MPP8在皮膚惡性黑色素瘤中的表達及意義

袁 波，石 磊，應振毅，林 蕾，應孟夏，周瓊艷

(寧波大學醫學院附屬醫院，浙江 寧波 315020)

●醫學研究

MPP8在皮膚惡性黑色素瘤中的表達及意義

袁 波，石 磊，應振毅，林 蕾，應孟夏，周瓊艷

(寧波大學醫學院附屬醫院，浙江 寧波 315020)

目的:探討M-期磷蛋白8(MPP8)在皮膚惡性黑色素瘤中的表達及其與臨床病理特征的關系。方法:采用免疫組織化學方法，對50例皮膚惡性黑色素瘤和50例色素痣組織中MPP8蛋白表達進行檢測，并結合患者臨床病理特征對檢測結果進行綜合分析。結果:皮膚惡性黑色素瘤組織中MPP8的陽性表達率及表達水平較色素痣組織高，且表達量與黑素瘤局部淋巴結轉移成正相關。結論:測定皮膚惡性黑色素瘤組織中MPP8蛋白表達，為患者預后的判斷和分子靶向等惡性黑色素瘤治療藥物的應用奠定了理論基礎，結論值得進一步研究。

MPP8;皮膚惡性黑色素瘤;蛋白表達

黑色素瘤是常見的皮膚癌之一，而侵襲轉移仍是導致惡性黑色素瘤患者死亡的最主要原因，惡性黑色素瘤在臨床上早期即可出現淋巴結、肝、肺、腦等處的轉移，患者一旦出現轉移，治療上比較棘手，且預后很差［1］。本研究主要探討黑色素瘤的發生發展中MPP8可能的角色。

一、資料和方法

(一)病例收集。

收集皮膚惡性黑色素瘤標本50例(黑色素瘤組)和皮膚色素痣(對照組)50例，所有患者術前無放、化療及靶向治療，臨床及病理資料完整，所有標本均經病理科組織病理學和免疫組織化學確診。

(二)實驗方法。

鼠抗人MPP8單克隆抗體標本經10%甲醛固定，制成防脫石蠟切片，采用免疫組化SP法染色:常規脫蠟至水;檸檬酸鹽緩沖液高溫修復2min，冷卻后PBS沖洗;再用3%H202阻斷10min，PBS沖洗;擦干后迅速加入MPP8單克隆抗體(1：100)，室溫孵育1h后PBS沖洗;滴加二抗，孵育15min后PBS沖洗;DAB顯色;蘇木精復染，常規脫水，透明，中性樹膠封片。顯微鏡觀察。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

(三)免疫組化的結果判斷。

MPP8的表達由染色陽性細胞的數量和染色程度來評分，陽性細胞數量(＜5%，0分;5-25%，1分;25-50%，2分;＞50%，3分)，染色強度(無色，0分;淡黃色，1分;黃色，2分;棕黃色，3分)，兩者評分相乘，0分定為陰性(-)，1-3分定為弱陽性(+)，4-6分定為中等陽性(++)，＞6分定為強陽性(+++)。

(四)統計分析。

采用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析。采用卡方檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

二、結 果

(一)MPP8蛋白的表達和分布。

50例黑色素瘤組織中，MPP8陽性率為66.7%(33例)，顯著高于色素痣的陽性率24.0%(12例)，差異有統計學意義(P＜0.05)(見表1)。

表1 MPP8蛋白在皮膚黑色素瘤和色素痣中的陽性表達情況

(二)MPP8表達水平與黑色素瘤患者臨床病理特征的關系。

MPP8蛋白表達量與黑色素瘤淋巴結轉移呈正相關(P＜0.05)，而與患者年齡、性別、腫瘤厚度、腫瘤厚度無顯著相關性(P＞0.05)(見表2)。

表2 皮膚黑色素瘤中MPP8蛋白表達與患者臨床病理特征的關系

三、討 論

MPP8在結構上它含有2個功能域:氨基端染色質域和羧基端的錨蛋白結構域［2］，在有絲分裂期，體內與體外實驗均發現MPP8通過調節DNA甲基化和組蛋白H3甲基化之間的相互作用，調節基因的轉錄，參與細胞的各個生命過程［3］。MPP8結合甲基化H3K9后可以招募H3K9甲基轉移酶GLP和ESET以及DNA甲基轉移酶Dnmt3a形成沉默復合體到E-cadherin基因的啟動子上。對E-cadherin基因啟動子的H3K9(H3K9)和DNA進行甲基化，抑制E-cadherin的表達［3］，MPP8通過調控E-cadherin的表達，在腫瘤的惡性化過程中扮演著重要的角色。

在本研究中發現，人皮膚黑色素瘤組織中MPP8蛋白表達陽性率顯著高于色素痣，且MPP8的表達量與黑素瘤局部淋巴結轉移成正相關。腫瘤細胞從原發部位脫落是腫瘤轉移的始動環節，這一過程與細胞黏附功能降低密切相關。鈣粘素E-cadherin可與細胞骨架相互作用，形成具有錨定作用的復合物。各種原因導致E-cadherin復合體的低表達，都將導致細胞間粘附連接的減弱，進而導致腫瘤的轉移。

綜上所述，MPP8在人皮膚黑色素瘤組織中高表達，并且與局部淋巴結侵襲關系密切，作用機制可能與MET相關，MPP8在黑色素瘤組織中的作用及作用機制，需要進一步的研究。

［1］Cancer statistics［J］.JAMA，2013，310(9):982.

［2］Chang Y，Horton J R，Bedford M T，et al.Structural insights for MPP8 chromodomain interaction with histone H3 lysine 9:potential effect of phosphorylation on methyl-lysine binding［J］.J Mol Biol，2011，408 (5):807-814.

［3］Kokura K，Sun L，Bedford M T，et al.Methyl-H3K9-binding protein MPP8 mediates E-cadherin gene silencing and promotestumour cell motility and invasion［J］.EMBO J，2010，29(21):3673-3687.

R739.5

A

1002-1701(2015)05-0123-02

2014-07

袁 波，男，碩士，主治醫師，研究方向:皮膚惡性腫瘤。

寧波市自然科學基金(編號:2014A610224)。

10.3969/j.issn.1002-1701.2015.05.065