2型糖尿病患者尿足細胞標志蛋白的檢測意義

史恒川 劉俊恒 朱建一

2型糖尿病患者尿足細胞標志蛋白的檢測意義

史恒川 劉俊恒 朱建一

目的 探討老年2型糖尿病不同腎病分期患者尿足細胞標志蛋白(PCX)的變化及其臨床意義。 方法 測定136例老年2型糖尿病患者和50例健康體檢者(對照組)尿PCX、尿白蛋白(UALB)、血清肌酐(CREA)、尿素(UREA)水平,按UALB水平將2型糖尿病患者分為3組:尿蛋白正常組、微量白蛋白尿組、臨床白蛋白尿組,將各組間檢測數據進行分析比較。 結果 尿蛋白正常組、微量白蛋白尿組、臨床白蛋白尿組尿PCX水平均明顯高于對照組(P<0.01)。各個組間PCX水平兩兩比較差異均有統計學意義(P<0.01),PCX水平隨著蛋白尿程度的增加而升高(r=0.58,P<0.01)。 結論 檢測尿PCX有利于DM患者腎損害的早期診斷和病變程度的評估。

2型糖尿病; 腎病; 足細胞標志蛋白; 白蛋白尿

糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(DM)最嚴重的并發癥之一,這是一種以腎臟微血管損害為主的腎小球病變。足細胞是組成腎小球濾過膜的主要成分,其足突頂端表面有一層富含唾液酸的糖蛋白,是最為特異的足細胞標志蛋白(podocalyxin,PCX),參與維持腎小球的正常結構和濾過屏障。足細胞損傷是腎病最早期的病理改變,其損傷和脫落是腎小球濾過屏障發生改變并產生蛋白尿的重要因素[1],伴隨著足細胞的損傷,患者尿液中PCX(UPCX)的水平也發生變化。本文通過對2型糖尿病(T2DM)患者UPCX的檢測,探討其在T2DM患者早期腎損害診斷中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2014年1～11月本院內分泌科住院及門診就診的T2DM患者136例,均符合1999年世界衛生組織(WHO)的糖尿病診斷標準。排除各種感染性疾病、原發性腎炎、關節炎、系統性紅斑狼瘡等其他免疫炎性疾病、嚴重心腦血管疾病和肝臟疾病,1月內服用免疫抑制劑等藥物患者。136例DM患者根據其尿白蛋白/肌酐比值(the ratio urinary albumin to creatinine, ACR)分為3組:尿蛋白正常組:ACR<30 mg/g,共46例,年齡52～87歲,平均(62.9±10.8)歲,男24例,女22例;微量白蛋白尿組:30 mg/g≤ACR≤300 mg/g,共47例,年齡54～89歲,平均(63.3±9.4)歲,男24例,女23例;臨床白蛋白尿組:ACR>300 mg/g,43例,年齡53～90歲,平均(68.1±15.3)歲,男21例,女22例。同期選擇來我院健康體檢者50例作為對照組,年齡56～82歲,平均(62.1±15.9)歲,男26例,女24例。體檢均排除心、肝、腎等重要臟器疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床資料收集:記錄各組中所有研究對象的性別、年齡、病程、身高、體質量,計算體質量指數(BMI)。

1.2.2 檢測指標：留取患者晨起清潔中段尿，1500 r/min離心20 min，棄去上清，留取尿沉渣200 μl，-20 ℃冰箱保存備用。PCX檢測采用ELISA法，用GENESIS RPM 150全自動酶免疫系統檢測。檢測試劑盒購自上海越研生物科技有限公司。參照試劑盒說明書操作，使用標準品繪制標準曲線，然后對照標準曲線計算PCX的水平。同時收集受檢者的晨尿用于檢測尿微量白蛋白(UALB)，為了減少受檢者尿量收集對測定結果的影響，UALB的濃度采用除以尿肌酐(UCr)的結果來表示。UALB采用免疫比濁法，UCr采用酶法，在德國拜耳DCA-2000分析儀上進行檢測；同時受檢者清晨取空腹靜脈血，分離血清后用于檢測血清肌酐(CREA)、尿素(UREA)。CREA、UREA在Roche Modular P800模塊式全自動生化儀上完成檢測，試劑為法國Roche公司產品。

2 結果

2.1 DM各組與對照組臨床資料比較 DM各組與對照組在性別、年齡、BMI等指標比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。微量蛋白尿組和臨床白蛋白尿組病程與尿蛋白正常組相比較,差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 DM各組與對照組間臨床資料比較

注:與正常蛋白尿組比較,**P<0.01

2.2 DM各組與對照組檢測指標比較 尿蛋白正常組、微量白蛋白尿組、臨床白蛋白尿組UREA、UPCX水平均明顯高于對照組(P<0.01);與尿蛋白正常組相比,微量白蛋白尿組、臨床白蛋白尿組CREA、UREA、UPCX水平也明顯增高(P<0.01或P<0.05);臨床白蛋白尿組CREA、UREA、UPCX水平也明顯高于尿蛋白正常組和微量白蛋白尿組(P<0.01);見表2。

表2 DM各組與對照組肌酐、尿PCX及ALB水平比較

注:與對照組比較,**P<0.01;與尿蛋白正常組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與微量白蛋白尿組比較,##P<0.01

