張浩吉/廣東省佛山科學技術學院
豬瘟(Hog Cholera,HC或Classical Swine Fever,CSF)是 由 黃病毒科、瘟病毒屬成員之一的豬瘟病 毒 (Hog Cholera Virus,HCV 或 Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起豬的一種高度接觸傳染性病毒病,是嚴重危害國內外養豬業的最主要的烈性傳染病之一。國際獸疫局(OIE)將CSF列為A類16種法定傳染病之一,在我國也被列為一類傳染病。近些年來,我國的豬瘟流行特點發生了較大的變化,在典型豬瘟的大流行得到較好控制之后,慢性豬瘟、溫和型、繁殖障礙型和亞臨床型豬瘟在許多地區的規?;i場時有發生,其癥狀也容易與其他豬病混淆。尤其是由母豬持續性感染造成的繁殖障礙以及仔豬先天感染導致的免疫耐受現象越來越普遍,這些持續帶毒豬成為了豬場主要的傳染源,為豬瘟和其它疾病的防控帶來了巨大的挑戰。本文介紹了當前我國豬瘟流行的新特點,并從理論和實踐方面總結了我國現階段豬瘟防控與凈化的技術要點。
豬瘟歷史悠久,1833年首先出現于美國的俄亥俄州,1903年證明病原體是病毒。該病廣泛分布于亞洲、歐洲、南美洲的大部分養豬國家。世界動物衛生組織(OIE)在2000年至2012年發布的豬瘟(CSF)在全球的流行報告顯示,CSF主要在中南美洲、亞洲和歐洲三大區域流行,全球CSF的流行情況較穩定。但從2005年開始有報道在非洲南部CSF也多次發生。
豬瘟在我國何時開始流行沒有明確記載,據1935年的豬瘟流行病學調查報告,當時我國絕大部分省區都有豬瘟發生,造成的經濟損失十分嚴重。解放初期豬瘟仍然廣泛流行于我國農村。我國于1954年由中國獸藥監察所研制出的豬瘟兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)疫苗被公認為是安全有效的活疫苗,具備免疫原性強、遺傳性穩定、無殘余毒力、對懷孕豬和乳豬安全等特點,為成功控制我國豬瘟大規模流行以及為世界許多國家和地區豬瘟的根除做出了巨大的貢獻。
根據我國農業部《獸醫公報》中發布豬瘟疫情數據,匯總2001年1月到2010年12月10年間我國31個省、自治區和直轄市(不包括香港、澳門和臺灣)豬瘟月新發生次數,統計發現在此期間豬瘟共發生6 052次、163年次和1 181月次。根據豬瘟發病月次和發病次數地理分布,可將我國豬瘟分為3個主要地區:豬瘟無疫區、豬瘟疫情穩定區和豬瘟重災區。其中以北方幾個省份為豬瘟無疫區,共有5個省;中東部和西部為豬瘟疫情穩定區,這個地區豬瘟發生較少,且在2009-2010年期間幾乎無豬瘟發生;以南部沿海省份為豬瘟重災區,其中以福建、廣東、廣西和貴州最為嚴重。目前我國的生豬飼養量占全球比例接近70%,豬肉消費占國內肉類消費60%,是生豬生產、飼養與消費大國,豬瘟等動物疫病一直是阻礙我國養豬業健康發展的重要因素,每年造成直接經濟損失達百億元。
CSFV是一種RNA病毒,屬黃病毒科、癍病毒屬。病毒粒子呈球形,有囊膜。CSFV目前一個血清型,但不同病毒株之間存在著抗原性的差異。強毒株引起急性、致死性感染;中等毒力株引起亞急性或慢性感染,以死亡或康復告終;低毒株引起溫和型和無癥狀持續性感染,以繁殖障礙,胚胎和仔豬受害為特征。CSFV可在豬的腎、淋巴結、白細胞、骨髓、睪丸細胞內培養生長,不引起細胞病變。病毒對干燥及腐敗較為敏感,但對熱的抵抗力較強,78℃ l h才可致死,低溫也能長期保持病毒活力,如在冰凍豬肉內能生存幾星期至幾個月。CSFV對2% NaOH、氯制劑和復合醛等消毒藥敏感。
