木犀草素、黃芩素和槲皮素單體配伍復方的優化及抗慢性咽炎作用

劉濤　韓淑英

【摘 要】目的：正交試驗法優化木犀草素、黃芩素、槲皮素單體復方的配伍，并觀察優選方對慢性咽炎的療效。方法：以木犀草素、黃芩素、槲皮素為三因素，每個因素擬定三個劑量水平，通過三因素三水平的正交試驗表L9（34）安排實驗，以二甲苯致小鼠耳腫脹為指標，優選配伍劑量。用優選的復方觀察其抗炎作用及對家兔慢性咽炎的療效。結果：三因素組合的9個治療組對小鼠耳腫脹度均低于空白組，優選的三素最佳配伍是木犀草素高劑量，黃芩素中劑量和槲皮素中劑量組合（4：3：1）。抗炎驗證實驗：優選的復方對小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫均有明顯抑制作用，能明顯改善家兔慢性咽炎的癥狀，減輕咽部黏膜病理損傷，中、高劑量組效果更佳，其療效在某些方面優于黃氏響聲丸。結論：木犀草素、黃芩素、槲皮素按4：3：1比例組成單體復方對慢性咽炎療效好。

【關鍵詞】木犀草素；黃芩素；槲皮素；單體復方；慢性咽炎

1 材料

SD大鼠，SPF級，體重185～205g，♀♂各半；SPF級昆明小鼠，18～22g，♀♂各半；大耳白兔，體重2.0～2.5kg，♀♂各半，（北京金牧陽實驗動物養殖有限責任公司）木犀草素、黃芩素和槲皮素（中國藥品生物制品鑒定所）；黃氏響聲丸（無錫濟民可信三禾藥業股份有限公司）；精密電子天平（梅特勒—托利多儀器有限公司）；臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）。

2 方法

2.1 正交實驗法優選三素單體復方配伍劑量

2.1.1 因素水平確定

通過三因素（木犀草素、黃芩素和槲皮素）三水平（三個劑量）的正交試驗表L9（34）安排試驗，三個水平劑量的確定是按臨床人常用量換算[1]的較小劑量為第二水平（中劑量）。以二甲苯致小鼠耳腫脹度為炎癥考核指標，優選配伍劑量。

2.1.2 二甲苯致小鼠耳腫脹實驗

小鼠隨機分組：1-9組為正交設計組，10組為空白組，根據人與小鼠的標準公斤體重劑量折算方法[2]。小鼠左右耳打下圓耳片，稱重，差值為腫脹度。

2.2 優選的三素單體復方抗炎作用驗證實驗

2.2.1 小鼠耳腫脹實驗

小鼠隨機分成空白組、阿司匹林組、三素復方高、中、低劑量給藥組，方法同上。

2.2.2 大鼠棉球肉芽腫試驗

大鼠皮下竇道向左右皮下放滅菌棉球，隨機分成空白組、地塞米松組和三素復方低、中、高劑量組。肉芽腫凈重=棉球肉芽腫重-原棉球重，兩個重量取均值，計算藥物對棉球肉芽腫的抑制率。

2.3 優選的三素單體復方對慢性咽炎的治療作用

2.3.1 慢性咽炎模型制備與分組

48只大耳白兔隨機取8只為正常組，其余用氨水+松節油復合因素方法制備慢性咽炎模型，隨機分為模型組、黃氏響聲丸組、三素單體復方高、中、低劑量組。

2.3.2 觀察指標

記錄家兔行為、攝食、體重變化及大小便等一般情況，觀察動物咽部情況；停藥后測定血常規；咽部粘膜及其下組織HE染色鏡檢。

2.4 統計學分析

數據以SPSS15.0統計行單因素方差分析，P<0.05認為有統計學差異。

3 結果

3.1 正交實驗結果

最佳配伍是木犀草素高劑量，黃芩素中劑量和槲皮素中劑量組合，既L3B2Q2，三者劑量比例為4：3：1。木犀草素40 mg、黃芩素30 mg、槲皮素10 mg 組合為給藥中劑量，中劑量×0.5為低劑量，中劑量×2為高劑量。以二甲苯致小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫干預實驗。

