PDIA3在足月胎膜早破患者胎盤、胎膜組織中的表達及意義

張展，魏靜，張琳琳，常愛民，薛閃輝，王金銘(鄭州大學第三附屬醫院，鄭州450052)

PDIA3在足月胎膜早破患者胎盤、胎膜組織中的表達及意義

張展，魏靜，張琳琳，常愛民，薛閃輝，王金銘
(鄭州大學第三附屬醫院，鄭州450052)

摘要:目的觀察足月胎膜早破( tPROM)患者胎盤、胎膜組織中蛋白質二硫鍵異構酶A3( PDIA3)的表達變化，并探討其臨床意義。方法選擇tPROM患者30例(觀察組)、正常足月產婦30例(對照組)，分別采用免疫組化法和實時熒光定量PCR法檢測兩組胎膜、胎盤組織中的PDIA3蛋白和mRNA。結果觀察組胎盤、胎膜組織中PDIA3蛋白陽性表達率分別為93.33%、86.67%，對照組分別為60.00%、50.00%，P均＜0.05。觀察組胎盤、胎膜組織中PDIA3 mRNA相對表達量分別為2.025±0.180、1.440±0.053，對照組分別為0.958±0.418、1.024± 0.049，兩組比較，P均＜0.05。結論tPROM患者胎盤、胎膜組織中PDIA3呈高表達，其可能參與了tPROM的發生、發展。

關鍵詞:胎膜早破;蛋白質二硫鍵異構酶A3;胎膜組織;胎盤組織

胎膜早破( PROM)是指在臨產前胎膜自然破裂，發生于孕周≥37周者稱為足月PROM ( tPROM)，可導致早產率升高、圍生兒病死率增加、宮內感染率及產褥感染率均升高等［1］。目前，其發病機制尚未明確。蛋白質二硫鍵異構酶( PDI)是一種主要存在于哺乳動物和酵母內質網腔的多功能應激相關蛋白［2］，蛋白質二硫鍵異構酶A3( PDIA3)是該家族巰基蛋白氧化還原酶的重要組成部分。研究發現，未足月PROM患者胎盤組織中PDIA3蛋白表達上調［3］，但尚未見其在tPROM患者胎盤、胎膜組織中表達情況的報道。2014年5～12月，我們檢測了PDIA3在tPROM患者胎盤、胎膜組織中的表達水平，探討其在tPROM發生、發展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇鄭州大學第三附屬醫院收治的經剖宮產分娩的tPROM患者30例(觀察組)，年齡( 27.1±3.7)歲，孕( 38.6±1.9)周;初產婦18例，經產婦12例。排除臨產前行人工破膜、用藥物誘導而致破膜、發育異常或者骨盆畸形、病理妊娠及不明原因引起的發熱者。另選擇同期正常足月經剖宮產分娩的產婦30例(對照組)，年齡( 26.6±4.1)歲，孕( 38.9±1.4)周;初產婦16例，經產婦14例。兩組均為單活胎，剖宮產指征為骨盆狹窄、患者要求等。兩組均簽署知情同意書，一般資料具有可比性。

1.2樣本獲取和組織切片兩組均收集臍帶附著處母體面胎盤組織和胎膜破口處2 cm×2 cm大小的胎膜，4%甲醛溶液固定、4℃過夜，石蠟包埋后切片備用。

1.3胎盤、胎膜組織PDIA3蛋白檢測采用免疫組化法，操作均嚴格按照使用說明書進行;以兔抗人PDIA3抗體( 1∶100倍稀釋)為一抗，對切片進行染色，DAB顯色。結果判定: PDIA3蛋白主要表達在細胞質，呈黃色顆粒狀。無陽性細胞為0分，陽性細胞≤10%為1分，10%～50%為2分，50%～75% 為3分，＞75%為4分;棕褐色染色計3分，棕黃色計2分，淡黃色計1分，無染色計0分。兩項評分乘積≤3者陰性，＞3者為陽性。

