進(jìn)口紅葡萄酒中致病微生物的分離與鑒定分析

蘇遠(yuǎn)科，呂斐，王志宏，羅曉

龍口出入境檢驗檢疫局，山東煙臺 265700

隨著經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展和消費能力的提高，葡萄酒的消費日益增長[1-2]。我國是葡萄酒消費大國，也是葡萄酒進(jìn)口大國。葡萄酒進(jìn)口數(shù)量的增加要求食品監(jiān)督管理部門在科學(xué)管理、服務(wù)企業(yè)的基礎(chǔ)上要提高檢驗檢測水平，保證進(jìn)口葡萄酒的質(zhì)量安全。該研究對進(jìn)口紅葡萄酒中致病菌分析，為葡萄酒進(jìn)口監(jiān)管提供參考[2]。

1 資料與方法

1.1 材料與試劑

樣品來源與本單位抽檢的近5年進(jìn)口的來自6個地區(qū)的120批紅葡萄酒，酒精濃度為12.5%；培養(yǎng)基及生化鑒定試劑均來自北京陸橋生物技術(shù)有限公司；全自動微生物鑒定系統(tǒng)購自生物梅里埃公司。其余試劑為市售分析純。

1.2 樣品菌落總數(shù)檢測

菌落總數(shù)檢測參照GB4789.2-2010標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，計數(shù)平板選擇菌落數(shù)為30-300cfu平板，菌落數(shù)計數(shù)依據(jù)兩個平板總數(shù)取平均數(shù)作為樣品菌落總數(shù)。

1.3 病原菌分離及鑒定

將樣品接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中36℃增菌24 h，并將增菌也劃線接種至選擇培養(yǎng)基，觀察菌落形態(tài)并進(jìn)行革蘭氏染色；將疑似菌落接種至血平板上于36℃培養(yǎng)24 h分離單菌落，進(jìn)行全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行致病菌的鑒定與分型。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)進(jìn)口葡萄酒菌落總數(shù)檢測情況

該文發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)進(jìn)口葡萄酒的菌落總數(shù)存在較大的差異，且120批進(jìn)口葡萄酒中有3批菌落數(shù)超標(biāo)，占2.5%，見表1。

2.2 單核細(xì)胞增生李斯特菌鑒定分析

該文發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞增生李斯特菌在血平板上呈現(xiàn)灰白色菌落，菌落較小，且具有β-溶血環(huán)；在改良的McBride瓊脂和酵母浸膏胰酪大豆瓊脂平板上接受45°光照射后呈現(xiàn)灰色菌落；革蘭氏染色鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體為革蘭氏陽性短桿菌，呈球狀，無芽孢。菌體經(jīng)全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定后為單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）。

表1 不同地區(qū)進(jìn)口葡萄酒菌落總數(shù)檢測情況

2.3 尿放線桿菌生化鑒定分析

該文發(fā)現(xiàn)在尿放線菌主要生長在瓊脂平板中下層，在BP平板上菌落形態(tài)較大，呈黑色，在血瓊脂平板上生長，但不具有溶血圈，革蘭氏染色鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體為革蘭氏陰性桿菌，經(jīng)全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定為尿放線桿菌（Actinobacillus ureae）。

3 討論

現(xiàn)代社會人們生活水平的提高促進(jìn)了葡萄酒消費的增長，且進(jìn)口葡萄酒的銷量也逐年升高。微生物項目是進(jìn)口食品質(zhì)量控制的關(guān)鍵指標(biāo)。因此，為保證進(jìn)口葡萄酒的質(zhì)量必須加強(qiáng)該領(lǐng)域的檢測和監(jiān)管。該研究對在進(jìn)口紅葡萄酒中致病菌分析時發(fā)現(xiàn)6個地區(qū)的120批進(jìn)口葡萄酒中菌落總數(shù)超標(biāo)有3批，占2.5%，且從不合格樣品中檢出單核細(xì)胞增生李斯特菌和尿放線菌等致病菌。因此，不同地區(qū)進(jìn)口葡萄酒微生物差別較大，要加強(qiáng)監(jiān)管。