3.2 優選三素單體復方抗炎作用的驗證實驗

三素復方對小鼠耳腫脹有明顯抑制作用，隨著劑量的增加，其抑制率也有所升高。中、高劑量組與阿司匹林組相近（P<0.01）。三素復方對大鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，高劑量及地塞米松能明顯抑制肉芽腫生成（P<0.01），但各治療組間肉芽腫重量無差異。

3.3 優選的三素單體復方的療效

3.3.1 大耳白兔一般狀態

造模3天家兔出現搔抓口部，飲水頻而少，口腔分泌物增多，精神疲乏，納食和自發活動減少；咽部充血、暗紅色腫脹；注射松節油后加重，15天狀態最差。治療3天癥狀改善，l0天基本正常。各組家兔體重均呈增長態勢，治療組體重增長速度快于模型組，三素復方高劑量組最明顯。治療后家兔進食增加，三素中、高劑量和黃氏響聲丸作用更明顯。

3.3.2 三素復方對慢性咽炎兔血常規的影響

表1可見，模型組兔血液中白細胞、淋巴細胞和粒細胞數均明顯高于正常組，各藥物治療組血液中白細胞、淋巴細胞和粒細胞數均有不同程度的降低，其中三素復方中、高劑量和黃氏響聲丸組較明顯。紅細胞各組之間統計無差異。

3.3.3 給藥后各組兔咽部組織病理形態學觀察

模型組家兔咽部黏膜及粘膜下見大量彌漫性炎細胞浸潤，上皮增厚，釘突延長；粘膜下可見纖維組織增生及固有膜增寬，充血，伴有粘液腺增生。治療組家兔咽部組織病變不同程度減輕，以三素中、高劑量和黃氏響聲丸組病理逆轉效果好。

4 討論

慢性咽炎為咽部粘膜、粘膜下及淋巴組織的彌漫性炎癥，伴有黏膜下結締組織及淋巴組織增生、粘液腺肥大、分泌亢進。中藥復方是中醫臨床用藥的基本形式，也是制約中醫藥現代化、國際化的瓶頸。將來源于不同天然植物的有效成分組成復方即“單體有效成分復方”用于治療疾病，不僅提高技術含量，而且符合中醫藥特色，使中藥質量標準具可控性，達到中藥現代化和國際化的需要。本實驗選擇了中藥單體成分木犀草素、黃芩素、槲皮素（三素）為實驗藥物，從抗炎角度探討三素配伍組合對慢性咽炎的治療作用，結果表明：與對照組比較，三者組合均能抑制小鼠耳腫脹，以木犀草素高劑量，黃芩素中劑量和槲皮素中劑量組合抑制作用最明顯，小鼠耳腫脹度最輕。三者最佳配伍比例是木犀草素：黃芩素：槲皮素為4：3：1。將優選的三素復方進行抗炎藥效實驗，結果：三素復方對二甲苯致小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫有明顯抑制作用，中、高劑量與阿司匹林（地塞米松）一致。進一步用三素單體復方觀察對家兔慢性咽炎模型的治療效果顯示：模型組兔體重減輕、進食量減少、咽部黏膜紅腫及病理損傷明顯。三素復方能顯著改善上述癥狀，減輕病理損傷，中、高劑量和黃氏響聲丸無差別。證明三素單體復方對實驗動物急、慢性炎癥具有良好的抑制作用，能明顯改善氨水和松節油所致慢性咽炎模型動物的癥狀，減輕咽喉部黏膜損傷，療效在某些方面優于黃氏響聲丸，為進一步的研究奠定了基礎。

【參考文獻】

[1]王繼雙，等.木犀草素的藥理作用研究進展[J].生命科學，2013，25（6）：560-565.

[2]金丕煥.醫用數理統計方法[M].上海醫科大學出版社，1993：450.

[責任編輯：薛俊歌]