轉化生長因子α促進人內皮祖細胞增殖、遷移和黏附*

代文靜， 張 軍， 周敬群△， 向常清， 王 剛

(三峽大學仁和醫院 1心血管內科， 2ICU科， 湖北 宜昌 443000)

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轉化生長因子α促進人內皮祖細胞增殖、遷移和黏附*

代文靜1， 張 軍2， 周敬群1△， 向常清1， 王 剛1

(三峽大學仁和醫院1心血管內科，2ICU科， 湖北 宜昌 443000)

目的： 探討轉化生長因子α(transforming growth factor α，TGF-α)對人內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)單克隆形成、增殖、遷移和黏附細胞功能的影響及機制。方法: 分離培養人內皮祖細胞，分別用濃度為1、5、10 μg/L TGF-α誘導處理細胞，并設置PBS對照組和表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑EGFR-TKI組(同時加入10 μg/L TGF-α和1∶1 000的EGFR-TKI)。利用單克隆形成實驗、MTT法和EdU法、Transwell法和細胞黏附實驗檢測不同濃度TGF-α對各組EPCs單克隆形成能力、細胞增殖、細胞遷移能力及黏附功能的影響；并通過Western blotting法檢測不同濃度TGF-α對各組EPCs中表皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor，EGFR)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達的影響。結果: 不同濃度TGF-α均能顯著誘導EPCs單克隆形成能力、增殖、遷移和黏附細胞功能，差異有統計學意義(P<0.05)，并可以被EGFR-TKI抑制。Western blotting檢測發現TGF-α顯著誘導EPCs中EGFR和VEGF的表達(P<0.05)，并呈濃度依賴性。結論: TGF-α能夠顯著促進人EPCs細胞單克隆形成、增殖、遷移和黏附相關細胞功能，并通過與EGFR結合誘導VEGF表達來發揮作用。

轉化生長因子 α； 內皮祖細胞； 細胞增殖； 細胞遷移； 細胞黏附； 表皮生長因子受體

內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是一類可以分化成內皮細胞的前體干細胞，參與到血管的新生和損傷修復，同時對于治療缺血性疾病和監控心血管疾病具有重要應用價值[1]。EPCs的增殖、遷移和黏附細胞功能與其在血管生成與損傷修復中發揮作用密切相關。轉化生長因子α(transforming growth factor α, TGF-α)是一種多功能性f生物活性細胞因子，在組織損傷愈合和促進細胞分化生長中發揮作用[2]。研究表明TGF-α與表皮生長因子類似，通過與細胞表面的表皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor, EGFR)結合發揮作用，TGF-α與EGFR具有高親和力，可激活受體內在酪氨酸激酶活性，從而啟動信號轉導[3]。已有研究發現TGF-α能夠促進人脂肪來源干細胞、表皮干細胞增殖和分化等細胞功能[4]。但目前關于TGF-α對人內皮祖細胞相關細胞功能的影響及其作用機制尚未見報道，因此本文通過研究TGF-α對人EPCs細胞單克隆形成、增殖、遷移和黏附功能的影響及機制，為TGF-α在血管損傷修復及缺血性血管新生中的應用提供指導和依據。

材 料 和 方 法

1 試劑和材料

M199細胞培養基、胰酶、胎牛血清購自Hyclone；青霉素、鏈霉素、ECL化學發光試劑購自北京碧云天公司；Endogro細胞因子、TGF-α、表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epithelial growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor，EGFR-TKI)購自R&D；D-Hanks溶液、二甲基亞砜(DMSO)、CD133磁珠購自Sigma；人淋巴細胞分離液購自天津TBD公司；MTT試劑購自上海生工公司；Cell-LightTMEdU熒光顯微鏡檢測試劑盒購自廣州市銳博生物科技公司；Transwell Permeable Supports購自Corning；兔抗人EGFR、VEGF、β-actin多克隆抗體購自北京博奧森公司；辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgGⅡ抗購自中杉金橋公司；其它試劑均為國產分析純。