2.3 尿PCX的相關性分析 尿PCX與尿ALB呈顯著正相關(r=0.58,P<0.01),隨著尿蛋白排泄的增加,尿沉渣中PCX的濃度也明顯上升。

3 討論

3.1 DN是DM最嚴重的并發癥之一,是引起腎衰竭的重要原因,也是DM病人主要的死亡原因之一。臨床上約有40%的DM患者在發病10年后出現DN。早期的診斷和治療能明顯改善DN的預后,延緩腎臟損傷發展至末期,降低病死率。UALB、超敏C反應蛋白(hs-CRP)等指標在DN預測中有一定的意義[2],但易受人為因素身體狀態及藥物等因素影響[3],不能真實反映早期腎臟受損情況。

3.2 足細胞是高度特化的腎小球臟層上皮細胞,是組成腎小球濾過膜的主要成分,位于腎小球基底膜外側,也是阻止大分子濾過的最后屏障。PCX是腎小球足細胞足突頂端膜區的主要跨膜蛋白之一,也是足細胞表面特異性標志蛋白分子之一,在足細胞成熟過程中固定于足細胞頂膜[4],只表達于足細胞而不表達于其他的尿道上皮細胞。PCX作為腎小球主要帶負電荷的蛋白分子,可以防止突起之間黏連，維持裂孔膜結構和腎小球濾過膜電荷屏障。近年的研究發現,足細胞是各種腎小球炎癥及非炎癥損傷的靶位[5],當腎臟損傷時,足細胞形態開始發生改變,與血管基底膜剝離,隨尿液排出[6]。本研究結果顯示,DM患者各組尿沉渣中PCX水平顯著高于對照組,差別有統計學意義(P<0.01),表明DM患者在發生腎臟損傷時,尿PCX水平明顯增高,說明DM患者腎小球損傷的活動性[7]。有研究表明在腎小球足細胞從基底膜脫落之前,尿中PCX水平就已經升高[8],因此PCX可用作早期腎臟損傷的監測指標。本試驗也發現DM患者處于正常蛋白尿期時,尿沉渣中PCX的濃度已明顯上升,提示可以通過檢測尿PCX的濃度來監測早期糖尿病腎臟損傷。

3.3 足細胞脫落后,裸露的血管基底膜無法維持毛細血管袢血壓與腎小囊內靜水壓之間正常的壓力平衡,導致毛細血管擴張,直至與腎小囊壁層細胞發生黏連。同時,在正常生理情況下血漿白蛋白分子幾乎不會通過腎小球濾過屏障,而足細胞脫落后將導致腎小球濾過屏障發生改變,使得白蛋白更容易濾過,形成蛋白尿。因此檢測尿PCX還可以間接反映腎小球濾過膜的損傷[9]。本研究也顯示了尿PCX的表達水平隨著尿白蛋白排泄率的增加而顯著增加,尿PCX水平與尿白蛋白排泄水平呈顯著正相關(r=0.58,P<0.01),說明DN患者隨著腎臟損傷的不斷進展,大量的腎小球足細胞損傷脫落,導致腎小球濾過屏障失去生理作用,患者尿液中ALB與PCX水平也明顯增高,因此檢測尿PCX水平可用于DN患者腎損傷程度的評估。

綜上所述,PCX作為腎小球足細胞表面標志性蛋白,在DM患者早期尿沉渣中就會出現水平升高,因此檢測尿沉渣中PCX有利于診斷早期微小病變和局灶性節段性腎小球硬化[10],評估DN患者腎臟損傷程度,對于DN的早期防治具有重要的臨床意義。

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The expression of urine podocalyxin in patients with type 2 diabetes mellitus and its clinical significance

SHIHeng-chuan,LIUJun-heng,ZHUJian-yi.DepartmentofClinicalLaboratory,JiangsuProvinceGeriatricHospital,Nanjing210024,China

Objective To observe the changes and clinical significace of the urinary excretion of podocalyxin (PCX) in elderly type 2 diabetes mellitus (T2DM) patients with different diabetic nephropathy(DN) stages. Methods 136 elderly patients with T2DM and 50 healthy controls(control groups)were selected. Serum levels of creatinine (CREA) and urea (UREA) and urinary PCX, urinary albumin (UALB) were examined. All T2DM patients were divided into three subgroups according to urinary albumin (UALB): normal albuminuria group, microalbuminuria group and clinical albuminuria group. The urinary excretion of PCX and relative clinical data were compared between the four groups. Results Compared with the control group, the level of PCX was significantly increased in each elderly T2DM subgroup(P<0.01). The levels of PCX in different T2DM subgroups were statistically different(P<0.01). Correlation analysis showed that PCX was positively correlated with proteinuria (r=0.58,P<0.01). Conclusions The detection of urinary PCX is helpful in the early diagnosis of renal injury of T2DM and assessing the degree of renal impairment.

type 2 diabetes mellitus; nephrosis; podocalyxin; albuminuria

210024江蘇省南京市，江蘇省老年醫院檢驗科

R 587.1

A

10.3969/j.issn.1003-9198.2015.10.020

2014-09-25)