植物源性轉基因食品DNA提取技術的研究進展

張 娟,吳煒亮,譚嘉力,梁宇斌,李曉明

(廣東產品質量監督檢驗研究院國家食品質量監督檢驗中心,廣東佛山 528300)

植物源性轉基因食品DNA提取技術的研究進展

張 娟,吳煒亮,譚嘉力,梁宇斌,李曉明

(廣東產品質量監督檢驗研究院國家食品質量監督檢驗中心,廣東佛山 528300)

如何從食品中提取到高質量和高純度的植物基因組DNA是后續轉基因檢測成功與否的關鍵因素。通過對近年來國內外有關食品中植物基因組主要提取方法:CTAB法、SDS法、磁珠法、試劑盒法等進行介紹,分析各方法的優缺點,并展望其未來發展方向,以期為后續食品中植物基因組有效提取方法的建立提供借鑒。

食品,植物基因組,DNA提取

近年來,隨著轉基因食品品種的與日俱增,其安全性問題在世界范圍內引起廣泛關注。對此,各國都普遍要求對轉基因食品進行標識,從而保護消費者的知情權和選擇權。目前,植物源性轉基因食品的檢測技術主要是基于基因水平的,這就對前期的核酸提取技術和質量提出很高要求。由于轉基因食品的組成成分比較多樣,加工過程復雜,因此對DNA提取造成潛在的困難?；诖?國內外研究人員積極探索各種適合于轉基因食品DNA的高效提取方法,本文就有關這方面的研究進展進行綜述。

1 植物源性轉基因食品DNA提取技術的研究背景

對植物源性食品進行轉基因成分的檢測,不論是最基礎的PCR檢測,還是后續更為復雜的分子生物學操作,前提條件就是從食品中獲得能夠滿足分子生物學操作要求的高質量基因組DNA。雖然該技術在植物學研究領域屬于成熟穩定的常規技術,但在食品特別是復雜食品領域并不完全適用。究其原因,主要來自兩個方面:各種物理、化學及生物學加工處理方式對食品中的DNA造成不同程度的破壞和降解;食品生產加工過程中添加或自然產生的各種物質對DNA的提取造成不同程度的干擾。所以,長期以來食品中DNA提取技術成為制約基因檢測技術在食品安全檢測中進一步發展的重要因素?；诖?無論是從傳統方法的改進還是新方法的開發方面都出現了許多新動向[1-4]。

2 植物源性轉基因食品DNA提取技術

2.1 傳統提取方法的改進

2.1.1 CTAB法 CTAB(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨)是一種陽離子去污劑,能與核酸形成復合物。在低鹽溶液(0.1～0.5mol/L NaCl)中,該復合物會因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白質及多糖仍存在于溶液中,通過離心可將復合物與蛋白質及多糖等小分子物質分離;在高鹽溶液(>0.7mol/L NaCl)中,該復合物可溶解并穩定存在,再用異丙醇/無水乙醇沉淀核酸,從而獲得核酸提取物[5-6]。

