慢性阻塞性肺疾病合并肺結核患者IL-6、IFN-γ、TNF-α水平的變化及臨床意義

包薩日娜

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種以呼吸不暢為主的全身性系統疾病，具有預后較差、發病率高的特點[1]。當病毒或細菌所含的某些抗原成分或代謝產物如脂多糖、內毒素感染呼吸道時，激活呼吸道T淋巴細胞產生多種細胞因子，且這些細胞因子形成相互作用，并將血液循環中的炎癥細胞聚集至肺部，導致氣道特征性結構改變[2]。既往研究報道提示作為重要炎癥因子和免疫介導因子的白介素6（IL-6）、干擾素（IFN-γ）、整合素（TNF-α）等可能與COPD的發生發展過程有關[3-5]。

結核?。╰uberculosis，TB）的免疫主要是由T淋巴細胞所介導的，多種細胞因子（cytokine，CK）參與的免疫應答及免疫發病過程[6]。研究表明，活動性肺結核患者以前炎細胞因子反應為主，IL-6、TNF-α水平增高，伴有TGF-β升高[7]。然而，對于COPD合并肺結核患者中細胞因子水平的表達狀態和特征卻鮮有報道。為此，筆者對COPD合并肺結核患者、肺結核患者、COPD患者以及正常健康人血清細胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α水平進行檢測，探討其在COPD合并結核病發生發展過程中的作用和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年3月-2013年12月本院呼吸內科收治入院治療的152例COPD并發TB、150例TB及157例COPD患者和50例同期入院檢查的正常健康人作為研究對象，對比分析每組人群的血清細胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α水平變化情況。診斷標準如下，（1）肺結核：參照臨床診療手冊（結核病分冊）診斷標準[8]。（2）COPD：參照GOLD執行摘要指南標準，即氣流受限是指FEV1/FVC<70%以及FEV1<80%預計值[9]。所有COPD并發TB患者均是在診斷肺結核前即確診患有COPD。所有COPD患者雖伴有輕中度氣流受限，但臨床表現穩定，且近期無急性發作及使用激素史。（3）健康對照組為本院同期門診體檢的、年齡及性別與其他組別相匹配的健康志愿者，均經X線胸片檢查且未見異常。所有研究人群的HIV檢查結果均為陰性，無其他系統性自身免疫疾病及應用免疫抑制劑病史，同時均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 清晨抽取所有研究對象靜脈血5 mL于促凝管，3000 rpm，離心15 min，取上清，-20 ℃保存待測。所有肺結核患者的采血時間均在應用抗結核治療藥物之前進行。

1.2.2 實驗試劑及儀器 均采用上海信然生物試劑有限公司生產的人白細胞介素6（IL-6）ELISA檢測試劑盒、人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒、人γ干擾素（IFN-γ）ELISA檢測試劑盒；離心機（22R）產于美國貝克曼庫爾特公司。

1.2.3 實驗步驟 采用雙抗體夾心ELISA方法測定患者血清中的細胞因子IL-6、TNF-α、IFN-γ水平。實驗過程均嚴格按照各種細胞因子檢測試劑盒中的說明書進行。簡要步驟如下：將50 μL待測樣品、50 μL稀釋好后的標準品溶液分別加入事先包被有細胞因子特異性單克隆抗體的96孔微孔板中，37 ℃溫箱溫育1 h，洗板3次后加入HRP標記的另一抗體，同上溫育和洗滌后加入TMB底物液后室溫避光顯色30 min，加入終止液終止反應，于450 nm波長處測定吸光度（A）值。依據標準品的濃度及相應OD值繪制標準曲線，進一步計算出每組研究對象待測血清中相應細胞因子的水平。