單核細(xì)胞增生李斯特菌在自然界中廣泛存在，能夠耐受較大的滲透壓，是食品中常見的致病菌之一[3-4]。單核細(xì)胞增生李斯特菌為細(xì)胞內(nèi)寄生菌，能夠引起患者呼吸急促、嘔吐、昏迷或出血性皮疹、自然流產(chǎn)甚至死亡。在對2007—2011年甘肅省即食食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌監(jiān)測分析的研究中發(fā)現(xiàn)即食食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌污染嚴(yán)重，檢出率為1.98%[5]。在對昆明市西山區(qū)食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌的污染狀況調(diào)查時也發(fā)現(xiàn)食品中及食品加工工具上該細(xì)菌污染較為嚴(yán)重，存在引起公共衛(wèi)生問題的安全風(fēng)險，要加強(qiáng)食品安全監(jiān)管[6]。在對南京地區(qū)食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌分離鑒定時也發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞增生李斯特菌是也引起食物中毒的重大的安全隱患，且該地區(qū)中單核心包增生李斯特菌的檢出率高達(dá)16.9%。該文中也發(fā)現(xiàn)葡萄酒單核細(xì)胞增生李斯特菌的檢出率為1.67%，且葡萄酒中分離的單核細(xì)胞增生李斯特菌在血平板上呈現(xiàn)灰白色菌落，菌落較小，且具有β-溶血環(huán)。

尿放線桿菌也是食品中常見的致病菌，以往的報道中發(fā)現(xiàn)葡萄酒中也檢出尿放線桿菌。頓玉慧等發(fā)現(xiàn)依據(jù)GB4789.2檢測從菌落總數(shù)超標(biāo)的萊莎麗莊園進(jìn)口的葡萄酒中檢出尿放線桿菌和鶉雞腸球菌[8]。同時，作者經(jīng)過多次增菌和分離培養(yǎng)，也從法國進(jìn)口的菌落總數(shù)超標(biāo)的葡萄酒中分離獲得一株尿放線桿菌[9]。該文中也從進(jìn)口葡萄酒中分離得到一株尿放線桿菌，占0.83%。因此，要加強(qiáng)進(jìn)口葡萄酒中尿放線桿菌的檢測。

因此，不同地區(qū)進(jìn)口葡萄酒微生物菌落總數(shù)差別較大，且可能檢測出致病菌。為控制進(jìn)口葡萄酒的質(zhì)量，要加強(qiáng)該領(lǐng)域的監(jiān)管力度。

[1]韋旭陽.中國進(jìn)口葡萄酒市場價格主要影響因素研究[D].西北農(nóng)林科技大學(xué),2012.

[2]胡竹韻,王星晨,陶永勝,等.中國進(jìn)口紅葡萄酒香氣特征與價格之間的關(guān)聯(lián)分析[J].食品科學(xué)，2015，5(8)：25-29.

[3]張超，陳國薇，楊玉萍，等.活性氧調(diào)節(jié)單核細(xì)胞增生李斯特菌菌膜形成[J].食品科學(xué)，2013，6(23)：189-193.

[4]石磊，王文燕，閆鶴.豬肉中單核細(xì)胞增生李斯特菌的分離與耐藥性研究[J].現(xiàn)代食品科技，2013，22(12)：2826-2829，2908.

[5]胡曉寧，蘇誠玉，權(quán)玉玲.2007-2011年甘肅省即食食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌監(jiān)測分析[J].疾病預(yù)防控制通報,2013,6(3):50-52.

[6]彭俊，楊淞，王玨，等.昆明市西山區(qū)食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌的污染狀況調(diào)查[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2014,7(1):74-76.

[7]葉艷華，江曉，王煒，等.南京地區(qū)食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌分離鑒定[J].中國臨床研究,2011,16(12):1146-1147.

[8]頓玉慧，徐建設(shè)，吳海，等.進(jìn)口葡萄酒中檢出鶉雞腸球菌和尿放線桿菌的報告[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2007,9(6):376-378.

[9]頓玉慧，鄭啟偉，徐建設(shè)，等.從進(jìn)口葡萄酒中分離出尿放線桿菌[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2008，16(4)：322-324.