CTAB法是經典的植物DNA提取方法,也是目前研究最多的用于提取轉基因食品DNA的方法。國內外學者依據不同的食品類型,對CTAB法的各個環節進行針對性地優化,以達到提取高質量DNA的目的。周紅霞等[7]為了提高食用油中DNA的沉淀效果加入核酸共沉淀劑和NaAc,經優化的CTAB法有效地提取到可用于PCR擴增反應的DNA模板。相比上述的方法優化,Sonia等[8]則從在裂解液中添加不同成分、裂解液組成成分濃度、裂解時間及沉淀時間等四個方面對CTAB法進行細致地優化,最終形成一種適合大多數植物油中DNA提取的方法。該方法相比其他傳統方法耗時短、用油量少,且比商品化試劑盒價格更加優惠。Tung等[9]通過比較傳統CTAB法和稍加改進的CTAB法(在裂解液中加入1%的巰基乙醇)提取未經加工的大豆和玉米中DNA的效果發現,傳統CTAB法提取效果更好,DNA濃度分別達32.7ng/mg和28.4ng/mg,A260/A280吸光值比值均為1.9。?zge等[10]在運用PCR法檢測轉基因玉米和大豆的過程中,以CTAB法提取深加工產品中的DNA取得良好效果,后續PCR反應能擴增出對應目的條帶。孫敏等[11]在使用CTAB法提取粉絲中DNA的過程中,加入豬肉DNA作為擔體,實現微量核酸的共沉淀,該方法簡單、實用,大大提高了核酸的提取效率,為轉基因成分的檢出奠定了良好的基礎。此外,在裂解液中加入PVP(Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮)也是CTAB法常用的改良方式。莊逸林等[12]通過在CTAB法提取過程中加入β-巰基乙醇和PVP來去除多糖和多酚類物質,實驗證明該方法可用于新鮮番木瓜、番木瓜干和番木瓜果汁等經過簡單加工產品的DNA提取。姚偉等[13]通過增加酚類物質的結合劑PVP和起抗氧化作用的亞硫酸鈉,有效防止了多酚類物質的氧化。同時,PVP還可作為澄清劑吸附甘蔗葉中的多糖,使之沉淀去除。閆苗苗等[14]為解決植物易褐化的問題加入適量PVP以結合多酚類化合物。陳笑蕓等[15]對轉基因大豆深加工食品進行適當前處理后,利用改良CTAB法提取DNA,能顯著提高大豆深加工食品中DNA的提取效率和質量。高媛等[16]為探求適宜轉基因蘋果種子DNA的提取方法,采用改良CTAB法、SDS法與高鹽低pH SDS法對蘋果種子進行提取方法比較。結果表明,改良CTAB法相比其他2種方法獲得的DNA產量最高,可達0.221mg/g,更適于轉基因蘋果種子DNA提取。吳申懋等[17]以食品中常見的添加劑液體麥精和玉米糖漿為研究材料,采用改良CTAB法、SDS法和試劑盒法提取DNA。實驗證明,改良CTAB法可得到較好質量的DNA,PCR擴增產物條帶單一,可用以區分這兩種添加劑。張秀杰等[18]預先用PBS緩沖液除去大部分的可溶性多糖,再通過提高CTAB緩沖液中NaCl濃度以去除殘余多糖,成功從蜂蜜中提取到片段完整、純度較高的DNA。而Sónia等[19]則為了追溯蜂蜜的植物源性,比較了5種不同的DNA提取方法,實驗證明,在不考慮DNA產率的情況下,改良CTAB法和DNeasy Plant Mini試劑盒提取的DNA能獲得比較理想的PCR擴增效果。同樣地,Patrick等[20]以CTAB法為基礎,通過改變幾種加入成分和提取參數,建立一種從蜂蜜中自動提取DNA的方法。相比手動CTAB法,該方法獲得更高產量的DNA,且不存在PCR抑制物。此前,該團隊曾基于上述方法建立了從植物種子中自動提取DNA的方法,用于檢測監督轉基因植物[21]。

CTAB法雖然可以用于轉基因食品中DNA的提取,但為了提高提取效率,往往需要針對樣品實際情況進行反復的方法改良。此外,該法存在操作繁瑣、耗時長、試劑組成復雜等問題,使其在使用上受到一定限制。

2.1.2 SDS法 與CTAB不同,SDS(Sodium dodecyl sulfate,十二烷基硫酸鈉)是一種陰離子去污劑,在高溫條件(55～65℃)下能裂解細胞,使染色體離析和蛋白質變性,同時與蛋白質和多糖結合成復合物,釋放出核酸。通過提高鹽濃度和降低溫度,使該復合物沉淀出來,后用酚/氯仿反復抽提上清液中的核酸,以去除殘余蛋白質,最后用乙醇沉淀DNA[5-6]。

