急性淋巴細胞白血病患兒骨髓組織中miR-155表達變化及意義

劉卓瓊，陳麗麗，楊斯博(哈爾濱醫科大學附屬第一醫院，哈爾濱150001)

急性淋巴細胞白血病患兒骨髓組織中miR-155表達變化及意義

劉卓瓊，陳麗麗，楊斯博
(哈爾濱醫科大學附屬第一醫院，哈爾濱150001)

摘要:目的觀察急性淋巴細胞白血病( ALL)患兒骨髓組織中miR-155表達變化，并探討其臨床意義。方法選擇ALL患兒46例(觀察組)，非血液病兒童17例(對照組)，采用qRT-PCR檢測各組miR-155，并分析miR-155表達與ALL臨床病理參數的關系。結果觀察組及對照組miR-155相對表達量分別為( 26.8±10.1)×10－4、( 4.3 ±1.2)×10－4，兩組比較，P＜0.05。觀察組低危型、中危型、高危型者miR-155相對表達量分別為( 3.30±1.15)× 10－4、( 5.28±1.75)×10－4、( 7.30±2.15)×10－4，兩兩比較，P均＜0.05;治療前及治療第33天miR-155相對表達量分別為( 9.30±4.15)×10－4、( 3.30±0.15)×10－4，兩者比較，P＜0.05。結論ALL患兒骨髓組織miR-155表達升高，miR-155高表達與兒童ALL的發生發展以及預后密切相關。

關鍵詞:血液疾病;急性淋巴細胞白血病;微小核糖核酸155

急性淋巴細胞白血病( ALL)是兒童最常見的一種惡性腫瘤，是指一類以淋巴母細胞失調增生和分化異常或分化受阻，形成大量非成熟白細胞為特征的快速進展型白血病，約占急性白血病的70%［1］。隨著近幾十年來對白血病治療的深入研究，兒童ALL的生存率有了一定程度的提高，ALL的治愈率已達80%，但仍有約25%的患兒在血液、生殖、神經等系統再次發生病變［2］。近年來更多研究表明，非編碼的miRNA在白血病的發生、發展、臨床表現和預后中均有影響。因此本研究觀察了ALL患兒骨髓組織中miR-155表達變化，并探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇哈爾濱醫科大學附屬第一醫院收治的ALL患兒46例(觀察組)，男24例，女22 例;年齡5.2～14.8歲，中位年齡9.1歲;＜10歲20例，≥10歲26例。診斷均符合全國小兒白血病會議制定的ALL標準診斷［3］。病理分型為B淋巴細胞性38例，T淋巴細胞性8例;危險度分型［4，5］中低危型20例，中危型16例，高危型10例。另選17例非血液病兒童作為對照組，男9例，女8例;年齡2.8 ～10.3歲，中位年齡8歲。兩組一般資料具有可比性。本研究得到哈爾濱醫科大學附屬醫院醫學倫理委員會的批準，且所有入組兒童家長均簽署知情同意書。

1.2 miR-155檢測ALL患兒于治療前、治療第33天采集骨髓各3 mL，對照組患兒于入院時采集骨髓3 mL，加入EDTA抗凝保存備用。TRIzol法提取總RNA，Nanodrop1000檢測總RNA的濃度和純度，將已制備的總RNA置于－80℃保存備用。取RNA 0.05 g，使用TaqMan MicroRNA逆轉錄試劑盒進行逆轉錄。每20 μL反應體系包括TaqMan MicroRNA Assay( 20×) 1.00 μL、Product from RT reaction 1.33 μL、

TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL、Nuclease-free water 7.67 μL。將反應管編號，每個反應管中加入10.0 μL TaqMan 2×Universal PCR Master Mix和7.67 μL Nuclease-free water混勻;每個反應管中加入相應TaqMan MicroRNA Assay 1 μL;每個反應管中加入相應RT reaction product;將反應管密封，放入PCR反應儀，設置反應條件為95℃、10 min，95℃、15 s，60℃、60 s，共50個循環;每次檢測均設立空白陰性對照、陽性對照，每個標本采用3個復孔。反應完成后，電腦自動得出熔解曲線。以GAPDH為內參，所測定的miR-155的相對表達量以2－ΔΔCt表示。1.3統計學方法采用SPSS18.0統計軟件。計量資料以珋x±s表示，多組間比較采用Kruskal Wallis H秩和檢驗，兩組間比較采用Wilcoxan秩和檢驗。P ＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

觀察組及對照組miR-155相對表達量分別為( 26.8±10.1)×10－4、( 4.3±1.2)×10－4，兩組比較，P ＜0.05。觀察組年齡≥10、＜10歲者miR-155相對表達量分別為( 3.2±0.5)×10－4、( 3.3±0.2)×10－4，男性、女性分別為( 3.8±0.5)×10－4、( 4.2±0.4)×10－4，B淋巴細胞性、T淋巴細胞性者分別為( 1.78±0.17)× 10－4、( 2.30±1.15)×10－4，兩者比較，P均＞0.05。觀察組低危型、中危型、高危型者miR-155相對表達量分別為( 3.30±1.15)×10－4、( 5.28±1.75)×10－4、( 7.30 ±2.15)×10－4，兩兩比較，P均＜0.05;治療前及治療第33天miR-155相對表達量分別為( 9.30±4.15)× 10－4、( 3.30±0.15)×10－4，兩者比較，P＜0.05。

3　討論

miRNA是一類進化上保守、在生命中起重要調控作用的分子［6］。miRNA是一類由內源基因編碼的長度為19～25個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，可以通過調節一些信號分子來調控細胞死亡、增殖、分化、發育等。miRNA可以調節造血功能來影響白血病患者的白細胞數量、染色體形態等［7，8］，促進或抑制病情發展，判斷治療效果［9］。有文獻［10］表明，白血病患者miR-128、miR-146a、miR-155、miR-181a和miR-195表達異常，但6個月治療后表達均有顯著改變。然而，在兒童ALL中有關miR-155的研究不多。

miRNA可直接調控細胞的增殖分化或者凋亡，影響著腫瘤的發生、發展與轉歸［11］。越來越多的研究表明，miR-155在許多腫瘤中過表達，在致癌過程中起重要作用。在甲狀腺癌、乳腺癌、結腸癌、宮頸癌、胰腺癌、肺癌等實體瘤中，miR-155高表達預示預后不良。Nikiforava等［12］發現乳頭狀型、濾泡狀癌型、末分化癌型甲狀腺癌miR-155表達分別上調9.5、5.5和13.2倍。Habbe等［13］發現非侵襲性胰腺癌癌前病變-胰管內乳頭狀黏液性腫瘤組織中miRNA-155高表達。本研究顯示，觀察組miR-155相對表達量高于對照組，且隨著危險程度的升高而增加，隨著治療時間的延長而降低，表明miR-155與兒童ALL危險度和預后密切相關。

可見，miRNA不僅可作為ALL等疾病的診斷工具，同時也可作為治療疾病的靶點［14］。

參考文獻:

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［14］Mian YA，Zeleznik-Le NJ.MicroRNAs in leckemias : emerging diagnostic tools and therapeutic targets［J］.Curr Drug Targets，2010，11( 7) : 801-811.

收稿日期:( 2015-04-20)

文章編號:1002-266X( 2015) 31-0056-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R720.5

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.31.022