關于羅氟司特質量標準的研究

劉昕 王金桃

(山西醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院 山西 太原 030001)

1.有關物質方法學研究

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Agilent 1260 DAD;Agilent 1260 VWD;PH 計:FE 20 型，METTLER TOLEDO 公司;電子分析天平:AB135 - S，METLER TOLERO 公司;電子天平:CP225D，Sartorius 水:純凈水，自制Milli-Q。

1.1.2 試劑

磷酸二氫鉀，氫氧化鈉，40%四丁基氫氧化銨水溶液，甲醇，4L，供試品:自制 羅氟司特對照品:羅氟司特。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以磷酸鹽緩沖液(稱取磷酸二氫鉀0.65 g，加水900 ml，加40%四丁基氫氧化銨水溶液0.5 ml，用磷酸調pH 為3.2)-甲醇(90 :10)為流動相;檢測波長為235 nm;理論板數按羅氟司特峰計算不低于2000［1］。

1.2.2 溶液的配制

(1)供試品溶液的配制

精密稱取樣品適量，加溶劑溶解并稀釋制成濃度為0.5 mol·L-1的溶液，即得供試品溶液。

(2)對照品溶液的配制

精密量取供試品溶液1.0 ml，置100 ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，即得。溶劑:水:乙腈=7:3。分別取對照溶液及供試品溶液各10 ul，注入色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.3 方法與結果

(1)系統(tǒng)適用性試驗

試驗方法:稱取對照品適量，加溶劑制成濃度為0.5 mol·L-1的溶液即得供試品溶液。取供試品溶液各10 ul 注入色譜儀，記錄色譜圖。相對保留時間(min)21.293，對稱因子1.04，理論塔板數17321，分離度3.04/7.68。試驗結論:該方法測定羅氟司特系統(tǒng)適用性良好。

(2)強降解試驗

酸破壞:精密稱取樣品約25 mg，置50 ml 量瓶中，加入1 mol·L-1鹽酸2.0 ml，在沸水浴中加熱3 小時，放冷，用1 mol·L-1氫氧化鈉中和，并加溶劑溶解并稀釋至刻度，即得。堿破壞:精密稱取樣品約25 mg，置50 ml 量瓶中，加入1mol·L-1氫氧化鈉2.0 ml，在沸水浴中加熱3 小時，放冷，用1 mol·L-1鹽酸中和，并加溶劑溶解并稀釋至刻度，即得。氧化破壞:精密稱取樣品約25 mg，置50 ml 量瓶中，加入30%雙氧水1.0 ml，在沸水浴中加熱10 min，放冷，并加溶劑溶解并稀釋至刻度，即得。高溫破壞:精密稱取樣品約25 mg，置50 ml 量瓶中，溶劑適量溶解，在沸水浴中加熱4 小時，放冷，并加溶劑稀釋至刻度，即得。光照破壞:精密稱取樣品約25 mg，置50 ml 量瓶中，溶劑適量溶解，放入光照儀(4000lx)中5 h，加溶劑溶解并稀釋至刻度，即得。分別取以上溶液各10 ul，注入色譜儀，記錄色譜圖。結果見表1。

表1 強降解試驗結果

試驗結論:羅氟司特色譜峰純度，理論板數，與相鄰雜質峰的分離度均達到要求。該方法測定羅氟司特有關物質專屬性良好。

1.2.4 精密度試驗(1)進樣精密度試驗

試驗方法:取供試品溶液10 ul，連續(xù)進樣6 針，記錄色譜圖色譜純度(%)均 是99.95，峰 面 積 值 為2464621、2468759、2461813、2459206、2443194、2444719 和2457052，RSD(%)值為0.43。試驗結論:該方法測定羅氟司特進樣精密度良好。

(2)中間精密度試驗

試驗方法:分別在不同儀器，不同人對有關物質進行測定。比較有關物質測定的結果。單雜(%)為0.02，總雜為0.05 ，RSD(%)為0。試驗結論:該方法測定羅氟司特中間精密度良好。

1.2.5 定量限及檢測限

稱取對照品適量，加溶劑稀釋至適當的濃度，使信噪比達到10 ︰1，即為定量限;信噪比達到3 ︰1，即為檢測限。試驗結果:定量限為506 ng·ml-1。檢測限為151·8ng·ml-1。

1.2.6 重復性試驗

精密稱取樣品適量，加溶劑溶解并稀釋至濃度為0.5 mg·ml -1，搖勻即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0 ml，置100 ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。試驗結論:該方法測定羅氟司特有關物質重復性良好。

1.2.7 耐用性試驗

通過對色譜條件中的波長、流速、流動相水相pH 值、有機相水相之間的比例、色譜柱、柱溫等進行相應的變化，分別測定有關物質的含量。試驗結果:該方法測定羅氟司特有關物質耐受性良好。

1.2.8 溶液穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，測定其12 小時內的穩(wěn)定性。試驗結論:有關物質供試品溶液12 小時內穩(wěn)定。