SDS法也是提取植物基因組DNA的經典方法。Tigst等[22]用3種不同的DNA提取方法(試劑盒法、SDS法和高通量法)提取油菜、亞麻和大豆單個種子中的DNA,DNA平均產量達58～251ng/mg,均可滿足后續檢測需求。高媛等[16]為了探求適于轉基因蘋果果肉的DNA提取方法,采用改良CTAB法、SDS法和高鹽低pH SDS法對蘋果果肉進行基因組總DNA提取。結果表明,相比其他2種方法,SDS法在純度和產量上效果最好,DNA的A260/A280值為1.808,產量為0.012mg/g。李蔥蔥等[23]以SDS為主要提取試劑,建立了用于玉米葉片基因組DNA的微量快速提取方法。該方法省略了抽提、洗滌等步驟,提取濃度可達250ng/μL以上,A260/A280的比值在1.9左右,純度較高,滿足了轉基因成分定性PCR檢測的需要。趙艷等[24]應用改良SDS法提取轉基因稻米及經過蒸煮、微波膨化后稻米食品中的DNA,結果顯示該法提取效果明顯好于CTAB法,PCR技術能檢測到加工食品中的轉基因成分。許冬倩等[25]在SDS法提取油脂DNA的操作過程中,省略了酚/氯仿抽提的步驟,獲得了滿足下游PCR檢測的DNA質量。推測其可能原因為油脂中干擾DNA提取的蛋白質及多糖類物質含量較低,酚/氯仿抽提的意義不太,相反,該步驟的增加伴隨著DNA的損失。Hellebrand等[26]則利用SDS法從粗制油和精煉菜籽油中均提取到可用于PCR檢測的DNA。梅玲玲等[27]采用CTAB法、酶裂解法及SDS法提取轉基因食品中的DNA,綜合DNA的提取純度、濃度、PCR擴增效果及操作簡易程度等因素,判定SDS法提取效果最好,具有經濟、簡便的特點,適用于PCR檢測。毛國杰等[28]在SDS提取緩沖液中加入乙醇和PVP有效去除轉基因番茄中的多糖和酚類物質,同時降低鹽濃度以沉淀多糖,獲得的DNA可進行穩定而準確的PCR檢測,該方法克服了SDS法對含糖量高的樣品提取效果不佳的缺陷。

SDS法操作簡單、快捷,可獲得符合檢測要求的DNA。但是,由于SDS的主要作用是沉淀蛋白質,在去除多糖類物質方面不夠理想,因此不適合提取含糖類較多的食品。

2.2 新提取方法的開發

2.2.1 磁珠法 磁珠法的基本原理是將細胞中游離出來的核酸分子吸附到磁珠表面,蛋白質等雜質不被吸附而留在溶液中。在磁場作用下,使磁珠與液體分離,回收磁珠,再用洗脫液洗脫磁珠,從而獲得高純度的DNA[5]。

磁珠法由于可以提取痕量DNA,而且提取的DNA純度好、質量高,因此被廣泛應用于多種復雜及深加工食品的DNA提取。王愛迪等[29]將磁珠法與市售試劑盒法進行比較,考察磁珠法對深加工食品中基因片段的提取效率。結果表明,磁珠法提取的DNA的完整性、濃度以及可擴增性等均超過試劑盒法。趙衛東等[30]制備了用于植物源性轉基因食品中提取基因組DNA的磁性微球,并將其作為吸附劑進行DNA提取,結果表明,所提幾種食品DNA的濃度和純度較高,可滿足后續檢測需求。此外,該學者又以大豆和馬鈴薯植物源性食品為研究對象,比較了磁珠法、試劑盒法和CTAB法等5種方法提取DNA的效果,結果顯示,與其他幾種提取方法相比,磁珠法提取的DNA濃度稍低,但純度較高,對于豆油和淀粉等深加工樣品,可提取到很好的基因組片段,滿足轉基因檢測的要求[31]。Catherine等[32]通過對比Wizard試劑盒磁珠、硅膠和羥基磷灰石等3種材料吸附橄欖油中DNA的能力,發現Wizard磁珠試劑盒法提取效果最好。Wu等[33]比較了Wizard磁珠純化試劑盒和CTAB法對大豆油的提取效率,發現磁珠法提取DNA的擴增效率更高。2011年,該科研團隊同樣利用磁珠純化試劑盒提取食用油中的DNA,完全滿足后續PCR-CE-SSCP檢測方法的要求[34]。楊冬燕等[35]比較了核酸富集處理前后3種核酸提取方法(DN easy? Plant Mini試劑盒法、Food EX Magnetic試劑盒法和CTAB法)對精煉食用植物油的提取效果。實驗證實,磁珠試劑盒法(EX Magnetic試劑盒法)在采用核酸富集處理后,能擴增出目的片段的樣品數量由原來的0個增加到6個,提取效率顯著提高。