2 主要方法

2.1 人內皮祖細胞EPCs的分離培養及鑒定 取健康志愿者捐獻外周血，用人淋巴細胞分離液等體積混勻后密度梯度離心20 min，分離得到中間層人外周血單核細胞層。用D-Hanks液清洗并離心，棄去上清，用含10%胎牛血清和Endogro細胞因子的M199內皮祖細胞完全培養基重懸后，接種于膠原包被的細胞培養瓶中，37 ℃、5% CO2培養箱中連續培養。在培養24 h時，取出培養瓶換液，棄去未貼壁細胞后繼續培養，每3 d換液1次，貼壁細胞繼續培養。在倒置顯微鏡下觀察分離的人EPCs的生長狀態。EPCs培養至7 d時接種于6孔板中，細胞貼壁后加入DiI-ac-LDL(10 mg/L)，37 ℃孵育4 h后，PBS漂洗2次，4%多聚甲醛固定細胞30 min，PBS漂洗后加入FITC-UEA-1(10 mg/L)，37 ℃孵育2 h后，PBS漂洗2次，在熒光顯微鏡下觀察EPCs細胞并拍照。EPCs可以攝取DiI-ac-LDL，并能特異性結合UEA-1，能同時攝取DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1標記的確定為分化中的EPCs。

2.2 EPCs單克隆形成檢測 采用相同的方法從人外周血中分離出單核細胞層后，利用CD133磁珠分選，在4 ℃用垂直混勻器混勻30 min后收集磁珠吸附的細胞，用EPCs細胞完全培養基重懸后分成5組，分別加入濃度為1、5、10 μg/L TGF-α，同時設置PBS對照組和表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑EGFR-TKI組(同時加入10 μg/L TGF-α和1∶1 000的EGFR-TKI)。將細胞懸液加入到甲基纖維素半固體培養基中，37 ℃、5% CO2培養箱中連續培養7 d后，在顯微鏡下高倍視野內隨機觀察各組中EPCs形成的單克隆并進行拍照和計數。

2.3 MTT和Edu增殖實驗 將連續培養14 d的EPCs細胞用0.25%的胰酶消化，用M199內皮祖細胞完全培養基稀釋至濃度為1×107/L接種在96孔板中，每孔加入200 μL。分別用含1、5、10 μg/L TGF-α的培養基培養3 d，同時設置PBS對照組和EGFR-TKI組。每組設置6個復孔。培養3 d后,每孔加入MTT溶液(5 g/L)20 μL，37 ℃繼續培養4 h后棄去培養基，每孔加入150 μL DMSO，在搖床上振蕩15 min后，在酶標儀上測定492 nm時各孔吸光度(A)值。同時在各組96孔板中EPCs經不同濃度TGF-α處理3 d后，每孔加入含50 μmol/L EdU培養基共孵育2 h，后棄培養基用4%多聚甲醛固定EPCs細胞，用0.2%甘氨酸孵育10 min，PBS洗滌后按照Cell-LightTMEdU方法反應染色并在熒光顯微鏡下拍照觀察并計數每個高倍視野內的增殖細胞。

2.4 Transwell實驗 將培養至14 d的EPCs細胞用0.25%的EDTA胰酶消化，900 r/min離心5 min收集細胞，用M199內皮祖細胞完全培養基重懸調整其濃度為1×108/L。在Transwell板培養室上孔中分別加入200 μL EPCs細胞懸液，下室中分別加入含PBS,1、5、10 μg/L TGF-α及TGF-α+EGFR-TKI的細胞培養基。37 ℃繼續培養24 h后，用取出上室小皿用0.1 mg/L結晶紫染色30 min，后用PBS洗滌3遍。用棉簽輕輕擦去上室的貼壁細胞，在顯微鏡下觀察計數并拍照。

2.5 EPCs細胞黏附實驗 培養至14 d的EPCs細胞用0.25%的EDTA胰酶消化后，按照2×107/L接種于6孔板中，并用含不同濃度的TGF-α(1、5、10 μg/L)進行培養24 h，同時設置PBS對照孔和TGF-α+GFR-TKI孔。培養結束后用胰酶消化各孔中EPCs細胞并離心收集。調整消化后EPCs細胞濃度一致后分別接種于人纖維連接蛋白包被的6孔板中，37℃下繼續培養30 min后，棄去培養基并用PBS沖洗去未貼壁的細胞，每孔在倒置顯微鏡下隨機選擇9個視野(×200)。同時每組設置3個重復孔，計數各組黏附的EPCs細胞。

