白細胞濾過器對新鮮冰凍血漿主要成份及活性的影響

王淑嬋

隨著醫學技術的不斷進步，輸血方式不斷增多及治療范圍日益擴大，輸血及血液制品給廣大患者帶來的不良反應，越來越引起國內外臨床工作者的重視。有研究表明引起這些輸血相關的不良反應的主要原因是由于血液中的白細胞［1］。臨床資料也證實過濾去除白細胞的血液可以避免或者減少輸血不良反應的發生，去除白細胞的其安全性及臨床療效也被臨床實踐所證實［2］。過濾器法以其簡便高效的特點為廣大采供血機構所使用，但濾器作為外源性的生物材料可能在過濾血液時會引起血漿中一些主要成分及凝血因子活性的變化，為探討過濾器去白對新鮮冰凍血漿的成份的影響，我們對過濾前后新鮮冰凍血漿主要成分及活性進行檢測分析，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取新鮮冰凍血漿40袋，新鮮冰凍血漿由海南省海口市中心血站提供，每袋100 ml，其中A型、B型、AB型及O型新鮮冰凍血漿各10袋。在37℃水浴溶化，溶化后，立即在超凈工作室內，按無菌技術要求抽取血漿5 ml為過濾前標本，然后對抽取后的血漿進行過濾，過濾速度≤120滴/min，過濾后，從過濾后的血漿中同樣抽取5 ml為過濾后的標本，在同一時間段、同批次由專人分別對2組新鮮冰凍血漿主要成分水平及活性進行檢測。

1.2 儀器與方法

1.2.1 儀器:一次性 FTS-RC白細胞過濾器血庫型1×200 ml(南京雙威生物醫學科技有限公司生產)，KJX-111冰凍血漿解凍箱(蘇州醫用儀器廠生產);Sysmex CA-7000血凝分析儀(日本 Sysmex公司生產)，AU2700型全自動生化分析儀(日本Olympus)，紫外可見分光光度計(北京普析通用)及電熱恒溫水浴箱(蘇州醫用儀器廠生產)。

1.2.2 試劑:IgG、IgA、IgM、C3 及 C4 試劑(德國 Dade Behring Marburg GmbH產品);標準血漿、缺乏因子血漿、質控血漿及定標血漿及凝血試劑(日本Sysmex公司CA-7000型自動凝血分析儀配套產品);活化部分凝血酶時間(APPT)測定、凝血酶時間(TT)、凝血酶原時間(PT)、纖維蛋白原(Fig)試劑(德國SIEMENS產品);血漿蛋白試劑(上海復興長征醫學科學有限公司生產)。

1.2.3 檢測方法:將以上留取的血漿樣品，嚴格按Sysmex CA-7000型全自動血凝分析儀操作說明，對所有標本檢測凝血因子纖維蛋白原(Fib)、凝血因子Ⅱ:C(FⅡ:C)、凝血因子V:C(FV:C)、凝血因子Ⅶ:C(FⅦ:C)、凝血因子Ⅷ:C(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ:C(FⅨ:C)、凝血酶原時間(PT)、部分凝血活酶時間(APTT)及凝血酶時間(TT)等測定。血漿蛋白采用AU2700型全自動生化分析儀檢測，其中白蛋白(Alb)采用溴酚綠法測定，總蛋白(TP)采用雙縮脲法測定。采用散射比濁法檢測IgG、IgA、IgM、C3及C4水平。以上操作嚴格按試劑說明書進行，每次檢測前，均進行質量控制。

1.3 統計學分析 應用SPSS 18.0統計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 新鮮冰凍血漿去除白前后部分凝血因子活性及凝血功能比較 凝血因子FⅡ:C、FⅨ:C在過濾去白細胞前后比較，差異無統計學意義(P＞0.05);其余凝血因子Ⅰ(Fib)含量、FV:C、FⅦ:C及FⅧ:C活性均較過濾去白細胞前下降，過濾前后比較差異均有統計學意義(P＜0.05);凝血功能PT及TT較過濾去白細胞前延長，但差異無統計學意義(P＞0.05)，而APTT較過濾去白細胞前延長，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 新鮮冰凍血漿除白前后凝血功能及部分凝血因子活性比較n=40，±s