病豬和帶毒豬是主要的傳染源,病豬或帶毒豬通過口、鼻、淚腺分泌物、尿液、糞便排毒。慢性感染豬不斷排毒或間歇排毒,易感豬與病豬的直接接觸是本病傳播的主要方式。研究證實,CSFV低毒力毒株感染妊娠母豬時,可使母豬持續帶毒500 d以上,這些持續帶毒豬的存在,形成了豬瘟常發地區和豬瘟常發豬場,成為豬群中CSFV垂直傳播和水平傳播的根源。持續帶毒母豬所產仔豬CSFV的帶毒陽性率達50%~100%,多為死胎或產弱仔。帶毒種公豬通過精液可將病毒傳播給母豬造成胎兒感染。經胎盤感染CSFV的仔豬,可導致先天性免疫耐受,即使通過吃初乳和豬瘟疫苗接種也不能使帶毒仔豬產生免疫保護力。
國際上將CSFV分為3個基因群(I群、II群和III群),10個基因亞 群(1.1、1.2、1.3、2.1、2.2、2.3、3.1、3.2、3.3和 3.4)。近年來,國內對CSFV分子流行病學研究結果表明,我國流行的CSFV基因型也在發生重大變化,中國獸醫藥品監察所等單位經對1979-2008年間我國近60個地區豬場獲得的400多份CSFV樣品的基因序列測定比較發現,目前我國流行的CSFV基因型主要為基因II群,占74.66%,基因I群只占25.34%。王琴等采用CSFV強弱毒鑒別MAb通過ELISA方法對我國流行的29株分離株進行抗原反應性研究,結果顯示針對弱毒株的Mab除3株為陽性外,其余均為陰性;而這些分離株可以被強毒MAb分為強反應和弱反應兩組,顯示我國豬瘟病毒的流行毒株的抗原性有一定差異。而我國的豬瘟兔化弱毒疫苗株為基因I群,值得慶幸的是我國培養的豬瘟兔化弱毒疫苗對目前我國流行的所有基因型豬瘟野毒均能提供良好的免疫保護。
我國自2007年實行CSF強制免疫政策后,CSF在我國的大規模暴發流行得到控制,這與我國CSF免疫的范圍廣、密度高、強度大密切相關,大規模免疫接種使豬群均有一定程度的免疫保護率,但是在缺乏有效運輸與市場檢疫情況下仔豬的頻繁交易和流動也導致了CSF的流行范圍更廣。雖然流行的范圍廣,但流行規模較小、疫區顯著減少、影響程度較輕、季節性不明顯,但這種散發流行見于全國各地。
據調查發現,目前我國79%的CSF發病豬群多在90日齡以下,特別是2~10日齡的哺乳仔豬和斷奶至60日齡的保育豬發病最多見,而成年豬(育肥豬和種豬)發病較少,癥狀不明顯,但CSFV持續感染嚴重。豬發生持續性感染后,CSFV可在豬體內存活數月甚至終生,可持續向外排毒,但不表現臨床癥狀,是引起CSF流行最不易被發現和最危險的傳染源。
亞臨床型無癥狀的持續感染現象多發生于仔豬,母豬感染也可表現亞臨床型,但在母豬會進一步發展為繁殖障礙型。剖檢亞臨床型病者,一般無明顯的病變,常見的是胸腺萎縮和淋巴結腫大。
近年來,CSF在流行過程中毒力發生變化,低毒力的CSFV進入豬體內,導致了非典型性的溫和型豬瘟的出現,發病豬癥狀顯著減輕,發病率、病死率比CSF低,且多呈散發或局部地區的少數養豬場發生,流行速度緩慢。
這種非典型的溫和型在大、小豬均可發病,但以乳豬為多。本病特點是病勢緩慢,病性溫和,病變局限,病程延長。病豬表現鼻干、口渴、減食、尿黃、消瘦、體溫升高。病豬長期便秘,糞如干球狀,常混有血液、粘液或白色脫落的假膜,個別病例于后期出現下痢。部份病豬于四肢下部及腹下呈現淤血紫斑。中、大豬多能自愈,病死率低;但幼齡乳豬有較高的病死率,約30%~50%。
非典型的溫和型豬瘟的病變是扁桃體有壞死或潰瘍。胃底區常有片狀充血、出血。回盲瓣附近可見潰瘍雛形,病久者演變為鈕扣狀潰瘍。膽囊腫脹,膽汁濃稠,粘膜充血、出血或潰瘍。脾臟常見邊緣出血性梗塞。部份病例的腎臟、膀胱也呈現出血點。小豬常見肋骨與肋軟骨連接處出現黃色輕度鈣化線。
