2可知，UEPS、SEPS對(duì)ABTS+·自由基清除能力較強(qiáng)，并且清除率與黃酮含量呈正相關(guān)性，隨著黃酮含量的增大，其對(duì)ABTS+·自由基的清除能力也逐漸增強(qiáng)。UEPS、SEPS對(duì)ABTS+·自由基的清除率均高于TBHQ，且UEPS對(duì)ABTS+·自由基的清除能力高于SEPS。

2.3總抗氧化能力

磷鉬絡(luò)合物法通常被用于酚類(lèi)、維生素E、類(lèi)胡蘿卜素等抗氧化物的抗氧化活性測(cè)定，其原理是抗氧化物質(zhì)中的氫或電子轉(zhuǎn)移到Mo（Ⅵ）并將其還原成綠色的Mo（Ⅴ）絡(luò)合物，其最大吸收波長(zhǎng)為695 nm，吸光度越大，表示抗氧化劑活性越強(qiáng)。由圖3可知，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，溶液的吸光度增大，即抗氧化劑的抗氧化活性逐漸增強(qiáng)。UEPS、SEPS抗氧化活性較高，總抗氧化活性的從強(qiáng)到弱依次為UEPS>SEPS>TBHQ。

2.4還原能力

測(cè)定還原能力是為了檢驗(yàn)樣品是否是一個(gè)良好的電子供給體，還原能力強(qiáng)的樣品是良好的電子供給體，其供給的電子除了把Fe3+還原成Fe2+外，還可與自由基反應(yīng)，生成穩(wěn)定的物質(zhì)。一般情況下，樣品的還原能力與其抗氧化活性存在一定的相關(guān)性，樣品的還原能力可間接反映其抗氧化能力。由圖4可知，在所檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)，各個(gè)樣品的還原能力隨著黃酮含量的增加逐漸增強(qiáng)。當(dāng)檢測(cè)樣品黃酮含量為 1.0 mg/mL 時(shí)，UEPS、SEPS、TBHQ在700 nm處對(duì)應(yīng)的吸光度分別為1.956、1.455、0.721，表明不同提取法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物具有一定的還原能力。在相同含量下，各個(gè)樣品的還原能力由強(qiáng)到弱依次為UEPS>SEPS>TBHQ。

3結(jié)論

本研究表明，UEPS、SEPS、TBHQ均表現(xiàn)出不同程度的抗氧化能力。對(duì)DPPH·、APTS+自由基的清除能力由強(qiáng)到弱依次為UEPS>SEPS>TBHQ。花生殼提取出的黃酮類(lèi)化合物抗氧化活性均高于合成抗氧化劑TBHQ，且超聲波輔助提

取法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性明顯高于索氏萃取法提取花生殼中黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性。可見(jiàn)，超聲波輔助提取法是一種提取天然活性成分的有效方法。

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