ABI 7500與TL 988實時熒光PCR儀的性能評價

潘強龍 周成林 楊先知 謝國良 崔大偉

[摘要] 目的 探討ABI 7500與TL 988熒光定量PCR儀之間的性能差異。 方法 參照EP9-A2文件中的評價標準，兩臺儀器分別對5種不同濃度的甲型流感病毒陽性質控品進行檢測，每個濃度測量20次，比對兩種儀器的精密度、靈敏度，并評價兩臺儀器結果一致性。 結果 精密度：TL 988的變異系數（CV）從0.68%到1.52%，ABI 7500的CV從1.93%到2.69%。兩臺儀器在檢測高濃度的甲型流感病毒DNA時（107、106、105 copies/mL）差異無統計學意義（P>0.05），檢測低濃度的病毒DNA時（104、103 copies/mL）差異有統計學意義（P<0.05）。靈敏度：兩種儀器檢測濃度103 copies/mL時，TL 988陽性檢出率為100%，ABI 7500檢出率為0。兩種儀器檢測數據相關性良好（r=0.998）。結論 熒光定量TL 988 PCR儀器的性能（精密度和靈敏度）比ABI 7500好。

[關鍵詞] 熒光定量PCR儀；比對；精密度；靈敏度；一致性

[中圖分類號] R446.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）02-0155-02

根據ISO 15189要求，實驗室需要定期對使用的儀器進行性能評估，當實驗室使用兩套及以上檢測系統檢測同一項目時，應比對數據表明其檢測結果一致性。現筆者按EP9-A2文件要求[1-5]，對美國ABI 7500和國產TL 988的主要性能指標進行評估，以了解結果差異性與一致性，從而尋找國產儀器可替代國外產品的可能性。

1材料與方法

1.1材料

（1）主要儀器：ABI 7500和TL 988熒光定量PCR儀、生物安全柜、低溫高速離心機、超凈工作臺等。

（2）試劑：上海之江生物科技有限公司提供的甲型流感病毒熒光定量PCR檢測試劑盒。檢測標本：陽性定量質控品（含甲型流感病毒DNA的濃度為107 copies/mL），用free H2O準確10倍比稀釋成106、105、104、103 copies/mL，充分混勻，分裝250 μL到1.5 mL的eppendorf管中備用。

1.2 方法

1.2.1 精密度測定 按NCCLS標準，分別在ABI 7500和TL 988熒光定量PCR儀上同時檢測107、106、105、104 copies/mL四種濃度的陽性質控品。各濃度均測定20次，計算其均值、標準差和變異系數。

1.2.2 靈敏度測定 分別取107、106、105、104、103 copies/mL五個濃度標本在兩臺PCR儀上進行檢測，根據陽性檢測率分析其靈敏度。

1.2.3相關性檢測 通過重復性試驗中的數據，分別取107、106、105、104 copies/mL濃度的檢測結果的平均值，分析兩臺儀器的數據相關性。

1.3統計學方法

應用SPSS 17.0統計學軟件對數據分析處理。檢查是否有離群值，對數據進行初步檢查，兩變量間線性關系分析采用直線相關及回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1兩臺儀器精密度結果比較

TL 988 和ABI 7500兩臺熒光PCR儀器的精密度結果比較，見表1。可以看出TL 988測得各濃度數據的變異系數（CV）從0.68%到1.52%，ABI 7500測得各濃度數據的變異系數（CV）是從1.93%到2.69%，變異系數（CV）均在要求范圍內（<10%），數據表明ABI 7500的精密度略低于TL 988（P>0.05）。此外，關于相同濃度的標準品檢測結果的Ct值和標準差分析，顯示兩臺PCR儀的批內重復性均良好。

表1 兩臺儀器精密度結果比較

2.2兩臺儀器靈敏度結果比較

甲型流感病毒DNA的濃度在107、106、105、104 copies/mL時，兩臺儀器的陽性檢出率均為100%，當濃度為103 copies/mL時，TL 988檢出率依然為100%，但ABI 7500的檢出率為0。靈敏度方面，TL988要比ABI 7500能檢測到更低濃度，即靈敏度相對較高（P<0.05）。

2.3 相關性比較

兩臺儀器對各標本的甲型流感病毒DNA的含量進行測定，結果表明，兩臺儀器測定值的回歸直線方程為：y=1.2364x-5.2097（r=0.998），具有良好的直線相關和回歸關系。

3 討論

在2013年全球高科技產業值中，精密儀器醫療設備約為3萬億美金，占13%。而精密醫療設備基本上被國外所壟斷。醫療設備是現代醫療業發展的必備手段，所以需要加快精密儀器的國有化進程，降低成本，推動民族品牌企業不斷發展，降低老百姓就醫費用成本。

熒光定量PCR技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針對PCR產物進行標記跟蹤，實時監控反應過程。與傳統的PCR技術相比，實時熒光定量技術具有特異性高等優點[6-8]，在檢測甲型流感病毒上具有很好的準確性。

另外實驗室中不應使用同一種檢測系統進行臨床檢驗，以避免儀器出現系統性的檢測錯誤[9-12]。對樣本進行檢測時，一般只做一次檢驗便要發出報告，這便要求儀器檢測系統具有良好的可重復性，因此對儀器的精密度具有很高的要求[12-14]。實驗室中，當樣本在低拷貝狀態下也要求有很高的檢出率。

兩臺儀器在試驗前，室內質控品的檢測結果均可靠，具有較好的重復性，此次試驗中，兩臺儀器未出現故障，穩定性良好，操作方便，檢測快速。對 ABI 7500熒光定量PCR儀在重復性、線性、靈敏度上與TL 988進行比較，結果顯示兩臺 PCR儀的批內批間重復性好， CV均在要求范圍內，線性良好。ABI 7500在精密度和靈敏度上明顯略遜于TL 988，可能與本次試驗中所用試劑與國產TL 988更配套，致使TL 988在本次試驗中表現優異。兩臺儀器測定值比較，r=0.998，表明兩臺儀器具有良好的直線相關和回歸關系。說明ABI 7500與TL988測定甲型流感病毒的結果具有可比性，而國產TL 988 PCR儀能較好地服務于臨床。

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（收稿日期：2014-07-17）