帶毒母豬綜合征是指妊娠母豬感染低毒力或中等毒力的CSFV后引起的潛伏性感染,帶毒母豬無明顯的臨床癥狀,但CSFV能通過胎盤屏障垂直傳播給胎兒,導致出現流產、早產、死胎或木乃伊胎,母豬不發情或不孕等。垂直傳播率高達45%~100%,產下的仔豬貌似健康,實際上仔豬將長期帶毒。帶毒仔豬無論是吃初乳還是進行疫苗免疫,體內的CSFV均無法消除,且仔豬易發病死亡或免疫失敗。仔豬體內的病毒長期存在并不斷向外界排毒,造成水平傳播。
垂直傳播和水平傳播在規?;i場反復交替進行,可致CSFV在豬場內惡性循環,即無臨床癥狀的持續感染帶毒母豬一胎盤垂直感染一母豬繁殖障礙一仔豬帶毒—無臨床癥狀的持續感染帶毒后備母豬一無臨床癥狀的持續感染帶毒母豬,這種帶毒現象是導致我國CSF長期持續存在和散發流行的主要原因。
臨床上,豬瘟與其它病毒病、細菌病等混合感染的現象較為普遍。如豬瘟與豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環病毒(PCV-2)、豬流感病毒(SIV)等病毒性疾病的混合感染;尤其近幾年飼料霉變的影響,誘導豬瘟免疫抑制,導致豬瘟散發;豬瘟與鏈球菌、沙門氏菌病、豬肺疫等細菌性疾病混合感染;因此混合感染是導致豬群發病嚴重和死亡率升高的主要原因,在控制豬瘟時要注意對并發病的預防和控制。
目前,雖然我國已經實施了CSF疫苗強制免疫政策,大部分地區的豬場均進行了豬瘟計劃免疫,但仍然有一些地區或有些人對豬瘟的防控不夠重視,對豬瘟的危害性認識不夠,認為沒有大規模流行就萬事大吉了,思想松懈,防疫措施執行不到位,飼養管理理念跟不上,導致豬瘟在某些地區或某些豬場時有發生。
目前市場上的豬瘟疫苗種類多,疫苗質量參差不齊、注射劑量不足或運輸保存不當都可以影響豬瘟的免疫效果。不同的疫苗生產工藝不同,生產出的疫苗質量也有很大不同。根據疫苗病毒含量,決定免疫劑量,一般普通細胞苗都需要加倍到4~6倍免疫,成兔脾淋苗需要2頭份,豬瘟活疫苗(傳代細胞源)使用1頭份。
疫苗運輸和保存對疫苗品質影響很大,豬瘟弱毒疫苗需要在-15℃條件下保存、運輸,并嚴禁反復凍融。豬瘟疫苗-15℃條件下保存有效期為1年;0℃~8℃冷暗干燥處保存有效期為6個月;8℃~25℃條件下保存有效期為10 d。保存使用過程中條件不合格都會影響疫苗效果。
疫苗免疫比較混亂,沒有科學合理地制定免疫程序,導致豬瘟免疫效果不好。在生產實踐中,豬瘟的免疫必須依據豬體的抗體變化規律實施免疫,母源抗體水平的高低和豬體持續帶毒情況都會干擾疫苗的免疫效果。但實際上很多養豬企業并沒有認真的考慮這些因素,盲目制定免疫程序。
在國內很多豬場的種豬群中,母豬帶毒但不表現癥狀是一種相當普遍的現象。有些豬群的帶毒比例很高,甚至達到了30%。這些帶毒母豬外表正常,但是豬瘟病毒可以通過胎盤感染仔豬,導致帶毒母豬生下的仔豬帶毒率高達100%。因此,帶毒母豬生下的仔豬由于在胎盤內接觸豬瘟野毒,從而對豬瘟病毒產生先天性免疫耐受。此類仔豬免疫疫苗后不能產生有效的豬瘟抗體,甚至會因為免疫豬瘟造成應激而發生其他疾病。國外試驗也證實,先使豬感染野毒,在1、2和4 d后再免疫C株疫苗,不能起到任何的保護作用。因此,要想控制好豬瘟必須先從種豬著手,要密切監測種豬群的帶毒情況。
豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環病毒(PCV-2)等病毒的感染或霉菌毒素中毒,都可以抑制了機體的免疫應答能力,造成豬瘟免疫水平低下。PRRSV所引起的最顯著病理變化是嚴重損傷肺泡巨噬細胞,造成其大量破壞,并伴有循環淋巴細胞及黏膜纖毛清除系統的破壞,可以抑制機體的免疫應答能力,造成對豬瘟疫苗的免疫應答能力下降。S.Suradhat等試驗證實感染PRRSV后免疫豬瘟疫苗,不能抵抗豬瘟強毒的攻擊,而未感染PRRSV的對照豬則可以抵抗。當發生多病原的同時感染,機體抵抗力和免疫應答能力勢必降低,在一定程度上影響豬瘟的免疫效果。