2.6 Western blotting檢測EPCs中EGFR和VEGF表達 分離培養14 d的EPCs細胞用0.25%的EDTA胰酶消化后，將其分成5組，分別用含不同濃度的TGF-α(1、5、10 μg/L)培養基進行培養3 d，同時設置PBS對照組和TGF-α+EGFR-TKI組。培養結束后棄去培養基，用PBS洗滌后收集各組EPCs細胞，RIPA裂解液裂解細胞提取細胞中總蛋白，并用BCA試劑盒測定各組中蛋白濃度。每組分別取含30 μg總蛋白上樣進行12%的SDS-PAGE分離蛋白,電泳結束后轉至PVDF膜，封閉30 min后，分別孵育兔抗人VEGF I抗(1∶1 000)、EGFR I抗(1∶1 000)和β-actin抗體(1∶1 000) 4 ℃過夜，用TBST洗滌3遍各5 min，后孵育HRP標記山羊抗兔 II 抗(1∶5 000)2 h。TBST洗滌后ECL化學發光顯影，曝光拍照。利用Quantity One軟件分析各條帶的相對吸光度，利用目的條帶和內參照β-actin的比值表示其相對表達量。

3 統計學處理

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，所有正態分布統計數據采用均數±標準差(mean±SD)表示。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，各組間兩兩比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 人EPCs的培養鑒定結果

從健康人外周血中分離得到EPCs連續培養14 d后進行功能鑒定。如圖1所示，所分離的人EPCs能夠吞噬DiI-ac-LDL發紅色熒光，并能夠結合FITC-UEA-1發綠色熒光，而雙陽性黃色熒光細胞即為正在分化中的EPCs細胞。圖1中EPCs細胞吞噬DiI-ac-LDL和結合FITC-UEA-1雙陽性率在90%以上，說明成功從人外周血中分離培養得到EPCs細胞。

Figure 1.The identification of human endothelial progenitor cells. A: FITC-UEA-1 positive cells; B: DiI-ac-LDL positive cells; C: double positive cells.

2 TGF-α對EPCs單克隆形成的影響

體外進行EPCs的甲基纖維半固體單克隆培養，在7 d時觀察發現不同濃度的TGF-α均能夠促進EPCs單克隆的形成，但TGF-α對EGFR-TKI組中EPCs單克隆形成沒有作用，見圖2。經統計，PBS對照組中每個高倍視野內EPCs單克隆形成數為11.80±2.58，而1、5、10 μg/L TGF-α處理組中每個高倍視野內EPCs單克隆數分別增加為20.00±2.55、26.40±2.31和34.60±2.34(均P<0.05)。同時加10 μg/L TGF-α和EGFR-TKI處理組中EPCs單克隆形成數未見增加，僅為10.60±1.82，顯著低于單獨10 μg/L TGF-α處理組，說明表皮生長因子受體酪氨酸激酶信號途徑的抑制影響TGF-α對EPCs單克隆形成發揮作用，見圖2。

3 TGF-α對EPCs增殖的影響

MTT檢測發現與PBS對照組EPCs在492 nm波長A值相比，1、5、10 μg/L TGF-α處理組中A值均顯著增加(P<0.05)，但同時加入10 μg/L TGF-α和EGFR-TKI組中A值無明顯變化。如圖3所示，PBS對照組中A值為0.37±0.04，而1、5、10 μg/L TGF-α處理組中A值分別增加為0.47±0.02、0.54±0.02和0.60±0.03(均P<0.05)。TGF-α+EGFR-TKI組中EPCsA值為0.33±0.02，與PBS組相比變化不明顯，但顯著低于單獨10 μg/L TGF-α處理組(P<0.05)。EdU實驗顯示在熒光顯微鏡下增殖期EPCs發紅色熒光而其余細胞發藍色熒光，見圖4。與PBS對照組相比，經不同濃度TGF-α誘導處理組中處于增殖期的EPCs細胞均顯著增加且呈濃度依賴效應，但EGFR-TKI組中增殖期EPCs細胞未見明顯增加且顯著低于TGF-α單獨作用組。經統計，每個高倍視野(×200)內PBS對照組中增殖EPCs數為13.33±2.09，而1、5、10 μg/L TGF-α處理組中增殖EPCs數增加分別為27.33±1.52、32.33±1.53和45.00±2.00(均P<0.05)，TGF-α+EGFR-TKI組中增殖EPCs數為10.33±2.05，同樣顯著低于單獨10 μg/L TGF-α處理組(P<0.05)。MTT和EdU實驗同時證明TGF-α能夠促進EPCs細胞活力和增殖，但受到EGFR-TKI的抑制。