2.溶劑殘留方法學驗證

2.1 實驗部分

2.1.1 儀器與試劑

安捷倫7820A，乙醇，N、N 二甲基甲酰胺(DMF)，電子天平:Sartorius，CP225D，水:高純水，自制，Milli-Q，供試品:自制 羅氟司特

2.1.2 溶液的配制

(1)供試品溶液的配制

取本品約0.2 g，精密稱定，置頂空瓶中，加N、N 二甲基甲酰胺2 ml溶解，密封，搖勻即得。

(2)對照品溶液的配制

取乙醇適量，精密稱定，用N、N 二甲基甲酰胺(DMF)制成乙醇0.5 mg·ml-1，即得。

2.1.3 色譜條件

試驗依據:中國藥典2010 年版二部附錄VIII P。色譜柱:5% -苯基-95%甲基聚硅氧烷填料(DB-5，30 m×0.53 mm×1.5 μm)柱，柱溫起始溫度60 ℃，保持5 min，以20 ℃·min-1升溫至200 ℃，保持5min。柱流速:1.5ml·min-1;進樣口:200 ℃;檢測器:50 ℃;分流比:10:1;頂空平衡溫度:80 ℃;定量環(huán)平衡溫度:95 ℃;傳輸線平衡溫度:105 ℃。分別取對照品溶液及供試品溶液各2 ml 置頂空瓶，頂空進樣，記錄色譜圖。

3.結果與結論

3.1 系統(tǒng)適用性試驗

對照溶液:取乙醇適量，精密稱定，用N、N 二甲基甲酰胺(DMF)制成乙醇濃度為0.5mg·ml-1，即得。分別取對照品溶液2 ml 置頂空瓶，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。

試驗結果及結論:乙醇保留時間:4.920 min;空白不干擾乙醇的測定;理論塔板數為66639 系統(tǒng)適用性良好。

3.2 進樣精密度試驗

精密稱定乙醇約0.5 g，置100 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度搖勻，即得對照品儲備溶液，精密量取對照品儲備溶液5 ml，置50 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液;取對照品溶液2 ml，注入色譜儀，記錄色譜圖。試驗結論:該儀器測定進樣精密度良好。

3.3 線性與范圍

精密量取進樣精密度項下對照品儲備溶液0.1 ml、0.5 ml、0.8 ml、1.0 ml、2.0 ml，分別置10 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度，即得線性溶液1、2、3、4、5。分別取以上溶液2 ml，注入色譜儀，記錄色譜圖。試驗結論:乙醇在濃度為0.051161 mg·ml -1 ～1.02322 mg·ml -1 范圍內，與峰面積呈良好的線性關系。相關系數r=0.9998。

3.4 定量限及檢測限

稱取對照品適量，加溶劑稀釋至適當的濃度，使信噪比達到8 ︰1 或10 ︰1，即為定量限;信噪比達到3 ︰1 或2 ︰1，即為檢測限。

3.5 重復性試驗

精密稱取6 份樣品，利用溶劑殘留測定方法測定其殘留溶劑的含量。平均(%)值為0.03 ，RSD(%)值為2.78。試驗結論:該方法測定羅氟司特中乙醇殘留重復性良好。

3.6 加樣回收率

80%對照品溶液:精密量取精密度項下對照品儲備溶液2.0 ml 置25 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度，搖勻即得。100%對照品溶液:精密量取精密度項下對照品儲備溶液2.5 ml 置25 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度，搖勻即得。120%對照品溶液:精密量取精密度項下對照品儲備溶液3.0 ml 置25 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度，搖勻即得。供試品溶液:精密稱取羅氟司特樣品約0.2 g，置頂空瓶中，共稱取9 份。分別加入80%、100%、120%對照品溶液2 ml，各三份，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得加樣回收率供試品溶液。對照品溶液:取乙醇適量，精密稱定，加DMF 制成乙醇濃度為0.5 mg·ml -1，即得。分別取對照品溶液及供試品溶液各2 ml 置頂空瓶，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。試驗結果:該方法測定乙醇加樣回收率良好。

3.7 耐用性試驗

通過對色譜條件中的起始柱溫、柱流速、進樣口溫度、分流比等進行改變，測定羅氟司特的溶劑殘留。試驗結論:該方法測定羅氟司特的溶劑殘留耐用性良好。

4.結論與討論

檢測波長的選擇取羅氟司特供試品適量，分別加入流動相制成濃度為0.5 mg·ml-1 的供試品溶液，在DAD 上于190 -400 nm 波長范圍內進行掃描［2］。結果對照品供試品溶液于271 nm 處有最大吸收，235 nm處有最小吸收但能檢出雜質最多，且在235 nm 處無干擾，故檢測波長選為235 nm。流動相的選擇 發(fā)現采用以磷酸鹽緩沖液(稱取磷酸二氫鉀0.65 g，加水900 ml，加40%四丁基氫氧化銨水溶液0.5 ml，用磷酸調pH3.2)-甲醇(90:10)為流動相時，羅氟司特的峰型對稱，與其有關物質以及降解產物均能得到很好的分離，因此采用本方法可有效測定羅氟司特的有關物質。

［1］ 韓偉，周新.慢性阻塞性肺疾病的治療新選擇-羅氟司特.世界臨床藥物，2011，32(7):396 -399.

［2］ 呂亞光，安信生，呂昭云等.培美曲塞二鈉原料中9 種殘留溶劑測定方法研究［J］，中國藥品標準，2009，10(6):427 -429.