近些年來,豬瘟在亞洲、歐洲、南美洲等地區呈現復發的趨勢,一些宣布已消滅豬瘟的國家(如法國、荷蘭、德國、比利時等)又見豬瘟復發的報道。并且豬瘟的流行趨勢發生了很大變化,一些地區典型豬瘟和非典型豬瘟共存,隱性感染和持續感染并現,且免疫失敗的現象時有發生,這種新的流行形式給全世界養豬業帶來了新的威脅。在我國不同地區的養殖水平和養殖模式不同,尤其在中小型養殖場和散養戶,豬瘟的防控與凈化面臨巨大的挑戰。
豬瘟凈化方案的成功實施和凈化結果的維持是建立在:(1)敏感、特異的豬瘟檢測方法;(2)穩定、高效的豬瘟疫苗和合理的免疫程序;(3)切實可行且長期堅持的衛生防疫制度和規范的飼養管理體系。
豬瘟的實驗室診斷方法可以分為抗體檢測和抗原檢測兩大類。
抗體檢測是疫苗免疫效果評價的主要方法,酶聯免疫吸附試驗(簡稱ELISA)以其操作簡便、敏感、檢測樣本量大等優點成為最主要手抗體檢測方法。目前使用的抗體間接ELISA方法和抗體阻斷ELISA檢測方法,適用于田間大規模免疫抗體水平普查,商品豬場免疫效果評價和不同免疫水平豬群的分群。其它的抗體檢測方法包括間接血凝試驗、瓊脂擴散試驗、免疫膠體金快速檢測試驗等。
抗原檢測方法主要有免疫熒光試驗(FA)和反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)。免疫熒光試驗是最常用的豬瘟抗原檢測方法,用脾、腎、淋巴結、扁桃體制備冰凍切片或抹片,經熒光抗體染色后檢測抗原,該方法的首選病料是扁桃體,因為扁桃體是豬瘟病毒最早的增殖部位。RT-PCR檢測方法目前也已經廣泛用于豬瘟病毒的實驗室檢測,包括常規RT-PCR、套式RT-PCR、熒光定量RT-PCR(Real-timeRTPCR)。中國獸醫藥品監察所和軍事獸醫研究所研制的通用熒光RT-PCR試劑盒,為非典型、溫和型及持續感染CSFV的檢測提供一個快速、敏感、準確的方法,是適用于種豬凈化的可靠手段。另據報道,套式RT-PCR(巢式PCR),其敏感性比普通RT-PCR高出100倍,而且特異性很高,應用前景廣闊。
1.豬瘟疫苗。
現有國內市場上主要有三種豬瘟弱毒疫苗,即豬瘟牛睪丸原代細胞疫苗(原代細胞苗)、豬瘟兔脾淋組織疫苗(脾淋組織苗)和豬瘟豬睪丸傳代細胞苗(傳代細胞苗)。三類疫苗使用的豬瘟疫苗種毒均為豬瘟兔化弱毒疫苗C株,該疫苗免疫接種豬可完全有效地抵抗各種我國流行的不同基因亞群豬瘟野毒株的攻擊。三類疫苗區別主要在種毒的培養繁殖系統上,成兔脾淋苗使用成年新西蘭大耳白兔增殖豬瘟疫苗種毒;牛睪丸細胞苗使用犢牛睪丸細胞增殖;而豬瘟傳代細胞苗使用豬源睪丸傳代細胞系增殖。
豬瘟疫苗質量不高的主要原因是生產工藝不過關和疫苗生產的原材料質量存在問題,導致豬瘟細胞疫苗病毒滴度不高和BVDV(牛病毒性腹瀉病毒)污染。和歐洲等發達國家豬瘟疫苗質量標準相比,我國豬瘟疫苗原有質量標準只有歐盟標準的約1/4。因此,疫苗品質是有效預防控制豬瘟的關鍵,要選擇正規生產廠家,相對穩定的產品。
2.免疫程序。
免疫程序的制定與豬群的帶毒情況、疫苗種類和飼養管理模式有關。種豬群作為免疫重點,通過監測種豬體內抗體的變化,當抗體保護率水平在70%以下時,種豬群進行免疫;仔豬通過初乳獲得了母源抗體,母源抗體在早期對初生仔豬有保護作用,通過仔豬體內母源抗體的監測確定首免日齡,按照同樣的原則制定二免、三免時間。參考的免疫程序:豬瘟陰性場:公母豬按一年三次普免豬瘟疫苗2頭份/頭;仔豬在21日齡接種豬瘟疫苗1頭份/頭,隨后在60、100日齡分別接種豬瘟疫苗1.5頭份/頭。豬瘟陽性場:公母豬按一年三次普免豬瘟疫苗2頭份/頭;新生仔豬零時免疫豬瘟苗1頭份/頭,隨后在60、100日齡分別接種豬瘟疫苗1.5頭份/頭。
