足三里、三陰交、大椎配伍治療對腫瘤化療后升白效果及造血保護機制研究?

侯玉鐸

(山西中醫學院，太原030024)

足三里、三陰交、大椎配伍治療對腫瘤化療后升白效果及造血保護機制研究?

侯玉鐸

(山西中醫學院，太原030024)

目的:探討足三里、三陰交、大椎配伍治療在腫瘤化療過程中對白細胞和機體造血機制的保護作用。方法:選用SPF級小鼠108只，按隨機數字表法分為空白組、模型組、處方組各36只，對模型組和處方組均采用環磷酰胺(CTX)100 mg/kg/d進行造模，3 d后空白組蒸餾水灌胃，處方組采用足三里、三陰交、大椎配伍進行針灸治療，比較小鼠體質量及骨髓造血細胞變化情況。結果:造模前3組小鼠的白細胞、中性粒細胞、紅細胞、骨髓有核細胞計數、Cyclin D1蛋白積分光密度比較差異無統計學意義;造模組的上述指標較空白組在造模后第1、3、7天均有不同程度的下降;處方組上述指標隨著時間均呈增長趨勢，與造模前比較差異有統計學意義。結論:足三里、三陰交、大椎配伍治療對腫瘤化療過程中的小鼠具有升高白細胞、淋巴細胞和保護骨髓造血功能的作用。

足三里;三陰交;大椎;白細胞;肌體造血功能

惡性腫瘤嚴重威脅人類健康，臨床上通常采用手術以及放化療治療。由于這些治療方法均缺乏特異性，尤其是放化療后易出現不同程度的胃腸反應、免疫抑制以及骨髓抑制等副作用，給患者帶來極大的痛苦［1］，常使放化療延期甚至被迫中斷，因此腫瘤放化療后的輔助治療便顯得尤為重要。近年來，針灸在腫瘤放化療后的治療中表現出較高的臨床應用價值［2］。本研究主要以實驗動物SPF級小鼠為研究對象，分析足三里、三陰交、大椎配伍治療在腫瘤化療過程中對白細胞和機體造血機制的保護作用，為臨床實施化療病人減輕副作用提供有效的參考方法，其具體操作如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取健康SPF級小鼠108只，雌鼠51只，雄鼠57只，體質量18～22 g，由軍事醫學科學院實驗動物中心提供(動物合格證號SCXK(中)201308)。將108只小鼠按照雌雄按隨機數字表法分為空白組、模型組、處方組3組各36只，雌雄各17只、19只。本次實驗小鼠于實驗前3 d同一批次購入，并進行恒溫單獨喂養，自由進食進水。

1.2 主要試劑與設備

5 mg/ml的環磷酰胺CTX溶液，3%冰乙酸稀釋液，3%醋酸液，奧林巴斯雙目光學顯微鏡，離心機SHANDON，冰箱。

1.3 實驗方法

造模方法:參照《新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編》的方法造模［2］，模型組和處方組均采用環磷酰胺(CTX)100 mg/(kg·d)連續3 d腹灌胃，空白組給予相同劑量蒸餾水灌胃(造模完成主要依據CTX的藥代動力學過程，4 h后藥物活性消失)。

治療方法:造模完成后處方組采用足三里、三陰交、大椎配伍進行針灸治療，小鼠穴位定位參照小鼠常用針灸穴位［3］:選取小鼠足三里、三陰交、大椎穴位，取小鼠俯臥位將其固定在鼠板上，采用管式進針法直刺，管針選擇長度為5 mm的美容毫針，置于小鼠各個穴位，進針時針高于針管3 mm，進針深度為2 mm，進針后使針管上口和針尾持平。每個穴位均采用直刺的方式，留針6 min，每天1次，持續治療3 d和7 d。

1.4 檢測指標及方法

1.4.1 外周血血細胞計數于造模前和造模后第1、3、7天對小鼠割尾采血20 μ l，分別滴入390 μ l的3%冰乙酸稀釋液，取樣本在普通光學顯微鏡下進行WBC、紅細胞、中性粒細胞和淋巴細胞計數。

1.4.2 骨髓有核細胞計數于造模前和造模后第1、3、7天稱重，分別處死9只小鼠，取右側完整股骨除凈軟組織，用3%醋酸液10 ml沖出全部骨髓，使其成單細胞懸液在顯微鏡下計數骨髓有核細胞。

1.4.3 骨髓CyclinD1蛋白積分光密度采用SP法，按照試劑盒說明逐步操作。采集小鼠骨髓CyclinD1蛋白免疫組化染色圖像，采用Image-ProPuls圖像分析軟件進行圖像分析，每張圖片在放大40倍的顯微鏡下隨機選取5個視野進行觀察，測定CyclinD1蛋白積分光密度值(IOD)，取其平均值作為CyclinD1蛋白的表達強度指標。

1.5 統計學方法

所有數據錄入Excel2003，在SPSS 10.0中進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示，采用配對資料t檢驗或單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，檢驗水準取α=0.05。

2 結果

2.13 組白細胞計數結果比較

表1圖1顯示，3組造模前白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、紅細胞、骨髓有核細胞計數比較差異無統計學意義(P＞0.05);造模后第1、3、7天，造模組白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、紅細胞、骨髓有核細胞計數均明顯低于空白組(P＜0.05)，處方組各時段白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、紅細胞、骨髓有核細胞計數呈不斷增長態勢，處方組白細胞、中性粒細胞、骨髓有核細胞第3、7天和造模組、空白組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

表13 組白細胞各時段變化情況比較(109/l，±s)