表1 新鮮冰凍血漿除白前后凝血功能及部分凝血因子活性比較n=40，±s

項目 過濾前 過濾后 t值 P值Fib(g/L)2.70 ±0.46 2.37 ±0.34 3.401 0.002 FⅡ:C(%) 96.10 ±4.08 97.40 ±4.38 1.259 0.203 FV:C(%) 101.45 ±9.38 97.35 ±3.54 2.632 0.012 FⅦ:C(%) 91.67 ±5.72 84.39 ±14.88 2.669 0.010 FⅧ:C(%) 101.45 ±9.88 88.40 ±13.34 4.582 0.000 FⅨ:C(%) 83.68 ±13.93 81.63 ±14.38 0.557 0.581 PT(s) 12.93 ±1.69 13.00 ±1.93 0.191 0.850 APTT(s) 36.63 ±1.61 39.53 ±2.26 6.640 0.000 TT(s)13.75 ±2.64 13.87 ±3.09 0.219 0.828

2.2 新鮮冰凍血漿去除白前后免疫球蛋白、補體及血漿蛋白水平變化比較 補體C3、C4血漿水平在過濾去除白細胞后明顯下降，兩者前后比較，差異有統計學意義(P＜0.01);余免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及血漿總蛋白、血漿白蛋白血漿水平在過濾去除白細胞后，變化不明顯，前后比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 新鮮冰凍血漿除白前后補體、免疫球蛋白及血漿蛋白水平變化比較n=40，±s

表2 新鮮冰凍血漿除白前后補體、免疫球蛋白及血漿蛋白水平變化比較n=40，±s

項目 過濾前 過濾后 t值 P值C3(g/L)1.39 ±0.23 1.16 ±0.35 3.801 0.000 C4(g/L) 0.21 ±0.04 0.18 ±0.05 3.965 0.000 IgA(g/L) 3.19 ±0.84 3.03 ±0.93 0.766 0.448 IgG(g/L) 13.13 ±3.16 12.65 ±3.11 0.592 0.557 IgM(g/L) 2.73 ±0.64 2.56 ±0.57 1.440 0.158 Alb(g/L) 37.68 ±5.15 36.22 ±4.80 1.277 0.209 TP(g/L)55.80 ±9.74 53.85 ±8.91 0.944 0.351

3 討論

白細胞在血液中作為一種重要成分，在防御外來病原菌與異體抗原入侵機體時起著重要作用。有研究發現輸血治療過程中非治療性成份白細胞是一種“污染物”［3］。常規血液制品的保存狀態下，白細胞的壽命為9～13 d，隨著保存時間延長，白細胞將逐漸裂解成碎片，釋放和生成細胞因子，這是導致輸血不良反應的直接原因［4］;另同種異體輸注時產生白細胞抗體，引起一系列不良反應，如輸血成分中中含有少量的白細胞可引發的非溶血性發熱反應、成人呼吸窘迫綜合征、輸血后移植物抗宿主病、血小板輸注無效以及傳播某些病毒性疾病等，這些不良反應后果嚴重，危害極大［5］;再就是白細胞是一些病毒的載體，輸注含白細胞的血液制品可將感染這些病毒的可能［6］。據文獻與美國血庫協會(AABB)資料顯示血液去除白細胞的數量與輸血反應呈相關性［7］。研究表明血液去除白細胞后殘留的白細胞數量低于1×108/L、1×107/L、1×106/L時分別可避免因白細胞抗體所致的非溶血性輸血發熱反應、輸血后移植物抗宿主病、HLA抗體所致的同種免疫以及與白細胞攜帶病毒相關疾病的傳播［8］。