1.凈化方法。
(1)檢測淘汰法:即反復多次對全場種豬群逐頭進行檢測,淘汰陽性豬只,再引進陰性后備種豬擴群,是目前豬場最常用的凈化方法。該方法對檢測手段要求高,必須對健康狀態下低帶毒量豬敏感性高。
(2)后代隔離法:仔豬提早斷奶,然后將仔豬轉移到“無特定病原的清潔區”內,進行人工飼養。該方法可阻止多種傳染因子的傳播,有利于多種疾病的凈化,但對飼養管理要求高。目前,也有豬場在新場建設時采用該方法建立健康繁殖群體,并取得了較好的效果。
2.具體凈化方案。
(1)種豬場凈化標準:以種豬場為單位,連續2年無臨床病例,免疫抗體合格率多85%;病原學監測結果連續1年以上無陽性。
(2)種豬場凈化技術路線:按照“檢測→淘汰/分群→免疫→檢測→淘汰→凈化”的程序,采取對野毒感染豬群進行撲殺或淘汰,對假定陰性豬群實施高密度免疫,同時加強消毒和提高綜合飼養管理水平實施豬瘟凈化。
(3)凈化檢測方法:病原檢測可用免疫熒光試驗或RT-PCR,該方法適用于扁桃體和血清樣品的檢測??贵w檢測可用ELISA,如用IDEXX的ELISA試劑盒檢測豬瘟抗體,阻斷率低于50%的種豬用豬瘟疫苗補充免疫一次,在免疫后6~8周再次采樣進行檢測,所有抗體水平達到阻斷率50%以上的種豬保留,抗體水平在補免后仍未達到理想抗體標準則淘汰。
(4)凈化步驟:建議在種豬群豬瘟病毒感染率<10%的條件下實施凈化。
①首次檢測:對核心群、后備群所有種豬進行病原和抗體檢測。后備群轉為生產群前再次進行病原和抗體檢測,病原學檢測陰性且免疫抗體合格者留作種用。
②撲殺/隔離、免疫:病原檢測陽性豬進行撲殺和無害化處理。對病原檢測陰性、群體免疫抗體合格率多85%的豬群,個體免疫抗體合格的豬留作種用,隔離個體免疫不合格的豬并進行加強免疫。對病原檢測陰性、群體免疫抗體合格率<85%的豬群,全群加強免疫一次。
③二次檢測:間隔3個月再次對核心群、后備種豬群以及免疫后的隔離種豬群進行病原和免疫抗體檢測。病原學檢測陰性且免疫抗體合格的豬可留作種用。
④撲殺/淘汰:二次檢測病原學陽性豬進行撲殺和無害化處理;對病原學檢測陰性但連續2次免疫抗體不合格的豬進行淘汰。
⑤再次檢測:對連續2次病原學檢測結果均為陰性的豬,每6個月進行一次抽檢,每次每群抽檢數量30~60頭;不足30頭者全部檢測。凡出現病原學陽性個體者對全群進行普檢,并撲殺陽性豬;凡病原檢測陰性的豬群,免疫抗體合格的豬繼續留作種用,免疫抗體不合格的豬參照②“撲殺/隔離、免疫”的相關要求進行處置。
⑥結果判定:連續2次病原檢測結果均為陰性且免疫抗體合格率多85%,該豬群為凈化豬群;否則按照凈化步驟循環進行。每次樣品的采集、檢測、陽性豬的處理均應在10天內完成。
(5)凈化效果的維持:
①管理嚴格執行衛生防疫制度,全面做好清潔和消毒;實行人員進出控制隔離制度;規范飼養管理行為。
②免疫種豬場堅持免疫接種,嚴格遵循《國家動物疫病強制免疫計劃》的要求對豬群實施免疫。免疫抗體合格率達到國家規定的要求。
③持續監測凈化種豬群建立后,每6個月進行一次病原和免疫效果監測,每次每群抽檢30~60頭,不足30頭者全部檢測,以持續維持凈化豬群的健康狀態。
總之,CSF困擾我國養豬業已經半個多世紀,在我國目前豬病流行狀態下,在規?;i場和部分區域開展CSF的凈化是完全可行的。要在全國范圍內逐步真正實現防制CSF的目的,除了技術手段不斷提高外,還需要有強有力的國家政策、法規的支持,制訂完整系統的CSF防制工作計劃。