Figure 2.The monoclonal formation of EPCs exposed to TGF-α.A: control group; B: 1 μg/L TGF-α group; C: 5 μg/L TGF-α group; D: 10 μg/L TGF-α group; E: 10 μg/L TGF-α + EGFR-TKI group. Mean±SD. n=10. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs 10 μg/L TGF-α group.

Figure 3.The effect of TGF-α on the proliferation of EPCs by MTT assay. A: control group; B: 1 μg/L TGF-α group; C: 5 μg/L TGF-α group; D: 10 μg/L TGF-α group; E: 10 μg/L TGF-α + EGFR-TKI group. Mean±SD. n=15. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs 10 μg/L TGF-α group.

4 TGF-α對EPCs遷移的影響

如圖5所示，被誘導的EPCs細胞能夠從Transwell上室主動遷移到下室，經固定和結晶紫染色后可以觀察到發生遷移的EPCs細胞。與PBS對照組相比，各TGF-α處理組可以顯著誘導EPCs細胞遷移，但EGFR-TKI組中EPCs細胞遷移受到抑制。經過統計發現，PBS對照組中平均每個高倍視野(×200)內EPCs遷移數為38.75±4.92，而1、5、10 μg/L TGF-α處理組中EPCs細胞遷移數分別增加為63.50±3.69、75.25±2.76和90.75±3.50(均P<0.05)，EGFR-TKI組中EPCs細胞遷移數為45.00±2.16，顯著低于10 μg/L TGF-α單獨處理組(P<0.05)。

Figure 4.The effect of TGF-α on the proliferation of EPCs detected by EdU assay.A:control group; B: 1 μg/L TGF-α group; C: 5 μg/L TGF-α group; D: 10 μg/L TGF-α group; E: 10 μg/L TGF-α + EGFR-TKI group. Mean±SD. n=6. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs 10 μg/L TGF-α group.

5 TGF-α對EPCs細胞黏附能力的影響

如圖6所示，TGF-α能夠顯著提高EPCs細胞的黏附能力，并具有濃度依賴效應。在相同時間內，隨著TGF-α濃度的升高，EPCs細胞黏附能力提升。但TGF-α+EGFR-TKI組中EPCs細胞黏附能力未見明顯提升。經過統計發現，與PBS對照組中EPCs細胞黏附數30.34±4.16相比，1、5、10 μg/L TGF-α處理組中EPCs細胞黏附數分別增加為54.33±5.69、76.67±3.21和96.33±3.05(均P<0.05)，而TGF-α+EGFR-TKI組中EPCs細胞黏附數增加不明顯,為34.33±3.15，顯著低于10 μg/L TGF-α單獨處理組(P<0.05)。

Figure 5.The effect of TGF-α on the migration of EPCs detected by Transwell method.A:control group; B: 1 μg/L TGF-α group; C: 5 μg/L TGF-α group; D: 10 μg/L TGF-α group; E: 10 μg/L TGF-α+EGFR-TKI group. Mean±SD. n=10. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs 10 μg/L TGF-α group.

Figure 6.The effect of TGF-α on the adhesiveness of EPCs detected by cell adhesion experiment. A:control group; B: 1 μg/L TGF-α group; C: 5 μg/L TGF-α group; D: 10 μg/L TGF-α group; E: 10 μg/L TGF-α + EGFR-TKI group. Mean±SD. n=10. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs 10 μg/L TGF-α group.