磁珠法通過特異吸附DNA去除了干擾后續反應的抑制劑,具有很好的純化作用。此外,該法無需離心和加入多種試劑,操作簡單,適合核酸自動化提取需求,是未來核酸提取方法的一個重要發展方向。

2.2.2 試劑盒法 試劑盒法是通過將提取食品中DNA所需的試劑和耗材整合在一起,從而可直接用于提取高質量DNA的方法,基于的主要原理有離心柱法、離子交換法及磁珠法等。由于該方法適用于同時提取多個樣品,操作簡便、快速、高效,無需酚氯仿抽提,避免有毒試劑的污染,從而受到科研人員的青睞。其中用于提取食用油中基因組的試劑盒種類繁多[36]。程紅梅等[37]以大豆油為材料,建立了一種快速、簡便提取大豆油中DNA的試劑盒法,能從10mL大豆油中提取0.4μg高純度DNA。該方法用于提取市售的十幾種精煉大豆油DNA并進行PCR檢測,分別擴增出不同的目的片段。Spaniolas等[38]通過比較3種不同DNA提取試劑盒對葵花籽油和橄欖油的提取效果發現,QIAamp DNA Stool試劑盒獲得比較強的PCR擴增信號相比其他兩種試劑盒。Simona等[39]則運用擴增片段長度多態性的方法來評價貯藏時間對橄欖油DNA的影響,使用NucleoSpin Plant試劑盒(Macherey-Nagel,Düren,Germany)提取DNA達到了預期效果,結果顯示一個月內生產的橄欖油提取DNA質量較好,一個月后提取DNA質量顯著降低。Michelangelo等[40]為了建立辨別橄欖油真假屬性的檢測方法,比較了試劑盒法和改良CTAB法提取8種植物油中DNA的效果,結果發現試劑盒法提取DNA可擴增出對應目的條帶,而CTAB法提取的DNA無擴增。除此之外,還有用于其他食品中(特別是深加工食品)基因組提取的試劑盒。莊逸林等[11]用改良的QIAGEN基因組提取試劑盒對番木瓜罐頭進行核酸提取方法的優化,與改良的CTAB法相比,該方法成功提取了可用于PCR擴增反應的DNA。同樣是番木瓜制品中DNA提取的方法研究,Kiyomi等[41]將不同樣品經過適當前處理后使用不同試劑盒進行DNA提取。相比其他5種基因組提取試劑盒,QIAGEN的陰離子交換試劑盒(Genomic-tip 100G)獲得較高純度和產量的DNA,可用于轉基因番木瓜的檢測研究。Rafaat等[42]比較了6種從玉米及其衍生產品中提取DNA的方法,結果發現,Roche的DNA提取試劑盒從玉米的衍生產品中獲得純度最高的DNA,部分樣品后續的PCR檢測能檢測到相應的外源基因。Angela等[43]則對比了2種不同試劑盒對深加工食品(如櫻桃果醬、馬鈴薯水餃及巧克力等)的DNA提取效果,實驗證實,Wizard? Magnetic DNA Purification for Food試劑盒對提取富含多糖和多酚化合物的食品中DNA的效果較好;而QIAGEN DNeasy? Tissue試劑盒對富含油脂食品的提取效果更加理想,具有特異、靈敏和重現性好的優點。

由于食品種類繁多且生產工藝復雜,其DNA提取技術應該有不同的針對性,不同的產品應該采用不同的試劑盒,而目前國內外用于提取食品中DNA的試劑盒卻存在如下的問題:品種相對單一,難以滿足各類食品特別是復雜食品的檢測需求;標準化程度低和可操作性較差,按照說明書要求往往提取不到目標產物(主要針對深加工食品);國外試劑盒價格昂貴,造成檢測成本升高。因此,要積極研發針對不同加工程度食品的DNA提取技術,提高其可操作性,促進其標準化,使該技術能得到廣泛應用。

