苯乙醇胺A檢測技術研究進展

摘 要 人們對動物性食品的質量安全問題日益關注，尤其是食品中藥物類的殘留。與此同時，藥物殘留檢測技術水平也得到了提高和完善。以苯乙醇胺A為例，對相應的檢測方法進行綜述，包括高效液相色譜技術、質譜技術、酶聯免疫技術以及電化學發光免疫技術等。

關鍵詞 苯乙醇胺A；檢測技術；研究進展

中圖分類號：S859.84 文獻標志碼：A 文章編號：1673-890X（2015）10-044-03

知網出版網址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.S.20150428.1135.017.html 網絡出版時間：2015/4/28 11：35：00

苯乙醇胺A（Phenylethanolamine A），別名克侖巴胺，為福莫特羅同分異構體，是瘦肉精的一種，運用到畜牧業具有提高畜禽瘦肉率和脂肪再分配等作用，但人食用后會對身體健康造成潛在的威脅。介紹苯乙醇胺A的結構和性質，分析目前的主要檢測方法。

1苯乙醇胺A概述

苯乙醇胺A即2-[4-（4-硝基苯基）丁基-2-基氨基]-1（4-甲氧基苯基）乙醇，是β-激動劑的一種，分子式為C19H24N2O4，分子量為344。研究發現，苯乙醇胺能夠降低飼料消耗，提高瘦肉率[1]，并且在低蛋白質日糧條件下能有效保持豬的高增長速度[2]。但食用含苯乙醇胺類殘留的動物源性產品，會對人體健康產生嚴重的危害，導致頭暈、心悸等癥狀，尤其是對心臟病、高血壓患者最為明顯[3-4]。2011年，苯乙醇胺A以新型瘦肉精的身份為大家所熟知，不法分子用苯乙醇胺A替代克倫特羅等傳統瘦肉精添加到飼料預混料中，妄圖逃避打擊。農業部1519號公告明確指出禁止在飼料和動物飲水中使用苯乙醇胺A，因此完善苯乙醇胺A的檢測方法將有助于監管部門對該類藥物的監控和管理。

目前，檢測苯乙醇胺A的方法多種多樣，主要包括高效液相色譜技術、氣象色譜-質譜技術、液相色譜-質譜技術、電化學技術以及免疫酶技術等。部分檢測方法及對應檢出限見表1[5-9]。

2檢測技術

2.1高效液相色譜法（HPLC）

在多數情況下，不同物質在流動相和固定相中具有不同的分配系數，經過多次分配后能夠得以完全分離。該種分離技術運用于分析檢測，則稱之為色譜分析。高效液相色譜作為色譜法的一個主要分支，以液體作為流動相，運用高壓輸液系統來加速對各組分的分離，具有選擇性好、分離效率高、分析速度快、樣品用量少、多組分同時分析、檢測靈敏度高等優點。王瑞國等利用甲酸-甲醇混合液提取飼料中苯乙醇胺A，PCX固相萃取柱凈化，氨水-甲醇溶液洗脫吹干后，以甲酸水溶液-甲醇溶解，過濾膜上機測定，不同基質飼料樣品測得回收率為68.7%～96.8%，檢出限和定量限分別為0.3 mg/kg和1.0 mg/kg[5]。梅麗蕓利用免疫親和柱對飼料、豬肉、豬肝中苯乙醇胺A凈化富集，加標回收率為89.48%～101.98%[10]。但液相色譜也存在定性能力差的缺點，僅能依靠保留時間和紫外吸收圖譜來進行鑒別，對于化學性質相近的物質則難以區別，同時液相色譜檢測靈敏度有限，對于動物產品中痕量苯乙醇胺A的檢測能力還有待提高。

2.2質譜法（MS）

2.2.1 液相色譜-質譜法（LC-MS）

液相色譜-質譜聯用儀是聯合了液相色譜與質譜的儀器，它以色譜為分離系統，質譜為檢測系統。樣品經分離后離子化，離子碎片通過質量分析器按質荷比分開得到質譜圖。液質聯用結合了色譜和質譜優勢，色譜分離能力強，質譜選擇性高、靈敏度高并且能夠提供樣品分子量與結構信息，二者結合起來，在藥物殘留等分析領域有廣泛的應用。曲斌等利用高氯酸酸化尿液，過固相萃取柱凈化的方法，經LC-MS測定豬尿中的苯乙醇胺A，定量限達到了0.2 μg/L[11]。盧艷芬采取LC-MS法測定豬肉中殘留的苯乙醇胺A，在前處理過程中經酶解、酸化和調節樣品溶液pH以提高萃取效率。試驗發現，在52℃水浴酶解2 h，酶解濃度達到峰值，檢測限和定量限分別為0.2 μg/kg和0.5 μg/kg，回收率大于79.0%[12]。

目前，因分析時間短、檢測限低以及定性分析結果可靠等優點，LC-MS法已經作為檢測苯乙醇胺A殘留的確證方法。其缺點是儀器價格昂貴、檢測成本高、檢測技術難以掌握、應用還不夠普遍。

2.2.2 氣相色譜-質譜法（GC-MS）

GC-MS與LC-MS主要的區別在于色譜，LC-MS的流動相為液體，而GC-MS的流動相是惰性氣體，另外在前處理方面1個主要的區別是GC-MS需要對樣品中目標化合物分子的氨基、羥基等極性基團衍生化，相比LC-MS前處理過程更加繁瑣。所以目前國內關于GC-MS檢測苯乙醇胺A的報道很少。楊正彗以pH值3.6的乙酸鈉緩沖液為提取液，通過MCX小柱凈化，運用GC-MS法檢測飼料樣品中的苯乙醇胺A。試驗發現，樣品加入80 μL衍生化試劑在60℃下反應，運用SIM采集模式，檢測結果有較好的靈敏度和重現性，檢出限達到了3.8 μg/L[6]。