6 TGF-α對EPCs細胞中EGFR和VEGF蛋白表達的影響

如圖7所示,Western blotting檢測發現TGF-α能夠誘導EPCs細胞中EGFR和VEGF的表達。相對PBS對照組，隨著TGF-α作用EPCs濃度的升高，EGFR和VEGF蛋白表達量也顯著上升，但EGFR-TKI組EGFR和VEGF蛋白表達量變化不明顯。經目的蛋白EGFR和VEGF的灰度值和內參照β-actin的比值進行比較統計，PBS對照組EGFR相對表達量為0.15±0.03，而1、5、10 μg/L TGF-α處理組EPCs細胞EGFR相對表達量分別為0.34±0.03、0.56±0.02和0.94±0.02(均P<0.05)，但TGF-α+EGFR-TKI組EGFR相對表達量為0.18±0.02,低于10 μg/L TGF-α單獨處理組(P<0.05)；PBS對照組中VEGF相對表達量為0.33±0.02，而1、5、10 μg/L TGF-α處理組EPCs細胞VEGF相對表達量分別為0.47±0.03、0.63±0.02和0.83±0.03(均P<0.05)，但TGF-α+EGFR-TKI組VEGF相對表達量為0.36±0.02,低于10 μg/L TGF-α單獨處理組(P<0.05)。

Figure 7.The expressions of EGFR and VEGF in the EPCs exposed to TGF-α. A:control group; B: 1 μg/L TGF-α group; C: 5 μg/L TGF-α group; D: 10 μg/L TGF-α group; E: 10 μg/L TGF-α + EGFR-TKI group. Mean±SD. n=10. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs 10 μg/L TGF-α group.

討 論

EPCs來源于骨髓、外周血和臍血等，可以分化成成熟內皮細胞。近年來研究表明EPCs在心腦血管疾病、外周血疾病、血管形成及創傷修復中均發揮重要作用[5]，并可為缺血性疾病的研究治療提供新的思路。當機體血管損傷或局部缺血時，EPCs可以通過增殖、遷移，黏附到血管損傷或缺血部位并直接分化成內皮細胞，從而發揮血管修復、新生作用[6]。同時血液中EPCs數量增多時亦可以直接修復損傷的血管，因此EPCs的細胞功能發揮對于血管損傷修復和新生有重要意義。轉化生長因子是具有廣泛生物學功能的細胞因子，在促進細胞增殖分化及組織損傷愈合中均發揮作用[7]，但關于其對EPCs功能的影響及其在血管損傷修復和新生中是否發揮作用尚未知。本研究以不同濃度TGF-α誘導處理人外周血中分離培養的EPCs，進而揭示其對EPCs增殖、遷移和黏附細胞功能的影響及機制。

通常循環EPCs在正常人血液中數量較低，而有冠心病或急性心血管疾病的病人血液中EPCs數量則更為降低,且細胞活力下降[8]。另有研究發現血液中EPCs數量與冠心病等危險因素呈負相關[9]。EPCs對動脈粥樣硬化性疾病具有獨立預測價值，其數量減少與動脈粥樣硬化嚴重性也相關。因此，EPCs可作為心血管疾病危險程度和預后的生物標志物，調控其增殖對于治療心血管疾病有重要價值。本研究中通過EPCs的單克隆實驗發現TGF-α能夠增強其克隆形成能力并具有濃度效應，而MTT和EdU實驗也顯示TGF-α能夠顯著促進EPCs的增殖，進而說明TGF-α能夠提升EPCs細胞活力，在EPCs增殖中發揮作用。

當組織缺血或血管發生損傷時，EPCs能夠及時從骨髓動員到外周血并通過遷移和黏附作用到達損傷或缺血部位分化成內皮細胞，促進血管新生和修復[10]。因此，EPCs的遷移和黏附細胞功能直接影響到血管的損傷修復及新生。有研究表明TGF-α能夠在組織損傷愈合中發揮重要作用[11]，但關于其對血管損傷修復中關鍵細胞內皮祖細胞的影響尚未知。在本研究以1、5、10 μg/L 不同濃度TGF-α處理人EPCs，首次發現TGF-α能夠誘導EPCs的細胞遷移及黏附，進而說明TGF-α能夠在血管損傷修復和血管新生中發揮積極作用。但當10 μg/L TGF-α和EGFR-TKI同時作用于EPCs細胞時，EPCs單克隆形成及增殖、遷移和黏附能力促進效應均不明顯，且顯著低于10 μg/L TGF-α單獨作用組，說明TGF-α對EPCs細胞功能發揮作用與表皮生長因子受體信號途徑相關。