1.3 統計學處理 采用統計學軟件SPSS 13.0對實驗數據進行分析，計量資料采用（±s）表示，組間比較采用多個獨立樣本的非參數檢驗中的Kruskal-Wallis檢驗以及Mann-Whitney U檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組一般情況比較 各組研究對象的年齡、性別、合并癥比較差異均無統計學意義（P>0.05）。COPD合并TB組、COPD組及TB組患者的吸煙比例及FEV1%均明顯高于健康對照組，且COPD合并TB組及COPD組吸煙比例及FEV1%均明顯高于TB組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 各組血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α水平比較COPD合并TB組及TB組IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義（K-W字2=22.401、77.842、83.142，P=0.000<0.05）。COPD 合并TB組IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明顯高于TB組，差異均有統計學意義（Z=-2.105、-6.716、-2.956，P=0.035）。COPD合 并 TB組 IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明顯高于COPD組，差異均有統計學意義（Z=-7.605、-7.107、-9.894，P=0.000），見表 2。

3 討論

既往研究表明，多種細胞因子在結核病的免疫反應中發揮重要作用[10]。如IL-2、IFN-γ等Th1型細胞因子，IL-5、IL-4等Th2型細胞因子，以及TNF-α、IL-1、IL-6等前炎癥細胞因子均廣泛參與結核病的免疫發病過程中[11]。當COPD患者呼吸道受到病毒或細菌感染時，激活局部肺泡巨噬細胞產生TNF-α、IL-2等炎性因子，其被吸收入血以及內毒素引起體內單核巨噬細胞廣泛的激活，可導致血中TNF-α、IL-6升高[12]。此外，有報道還稱，COPD急性發作期及治療緩解后血清lL-6、TNF-α水平均高于健康對照組，這表明COPD患者存在IL-6、TNF-α的過量產生[13]。

表1 各組一般情況比較

表2 各組血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α水平的比較（x-±s） ng/L

IL-6是具有多種功能的前炎癥細胞因子，可促進T細胞和B細胞的分化與增殖，參與早期炎癥反應。Siawaya等[14]研究發現，與潛伏結核感染（LTBI）相比，活動性肺結核患者血清IL-6水平升高。本研究結果顯示，COPD合并TB組以及TB組IL-6水平明顯高于健康對照組；COPD合并TB組IL-6水平明顯高于TB組；COPD合并TB組IL-6水平明顯高于COPD組，提示COPD合并TB患者IL-6水平升高可能與炎癥反應的產生和持續存在有關。

TNF-α由多種細胞分泌包括巨噬細胞、淋巴細胞、中性粒細胞、肥大細胞和內皮細胞，在抵抗病原菌的早期炎癥反應中起作用，能清除炎癥病變中的病原體[15]。Sutherland等[16]研究發現，在活動性結核病時TNF-α水平明顯升高，過高的TNF-α可引起結核病變破壞加重、組織壞死、惡病質等。本研究結果顯示，相對于健康對照組人群的TNF-α水平，COPD合并TB組以及TB組的TNF-α水平均增高；對于TB組患者的TNF-α水平，COPD合并TB組的TNF-α水平增高；對于COPD組患者的TNF-α水平，合并TB組TNF-α水平明顯增高，這些結果均提示TNF-α參與了COPD合并肺結核的免疫發病過程。

IFN-γ是由Th1細胞分泌的免疫調節因子，具有促進結核肉芽腫形成、增強巨噬細胞殺菌作用的能力，在抗結核免疫中起著重要作用[17]。本研究結果顯示，相對于健康對照組人群的IFN-γ水平，COPD合并TB組以及TB組的IFN-γ水平均增高；對于COPD組患者的IFN-γ水平，合并TB組IFN-γ水平明顯增高，然而，在COPD合并TB組和TB組之間IFN-γ水平未見明顯差異。這可能反映了COPD合并TB患者保護性免疫反應無明顯增加。

總之，COPD合并TB患者血清細胞因子lL-6、TNF-α、IFN-γ水平水平存在不同程度的失衡，說明其細胞免疫功能已經遭受不同程度的侵害。但與單純COPD和TB患者相比較，其免疫受損的程度更為明顯。這些結果提示適應性免疫反應在COPD合并TB的發生發展中發揮重要作用。深入研究COPD和肺結核免疫功能以及進一步闡明其免疫發病機制，能夠積極為免疫干預治療提供理論依據。

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