表13 組白細胞各時段變化情況比較(109/l，±s)

注:與空白組比較:aP＜0.05，與造模組比較:bP＜0.05，與造模前比較:cP＜0.05

觀察指標組別造模前造模后1 d造模后3 d造模后7 d白細胞(1 0 9/l)空白組14.37±4.6414.24±4.3814.48±4.7314.51±4.76造模組14.35±4.613.66±3.76ac4.82±3.98ac10.51±4.52ac處方組14.39±4.683.73±3.81abc7.88±4.47abc17.86±5.52abc中性粒細胞(109/l)空白組8.78±1.168.24±1.098.48±1.148.51±1.19造模組8.67±1.181.94±0.89ac1.37±0.88ac6.14±2.34ac處方組8.71±1.211.53±0.88ac3.46±0.89abc16.89±3.37abc淋巴細胞(1 0 9/l)空白組6.83±1.836.78±1.796.81±1.808.679±1.81造模組6.81±1.801.64±0.86ac2.57±1.08ac4.68±1.48ac處方組6.85±1.791.73±0.88ac2.67±1.14ac7.32±2.37ab紅細胞(1 0 9/l)空白組10.87±2.4410.84±2.3910.91±2.2810.94±2.38造模組10.85±2.519.21±1.89ac9.41±2.67ac8.47±1.48ac處方組10.89±2.419.23±1.88ac10.79±1.9810.04±2.34b骨髓有核細胞(109/l)空白組30.86±7.0130.79±6.9830.72±6.8930.88±7.02造模組30.79±6.993.47±1.83ac5.68±2.24ac13.67±3.89ac處方組30.89±7.015.88±2.88abc9.80±3.98abc17.98±5.34abc

圖1 骨髓組織結構HE染色片(×40)，A為空白組、B為模型組、C為處方組

2.2 3組骨髓抑制骨髓CyclinD1蛋白積分光密度

表2顯示，3組造模前骨髓抑制骨髓CyclinD1蛋白積分光密度比較，造模組在第3、7天和空白組比較差異有統計學意義(P＜0.05);處方組在第3、7天和空白組比較差異無統計學意義，與造模組在第7天比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

表2 3組中骨髓抑制骨髓CyclinD1蛋白積分光密度各時段變化情況(%)

3 討論

白細胞減少屬于中醫學“虛勞”、“氣血虛”等范疇，臨床表現為四肢乏力、心悸、頭暈等，嚴重影響患者的生活質量［3］。中醫認為［4］，白細胞減少與心、肝、腎、脾等臟器有關，其中脾、腎兩虛是導致白細胞減少的根本原因。脾為后天之本，氣血生化之源，具有滋養五臟六腑的功能，脾虛則氣血虧。腎屬于先天之本，可生骨髓，腎氣不足致使骨髓不充［5］。化療后邪毒侵犯機體，致機體白細胞減少，造血功能隨之受損［6］。中醫辨證認為［7］，腫瘤患者化療后白細胞減少通常兼有氣滯血瘀的臨床表現，屬于本虛標實，治療時當益氣健脾、滋養肝腎、行氣活血，可用中醫針灸治療以快速緩解患者的疼痛感，補虛扶正，以提高患者機體免疫力，降低化療副反應［8-9］。

多項臨床實踐證實，惡性腫瘤患者化療后進行足三里、三陰交、大椎配伍針灸治療，可以有效緩解患者的疼痛，提升患者的白細胞數目和骨髓造血功能［10］。足三里又稱為“下陵”穴，位于小腿前外側，具有健脾生津、調理氣機、益氣活血、益腎養肝、健脾和胃、益氣活血、扶正培元、通經活絡的作用，對于惡性腫瘤患者化療后白細胞減少癥具有較好的功效［11-12］;三陰交乃足三陰經交會穴，功可健脾攝血、補肝益腎，又可理氣血、安心神、通經絡，治療與肝、脾、腎三臟有關病證;大椎是督脈、六陽之會，可扶正祛邪、振奮陽氣、益氣補血13］，三穴配伍針灸治療，可以相互促進、活血益氣、調理氣機、振奮陽氣、扶正祛邪、標本兼治，能有效提高患者外周血白細胞的數量，緩解化療的胃腸反應，調整免疫功能。相關研究表明［14］，足三里、三陰交、大椎配伍針灸能有效促進化療后動物骨髓增生的活躍度，增加外周血的白細胞，同時促進巨噬細胞的吞噬功能，調節機體免疫能力，達到緩解病情的效果。

本研究結果顯示，足三里、三陰交、大椎配伍進行針灸治療在腫瘤化療過程中均可以有效升高小鼠WBC、中性粒細胞、淋巴細胞、紅細胞、骨髓有核細胞等數目，保護腫瘤小鼠的骨髓造血功能，與以前的報道一致［15］。由此可見，足三里、三陰交、大椎配伍針灸治療腫瘤患者化療造成的白細胞降低效果良好，可以有效地保護骨髓造血功能，升高白細胞和淋巴細胞數目。

綜上所述，足三里、三陰交、大椎配伍針灸能有效提高腫瘤患者化療后的白細胞水平，保護骨髓造血功能，幫助患者安全度過化療后易感染期，提高患者生活質量，值得臨床推廣。

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R245.31

:A

:1006-3250(2015)05-0578-03

2015-02-10

山西省自然科學基金資助項目(2013011046-10)

侯玉鐸(1972-)，女，山西翼城人，講師，醫學碩士，從事針灸基礎與臨床研究。