1.4胎盤、胎膜組織PDIA3 mRNA檢測采用實時熒光定量PCR法。利用超純RNA提取試劑盒提取總RNA，利用逆轉錄試劑盒合成cDNA;參照Gen-Bank中人PDIA3基因序列，應用Primer Express 5.0軟件設計引物。PDIA3上游引物為5'-CAGCCAGCAACTTGAGGGA-3'，下游引物為5'-GTTAGTGAGATGTGAAGGACGAA-3'，擴增片段為119 bp;以GAPDH作為內參照。反應體系10 μL，反應條件: 95℃、10 min，95℃、30 s，60℃、1 h，35個循環。mRNA的相對表達量采用2－ΔΔCT進行計算。操作重復3次，取平均值。

1.4統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計量資料用珋x±s表示，兩組間比較用獨立樣本t檢驗及

χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組PDIA3蛋白表達比較觀察組胎盤、胎膜組織中PDIA3蛋白陽性表達率分別為93.33%、86.67%，對照組分別為60.00%、50.00%。兩組比較，P均＜0.05。

2.2兩組PDIA3 mRNA表達比較觀察組胎盤、組織中PDIA3 mRNA相對表達量分別為2.025± 0.180、1.440±0.053，對照組分別為0.958± 0.418、1.024±0.049。兩組比較，P均＜0.05。

3　討論

PDI家族是一類具有分子伴侶活性的在內質網中起作用的巰基—二硫鍵氧化還原酶，屬折疊酶［4］，可催化內質網中新生肽鏈的氧化折疊，并在內質網相關的蛋白質降解途徑、蛋白質轉運、鈣穩態、抗原呈遞、病毒入侵等方面起重要作用。PDIA3 是PDI家族重要成員，是一種多功能分子伴侶。研究發現，缺氧內皮細胞中PDIA3蛋白及mRNA水平均明顯升高，從而降低內皮細胞活力、促使內皮細胞適應缺氧環境。PDIA3與機體免疫密切相關，并且通過綁定特定的DNA片段參與應激反應［5］，PDIA3可直接進入主要組織相容性復合體Ⅰ類( MHC-Ⅰ)分子的肽結合槽中并與其結合，后與免疫原性多肽結合并呈遞至CD+8T細胞，活化T細胞，特異性殺傷感染細胞［6］。目前發現，PDIA3與血栓形成、胚胎發育、阿爾茨海默病、肥胖相關性弱精癥、子宮內膜癌、帕金森等有關［7～10］。

本研究發現，觀察組胎盤、胎膜組織中PDIA3表達水平明顯高于對照組。其作用機制可能為:①生殖道病原微生物上行感染或者血行感染通過胎膜、胎盤組織介導，引起母胎界面促炎細胞因子上升，激活基質金屬蛋白酶活性，使膠原纖維降解。PDIA3分子可通過作用于MHC-Ⅰ分子，參與抗原提呈過程，特異性地直接殺傷被感染的細胞。②創傷、羊膜腔壓力升高、宮頸內口松弛、胎兒先露部與骨盆入口銜接不好、胎膜發育不良等原因可導致tPROM發生，繼發性引起炎癥反應，最終導致熱休克反應發生，合成PDIA3等多種熱休克蛋白［11］。胎盤、胎膜組織缺血、缺氧或炎癥時，可導致分泌蛋白過量或未折疊和錯誤折疊蛋白的累積，誘導PDIA3的表達，維持細胞必需的蛋白質構象，保護其生命活動。③胎盤、胎膜組織中可見凋亡細胞，細胞過度凋亡可導致胎膜弱化、老化，最終導致tPROM。因此，PDIA3過表達可能參與tPROM的發生、發展，有望作為診斷PROM的一種生物標記物。

參考文獻:

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［11］Kim SW，Lee J，Lee B，et al.Proteomic analysis in pterygium; upregulated protein expression of ALDH3A1，PDIA3，and PRDX2 ［J］.Mol Vis，2014( 20) : 1192-1202.

收稿日期:( 2015-05-03)

基金項目:河南省鄭州市科技計劃項目( 131PCXTD624)。

文章編號:1002-266X( 2015)30-0053-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R714.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.30.022