2.3 其他提取方法

植物源性食品中基因組的提取方法遠不止上述四種類型,常見的還有高鹽低pH法、尿素法及異丙醇沉淀法等。但是,由于技術條件的限制,這些方法并沒有在食品分析領域獲得廣泛的認可和應用。曹文波等[44]建立了一種從玉米和水稻葉片中提取高質量基因組的改良尿素法,與傳統方法(CTAB和SDS法)相比,該法具有產率高、快速簡便、可常溫操作、成本低等優點。王永等[45]曾以轉基因大豆為研究材料,采用改良Chelex-100法和常規CTAB法進行基因組的提取比較和評價。結果表明,改良Chelex-100法的提取效率與CTAB法相當,且具有簡便、快捷、經濟的特點,可替代后者用于轉基因檢測。徐偉麗等[46]則以豆粉為材料來評價幾種基因組提取方法的工作效率,在綜合考慮DNA的純度和濃度后認為幾種提取方法的優劣依次為:改進熱解法>改進異丙醇沉淀法>熱解法>異丙醇沉淀法>高鹽低pH法>改進CTAB法>CTAB法>改進SDS法。同年,該研究團隊以生豆漿為研究對象,比較了熱解法、異丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高鹽低pH和異硫氰酸胍法以及它們的改良方法的提取效果。結果顯示,除異丙醇沉淀法外,其他方法提取的DNA均可滿足PCR的檢測需求[47]。

3 不同植物源性轉基因食品DNA提取技術的方法比較

針對上文所述各種提取方法來看,目前并不存在一種通用型的植物源性轉基因食品DNA的提取方法。傳統方法雖然適用于大多數樣品的DNA提取且成本低,但不宜大批量樣品的DNA提取。此外,還存在使用的有機溶劑容易污染環境、操作相對劇烈從而對DNA有一定程度破壞及提取的DNA需進一步純化等問題。新型方法往往已形成商品化且環保安全,適合大規模樣品的DNA提取和高效純化,但相對成本較高,而且需要專門的配套設備。由此可見,不同方法具有各自不同的優缺點,操作人員需要根據各自的食品類型和特點進行選擇和優化,從而確定出最佳方案。

4 小結和展望

從理論上講不論是經典提取方法還是商業化的試劑盒都可以用于食品中植物源基因組DNA的提取,但食品往往經歷復雜的加工程序,其中產生的某些物理、化學或酶因子會嚴重影響其DNA質量,因此,在實際應用中其提取技術又不能與普通的植物組織相提并論?？偨Y已有的DNA提取技術及其在食品中的應用研究,目前植物源性食品中DNA提取需突破的關鍵技術有:加強不同食品中含有的各種抑制劑的前處理技術;綜合幾種DNA提取方法進行優化,以便找到最適方法;針對片段小和含量低的情況,提高DNA的富集和純化技術?？偠灾?如何快速、高效、經濟地從食品中提取到高產率和高純度的DNA已成為轉基因食品檢測體系建立的重要制約因素。在食品工業化的今天,DNA提取技術的發展必須與食品基因檢測的需求相適應,該技術的商品化和自動化將是未來發展的主流方向,這不僅能為檢驗機構提供便利,而且有利于檢測方法的標準化,為轉基因食品的安全標識提供有效的技術保障。

[1]Panagiotis M,Ioannis G,Ioannis S,et al. Advances of DNA-based methods for tracing the botanical origin of food products[J].Food Res Int,2014,60:163-172.

[2]Costa J,Mafra I,Oliveira MBPP. Advances in vegetable oil authentication by DNA-based markers[J]. Trends Food Sci Tech,2012,26:43-55.

[3]Caterina A,Michelangelo V,Simona P,et al. The use of food genomics to ensure the traceability of olive oil[J]. Trends Food Sci Tech,2011,22:237-244.

[4]張海亮,吳亞君,陳銀基,等.食用油中DNA提取方法的研究進展[J].食品與發酵工業,2010,36(11):128-132.

[5]凌莉,李志勇,黃韻,等.食品中植物基因組DNA提取純化方法研究進展[J].食品科技,2012,37(5):6-15.

[6]蔡翠霞,肖維威,康文杰,等.轉基因食品DNA提取研究進展[J].中國生物工程雜志,2011,31(5):121-125.

[7]周紅霞,華春,張紅琳,等. PCR法定性檢測大豆食用油中轉基因成分[J].食品工業科技,2012,33(6):87-91.