2.3酶聯免疫吸附法（ELISA）

酶聯免疫吸附法是通過抗原與抗體的特異性反應，將酶與待測物連接，而后酶與底物產生顏色反應，多用于篩選和定量。酶聯免疫吸附法包括雙抗體夾心法、雙位點一步法、檢測法測抗體、競爭法、捕獲法測IgM抗體、應用親和素和生物素的ELISA法。目前，ELISA法在實驗室有著廣泛的應用，操作簡單、快速是其主要特點，適合于大量樣品的快速篩選檢測，尤其是基層獸藥殘留監管部門普遍采用的方法。曹碧云建立了檢測飼料和動物組織中苯乙醇胺A間接競爭的ELISA法，該方法靈敏度高，特異性高，回收率為92.2%～113.7%，檢出限達到了0.003 μg/L[9]。但ELISA法也有著致命的缺點，那就是假陽性率還比較高，對于篩選出來的陽性樣品還需要通過液相色譜-質譜聯用方法確證。

2.4電化學發光免疫分析法

電化學發光是1種集合了電化學與發光分析的痕量分析技術，具有高靈敏度和可控性好的優點。免疫傳感器是把特異性的免疫反應與高靈敏度的傳感技術結合，用來監測抗原-抗體反應的一種生物傳感器。將電化學發光與免疫傳感技術相結合，則在新型瘦肉精檢測領域有著廣泛的應用前景。湯慶會等建立的基于量子點和酶放大電化學發光免疫法檢測苯乙醇胺A過程中，與電化學發光強度成線性關系的苯乙醇胺A濃度被拓寬到0.05～1000 μg/L，檢出限達到了0.015 μg/L[8]。閆盼盼分別以巰基乙酸和檸檬酸三鈉作為穩定劑和還原劑，利用合成的CdSe量子點和膠體金組建成了一種電化學發光免疫傳感器，并實際用于豬肝、豬肉和尿液樣品中苯乙醇胺A的檢測，回收率為82%～124%，重現性、穩定性和選擇性良好[13]。

3小結

綜上所述，在現有的苯乙醇胺A殘留檢測方法中，高效液相色譜法、氣相色譜-質譜法、液相色譜-質譜法具有較高的靈敏度，其中液相色譜-質譜法被農業部1486號公告用作飼料中苯乙醇胺A的確證方法，但對儀器設備和人員素質要求比較高；酶聯免疫檢測法快速、簡單，主要用于篩選檢測；電化學發光免疫傳感技術靈敏、快速，能夠對苯乙醇胺A進行現場監測，是今后新型瘦肉精殘留檢測的重要研究方向。只有不斷完善新型瘦肉精的監測手段，提高檢測水平，才能夠保證動物性食品的質量安全。

參考文獻：

[1]李呂木，詹凱，吳東，等.苯乙醇胺對肉鴨生產性能和生化指標的影響[J].中國家禽，1998，（9）：7-9.

[2]金邦荃，徐小明，于亞君，等.日糧中蛋白質和賴氨酸在β-激動劑的控制下對豬生長和肌肉發育的影響[J].飼料研究，1997，（12）：6-8.

[3]王政，倪衛忠，嚴敏鳴.新型“瘦肉精”種類及其檢測方法研究進展[J].上海畜牧獸醫通訊，2013，（2）：30-31.

[4]蘇麗芳，何丹婷，徐飛，等.新型瘦肉精殘留的檢測方法研究進展[J].中國獸醫雜志，2014，50（5）：59-61.

[5]王瑞國，蘇曉歐，王培龍，等.超高效液相色譜法測定飼料中苯乙醇胺A[J].分析化學，2013，41（3）：389-393.

[6]楊正彗.氣相色譜-質譜法檢測β-受體激動劑殘留量的方法研究[D].吉林：吉林大學，2012.

[7]徐素彬，趙立軍，柏林，等. 高效液相色譜-串聯質譜法對家畜尿液中苯乙醇胺A殘留檢測研究[J].分析化學，2013，41（5）：776-780.

[8]湯慶會，蔡福東，鄧安平，等.基于量子點和酶放大電化學發光競爭免疫法超靈敏檢測β-腎上腺素受體激動劑苯乙醇胺A[A].第十八屆全國分子光譜學學術會議論文集[C].北京：北京大學出版社，2014， 423-424.

[9]曹碧云.三聚氰胺、沙丁胺醇及苯乙醇胺A的酶聯免疫吸附分析法（ELISA）的研究和應用[D].蘇州：蘇州大學，2013.

[10]梅麗蕓.食品中氟喹諾酮類抗生素酶聯免疫吸附分析法及苯乙醇胺A免疫親和色譜法的研究[D].蘇州：蘇州大學，2014.

[11]曲斌，鄭勝蘭，陸桂萍，等.固相萃取-UPLC-MS/MS快速測定豬尿中的苯乙醇胺A[J].中國獸藥雜志，2012，46（1）：25-27.

[12]盧艷芬.超高效液相色譜-串聯質譜法測定豬肉和豬尿中的苯乙醇胺A[J].檢驗檢疫學刊，2013，23（1）：41-44.

[13]閆盼盼.基于量子點和膠體金電化學發光免疫傳感器的構建及應用[D].蘇州：蘇州大學，2014.

（助理編輯：易婧；責任編輯：敬廷桃）