白細胞分離是一種新型血液凈化技術，是通過濾過、吸附等方法去除外周血中白細胞(包括中性粒細胞、單核細胞和淋巴細胞)，以減輕致炎細胞及其釋放的致病性蛋白酶、氧自由基及細胞因子等物質對機體的免疫攻擊，減少和避免機體損傷［9］。目前常用的去除白細胞的方法有離心去白法、洗滌法、沉降法、白細胞過濾器法、血細胞分離機去除法等，過濾器法因其方便高效被廣泛應用，但作為外源性生物材料在過濾時可能對血漿中凝血因子的生物活性和血漿蛋白的含量產生一定的影響。本結果顯示凝血功能PT、APPT及TT較過濾去白細胞前不同程度的延長，特別是APPT比過濾前明顯延長，差異有統計學意義(P＜0.05)。進一步分析，凝血因子Ⅰ(Fib)含量、FV:C、FⅦ:C及FⅧ:C活性均較過濾去白細胞前明顯下降，僅FⅡ:C、FⅨ:C在過濾去白細胞前后無明顯變化，這說明APPT的延長與部分凝血因子活性降低有關，即過濾白細胞后，新鮮冰凍血漿的凝血功能及部分凝血因子活性降低，特別是FV:C、FⅧ:C是極不穩定的凝血因子，保存時間的延長、過濾器的吸附作用及水浴融化等多種因素會對其產生影響，從而使其活性降低，與張昆梅等［10］報道相似。補體 C3、C4水平較濾過前明顯下降，考慮過程對補體有不同程度激活和消耗，免疫球蛋白及血漿蛋白水平無明顯改變，出現補體水平下降，考慮為外源性生物膜的生物相容性相關，生物材料對補體系統的激活，導致補體水平下降。白細胞濾器去除白細胞的原理主要為細胞的篩分和粘附作用，絕大多數血小板牯附在濾器上時，又能進一步促進白細胞的粘附，同時也可粘附凝血因子及補體成份。綜上所述，白細胞濾器可通過不同的途徑影響部分凝血因子活性及補體水平，白細胞過濾器對全血或紅細胞懸液性能、細胞形態及細胞免疫功能方面的影響也已有報道［11］。

總之，目前白細胞過濾器是能夠降低或一定程度上能有效的防止一些輸血不良反應和病毒傳染，為一較為方便、安全的方法［12］，雖然白細胞濾器對輸血成份均有不同程度的影響，但隨著現代科學及材料科學的進一步發展，有理由相信在不久的將來會找到更好更相容性的生物材料。目前少白細胞血液輸注在預防非溶血性發熱性輸血反應、HLA同種免疫反應及嗜白細胞病毒感染等方面取得一定成效，在以后的臨床應用中須注意的是白細胞濾器對血液成份的成分及活性的影響，以便及時準確實施治療措施，降低不良反應的發生。

1 鄧春玫.白細胞過濾對輸血反應的臨床意義.中國現代藥物應用，2013，7:63-64.

2 王甜甜，王世春，王澤蓉，等.白細胞濾除對全血的質量影響.檢驗醫學與臨床，2013，10:1690-1692.

3 宋海燕，孟祥紅，郭豐，等.白細胞過濾器對新鮮冷凍血漿中凝血因子活性機制及血漿蛋白變化的影響.武警醫學，2010，21:1074-1075.4 陳民才，金玉，邵春燕，等.幾種血站型白細胞濾器質量的比較.實用醫學雜志，2009，25:222-224.

5 水波，王忱，侯治兵，等.白細胞過濾及血漿病毒滅活后血液容量控制標準的探討.臨床血液學雜志，2012，14:522-523.

6 趙莉，趙燕.聯合應用濾除白細胞和亞甲藍光化學病毒滅活對新鮮血漿成分的影響.中國輸血雜志，2011，24:679-680.

7 潘越飛.血液過濾去除白細胞的質量控制.內科，2012，7:63-65.

8 王培華主編.輸血技術學.第2版.北京:人民衛生出版社，2002.23.

9 史振偉，許焱.白細胞分離技術的臨床應用.中國血液凈化，2012，11:679-681.

10 張昆梅，藍松，歐海，等.白細胞過濾對血漿中凝血因子及蛋白的影響.哈爾濱醫藥，2011，31:15.

11 陳偉岳，葉春艷，密超可，等.不同白細胞濾器的實用性評價.現代實用醫學，2013，25:695-697.

12 馮國基，劉鵬，杜學麗，等.濾除白細胞與MB-P法病毒滅活對血漿凝血因子的影響.臨床輸血與檢驗，2010，12:39-41.