[8]Sonia RG,María DB,Manuel PM,et al. Development of a method to recovery and amplification DNA by real-time PCR from commercial vegetable oils[J]. Food Chem,2014,158:374-383.

[9]Tung N,Son CT,et al. Comparison of DNA extraction efficiencies using various methods for the detection of genetically modified organisms(GMOs)[J]. Int Food Res J,2009,16:21-30.

[10]?zge A,Funda Y,Karlo M. PCR detection of genetically modified maize and soy in mildly and highly processed foods[J]. Food Control,2013,32:525-531.

[11]孫敏,粟志平,梁成珠,等.粉絲類產品中轉基因成分的檢測[J].食品科學,2008,29(6):230-233.

[12]莊逸林,相大鵬,周木龍,等.番木瓜及其深加工制品中轉基因成分定性PCR檢測方法的建立[J].食品科學,2007,28(7):352-355.

[13]姚偉,耿廣良,余愛麗,等.一種改良的轉基因甘蔗基因組DNA提取方法[J].熱帶亞熱帶植物學報,2004,12(3):257-260.

[14]閆苗苗,魏光成,潘效紅,等.一種適用于動物與植物總DNA提取的方法-改良CTAB法[J]. 安徽農業科學,2008,36(20):8488,8588.

[15]陳笑蕓,汪小福,周育,等.轉基因大豆深加工食品DNA鑒定技術研究[J].中國食品學報,2013,13(4):156-162.

[16]高媛,杜國強,師校欣. 適于轉基因蘋果種子和果肉總DNA提取的方法[J]. 中國農學通報,2010,26(16):238-241.

[17]吳申懋,鄧志瑞,陳沁. PCR技術區分液體麥精和玉米糖漿[J]. 食品工業科技,2013,34(23):151-155.

[18]張秀杰,刁青云,宛煜嵩,等. 蜂蜜中轉基因成分的PCR檢測[J]. 基因組學與應用生物學,2010,29(3):584-587.

[19]Sónia S,Joana SA,Maria BO,et al. Improving DNA isolation from honey for the botanical origin identification[J]. Food Control,2014,http://dx.doi.org/10.1016/j.foodcont.2014.02.035

[20]Patrick G,Adelina E,Paul M,et al. Automated DNA extraction from pollen in honey[J]. Food Chem,2014,149:302-306.

[21]Patrick G,Andrea H,Adelina E,et al. Development of a CTAB buffer-based automated gDNA extraction method for the surveillance of GMO in seed[J]. Eui Food Res Technol,2013,236:599-606.

[22]Tigst D,Indira R,Michelle H,et al. Assessment of DNA extraction methods for PCR testing of discontinued or unapproved biotech events in single seeds of canola,flax and soybean[J]. Food Control,2012,24:44-49.

[23]李蔥蔥,劉娜,李飛武,等. 一種快速提取玉米基因組DNA的方法[J]. 玉米科學,19(1):52-55.

[24]趙艷. 轉基因稻米加工食品的PCR檢測技術研究[J]. 中國糧油學報,2006,21(3):198-201.

[25]許冬倩,郝義波. 一種有效的油脂DNA的提取方法[J]. 食品研究與開發,2008,29(10):42-45.

[26]Hellebrand M,Nagy M,Morsel JT. Determination of DNA traces in rapeseed oil[J]. Z Lebensm Unters Forsch A,1998,206:237-242.

[27]梅玲玲,徐藝珍,程蘇云,等. 轉基因食品DNA提取技術研究[J]. 中國衛生檢驗雜志,2005,15(6):689-690,749.

[28]毛國杰,歐陽青,蔡文啟,等. 一種適于轉基因番茄檢測的高效穩定的DNA提取方法[J]. 農業生物技術學報,2001,9(4):363-365.

[29]王愛迪,冉曉華,陳磊,等. 超強磁性微球提取深加工轉基因食品DNA[J]. 食品科學,2013,34(10):122-125.

[30]趙衛東,鄭文杰,王愛迪,等. 磁性微球在植物源性轉基因食品檢測中的應用[J]. 食品研究與開發,2012,33(6):128-130.

[31]趙衛東,鄭文杰,賀艷. 植物源性食品DNA提取方法的建立及幾種方法比較[J]. 食品科技,2012,37(9):306-310.