EGFR作為TGF-α的受體，能夠與其結合進而激活機體細胞內信號轉導途徑發揮作用[12]。Zhao等[13]研究也發現TGF-α通過與EGFR結合，使受體酪氨酸磷酸化及信號轉導，進而發揮生物學效應。VEGF是一種特異性作用于血管內皮細胞的因子，可以誘導血管的生成及新生[14]。Sufen等[15]研究已證實VEGF可以直接促進內皮祖細胞的增殖、游走遷移和黏附功能從而促進新生血管的形成。本研究利用Western-blotting檢測不同濃度TGF-α對EPCs細胞中EGFR和VEGF表達的影響，發現隨著TGF-α處理EPCs濃度的升高，EPCs細胞中EGFR和VEGF含量也隨之顯著升高，說明TGF-α通過EGFR信號途徑對EPCs細胞發揮作用。TGF-α可以與EPCs細胞中受體EGFR結合，進而刺激VEGF的表達，促進EPCs的增殖、遷移和黏附等細胞功能。而在TGF-α+EGFR-TKI作用組，EPCs細胞中EGFR和VEGF表達量增加不明顯且顯著低于TGF-α單獨作用組，再次說明TGF-α對EPCs細胞功能的影響與EGFR信號途徑相關。

EPCs是治療缺血性疾病和修復血管損傷的良好種子細胞，具有巨大的臨床應用價值。在本研究中首次發現TGF-α在體外能夠顯著促進人EPCs的單克隆形成和增殖，增強其遷移和粘附細胞功能，誘導EFGR和VEGF表達發揮作用并與表皮生長因子受體信號途徑有關，對于血管損傷修復和缺血性疾病的治療具有重要意義。

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Transforming growth factor α promotes the proliferation, migration and adhesion of human endothelial progenitor cells

DAI Wen-jing1, ZHANG Jun2, ZHOU Jing-qun1, XIANG Chang-qing1, WANG Gang1

(1DepartmentofCardiology,2DepartmentofICU,RenheHospital,ThreeGorgesUniversity,Yichang443000,China.E-mail:zhoujingqun-1@medmail.com.cn)

AIM: To explore the effects of transforming growth factor-α (TGF-α) in the monoclonal formation, proliferation, migration and adhesiveness of human endothelial progenitor cells (EPCs). METHODS: The isolated and cultured EPCs were treated with various concentrations of TGF-α (final concentrations of 1, 5, 10 μg/L, respectively). At the same time, the PBS control and epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor (EGFR-TKI) group (10 μg/L TGF-α plus 1∶1 000 EGFR-TKI) were set. The effects of TGF-α on monoclonal formation, proliferation, migration and adhesiveness of EPCs were determined by clone formation experiment, thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), EdU, Transwell and adhesion assays, respectively. The expression of epithelial growth receptor (EGFR) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were measured by Western blotting. RESULTS: Different concentrations of TGF-α all significantly induced the monoclonal formation, proliferation, migration and adhesiveness of EPCs (P<0.01), which were inhibited by EGFR-TKI. The results of Western blotting showed that TGF-α also induced the expression of EGFR and VEGF with a certain concentration effect (P<0.01). CONCLUSION: By combining with EGFR induced the expression of VEGF, TGF-α significantly promotes the related cell function of monoclonal formation, proliferation, migration, adhesiveness in EPCs.

Transforming growth factor α; Human endothelial progenitor cells; Cell proliferation; Cell migration; Cell adhesion; Epidermal growth factor receptor

1000- 4718(2015)01- 0033- 07

2014- 08- 22

2014- 11- 01

教育廳自然科學研究計劃重點項目(No. D20091308)

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R363.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.01.007