[32]Catherine B,Delphine C,Isabelle M,et al. Comparative study of methods for DNA preparation from olive oil samples to identify cultivar SSR alleles in commercial samples:possible forensic applications[J]. J Agric Food Chem,2004,52:531-537.

[33]Wu Y,Chen Y,Ge Y,et al. Detection of olive oil using the Evagreen real-time PCR method[J]. Eur Food Res Technol,2008,227:1117-1124.

[34]Wu Y,Zhang H,Han J,et al. PCR-CE-SSCP applied to detect cheapoil blended in olive oil[J]. Eur Food Res Technol,2011,233:313-324.

[35]楊冬燕,楊永存,張海龍,等. 核酸富集處理對精煉食用植物油DNA提取效率的影響[J]. 中國衛生檢驗雜志,2009,19(12):2770-2772.

[36]Advances in vegetable oil authentication by DNA-based markers[J]. Trends food Sci Tech,2012,26:43-55.

[37]程紅梅,彭于發,金蕪軍,等. 一種快速、簡便提取大豆油DNA的方法及轉基因大豆油的檢測[J]. 中國農業科學,2007,40(5):1069-1072.

[38]Spaniolas S,Bazakos C,Spano T,et al. The potential of plastid trnL(UAA)intron polymorphisms for the identification of the botanical origin of plant oils[J]. Food Chem,2010,122:850-856.

[39]Simona P,Matteo B,Caterina A,et al. Storage-time effects on olive oil DNA assessed by Amplified Fragments Length Polymorphisms[J]. Food Chem,2010,123:787-793.

[40]Michelangelo V,Caterina A,Nelson M. Detection of plant oil DNA using high resolution melting(HRM)post PCR analysis:A tool for disclosure of olive oil adulteration[J]. Food Chem,2013,141:3820-3826.

[41]Kiyomi O,Kosuke N,Masaki K,et al. A DNA extraction and purification method using an ion-exchange resin type kit for the detection of genetically modified papaya in processed papaya products[J]. Food Control,2013,32:728-735.

[42]Rafaat ME,Mohamed FR,Klaus DJ. DNA extraction methods for detecting genetically modified foods:A comparative study[J]. Food Chem,2011,126:1883-1889.

[43]Angela DP,Vito TF,Maria CG,et al. A comparison of DNA extraction methods for food analysis[J]. Food Control,2007,18:76-80.

[44]曹文波,鄭璐璐,謝文海. 一種提取植物基因組DNA的方法-改良尿素法[J]. 華中師范大學學報,2008,42(3):448-451.

[45]王永,蘭青闊,張莉,等. 改良Chelex-100法和CTAB法用于轉基因抗草甘膦大豆檢測效果的比較[J]. 大豆科學,2008,27(5):898-901.

[46]徐偉麗,馬鶯,杜明,等. 豆粉基因組DNA不同提取方法的比較[J]. 中國農學通報,2011,27(23):119-122.

[47]徐偉麗,杜明,馬鶯,等. 生豆漿基因組DNA不同提取方法的比較研究[J]. 安徽農業科學,2011,39(20):12013-12015,12017.

Advances on extraction technologies of plant genomic DNA in food

ZHANG Juan,WU Wei-liang,TAN Jia-li,LIANG Yu-bin,LI Xiao-ming

(Guangdong Test Center of Product Quality Supervision,China National Food Quality Supervision and Testing Center,Foshan 528300,China)

How to acquire high purity and quantity plant genomic DNA in food has been an important step in genetically modified organisms(GMOs)detection. Several main extraction methods of plant genomic DNA were reviewed in this paper. The discussions were mainly focused on the advantages and disadvantages of several methods and the current status and perspectives of plant genomic DNA extraction technology in food,in order to supply some information for establishing the effective plant genomic DNA extraction method in food.

food;plant genome;DNA extraction

2014-06-13

張娟(1981-)，女，博士，主要從事轉基因食品檢測方面的相關研究。

廣東省自然科學基金博士啟動項目(S2012040007679);中國南方智谷引進創新團隊項目(201209)。

TS207.3

A

1002-0306(2015)07-0396-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.07.075