虎尾草黃酮類化學成分研究

郭利群， 張麗玲

(1.云南醫藥工業股份有限公司,云南 昆明 650106； 2.云南植物藥業有限公司,云南 昆明 650109)

·研究報告——生物質活性成分·

虎尾草黃酮類化學成分研究

郭利群1， 張麗玲2

(1.云南醫藥工業股份有限公司,云南 昆明 650106； 2.云南植物藥業有限公司,云南 昆明 650109)

對虎尾草藥材地上部分用70%乙醇提取后，以大孔吸附樹脂、聚酰胺和硅膠等分離材料進行分離和純化，從中分得10個黃酮類化合物，利用氫譜、碳譜、質譜和顏色反應等手段對其結構進行確認，10個化合物依次為槲皮素(Ⅰ)、山奈酚(Ⅱ)、異鼠李素(Ⅲ)、槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷(異槲皮苷)(Ⅳ)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(槲皮苷)(Ⅴ)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷(Ⅶ)、金絲桃苷(Ⅷ)、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷(Ⅸ)和蘆丁(Ⅹ)，其中化合物Ⅴ、Ⅵ為首次從該植物中分離得到,化合物Ⅲ、Ⅸ為首次從該屬植物中分離得到。

虎尾草；化學成分

虎尾草(LysimachiabarystachysBunge)，別名狼尾花、伸筋草(白族)，為報春花科虎尾草，多年生草本，主要生長在云南文山、洱源、麗江和香格里拉等地，海拔為2 100～2 700米的山坡、路旁、較潮濕處。具有活血散瘀、清熱消腫、調經、利尿等功效[1]，已作為藥材收載于2005年版《云南省中藥材標準》第一冊。化學成分研究結果表明，該植物主要含有黃酮類等化合物[2-5]。為了開發利用民族藥的資源，作者對云南香格里拉產虎尾草地上部分進行了化學成分研究，從其乙醇提取物中分得10個黃酮類化合物，并進行了結構鑒定。

1 實 驗

1.1 材料和儀器

所用樣品于 2012年8月采自云南省香格里拉維西縣，海拔2 650米,原植物經云南省藥物研究所資源分類室高麗正高級工程師鑒定為虎尾草(LysimachiabarystachysBunge)。對照品為：槲皮素、山奈酚、鼠李糖、槲皮苷、金絲桃苷和蘆丁(中國食品藥品檢定研究院提供)。大孔吸附樹脂，西安藍深特種樹脂有限公司生產的LS-300B；薄層層析硅膠和柱層析硅膠，青島海洋化工廠；高效薄層板，Merck公司；聚酰胺粉(75～150 μm)，國藥集團化學試劑有限公司；羥丙基葡聚糖凝膠LH-20，GE Healthcare,瑞士，所用試劑均為分析純。X-4型顯微熔點測定儀,北京泰克儀器有限公司;Finnigan Mat 95質譜儀，德國Finnigan Mat公司；Q-TOF Micro LC-MS質譜儀，安捷倫科技;Bruker DRX-400 MHz核磁共振儀，德國 Bruker；核磁共振氫譜和碳譜由中科院昆明植物研究所測定(TMS為內標，CDCl3、DMSO-d6為溶劑)。

1.2 提取與分離

取虎尾草藥材地上部分5 kg，去除泥土后進行粗粉碎 ，用70%乙醇熱回流提取2次，按液料比10 ∶1(mL ∶g)加入溶劑 50 000 mL，回流2 h，合并兩次提取液，提取液回收乙醇后上聚酰胺柱，依次用水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇梯度洗脫，流速為15 mL/min。

薄層層析表明，70%乙醇提取物主要為黃酮類化學成分，分別將聚酰胺柱層析得到的不同乙醇濃度洗脫液與70%乙醇提取物進行薄層層析比較，黃酮類化學成分主要存在于30%、50%和70%乙醇洗脫物中。

2 結果與討論

2.1 化合物鑒定

化合物Ⅰ：黃色粉末狀結晶(甲醇)，m.p.309～310 ℃，HCl-Mg反應呈陽性，Molish反應陰性。 UVλmax257和372 nm，LC-ESIMS顯示相對分子質量為302。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.72(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.62(1H,dd,J=2.2,10.7 Hz,H-6′),6.87(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.17(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),12.47(1H,s,5-OH),12.45(1H,s,5-OH),10.76(1H,s,7-OH),9.56,9.35,9.27(each 1H,s,3,3′,4′-OH),上述數據與文獻[3]基本一致。薄層層析與槲皮素對照品在3個展開系統中Rf值一致并呈一個相同顏色的斑點，故鑒定為槲皮素(quercetin)。

化合物Ⅱ：黃色粉末狀結晶(甲醇)，m.p.277～279 ℃，HCl-Mg反應呈陽性,Molish反應陰性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為286,UVλmax265和367 nm。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：8.06(2H,d,J=9.3 Hz,H-2′,H-6′),6.88(2H,J=9.3 Hz,H-3′,H-5′),6.37(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.15(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),12.08(1H,s,5-OH)，9.72(1H,s,7-OH)，9.45,9.02(each 1H,s,3,4′-OH)，上述波譜數據與文獻[1-3,6-7]基本一致。薄層層析與山奈酚對照品在2個展開系統中Rf值一致并呈一個相同顏色的斑點，故鑒定為山奈酚(kaempferol)。

化合物Ⅲ：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish反應陰性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為316。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.72(1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，6.87 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，8.35(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，7.41(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，8.22(1H，d，J=8.4，1.9 Hz，H-6′)，3.87 (OMe)。13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:148.3(C-2)，137.5(C-3)，177.1(C-4)，157.5(C-5)，99.6(C-6)，164.6(C-7)，94.1(C-8)，162.6 (C-9)，104.3 (C-10)，123.2 (C-1′)，116.3(C-2′)，147.7 (C-3′)，149.1 (C-4′)，112.1(C-5′)，123.1(C-6′)，56.5(OMe)，以上數據與文獻[7]報道的異鼠李素數據基本一致，故化合物Ⅲ鑒定為異鼠李素(isorhamnetin)。

化合物 Ⅳ：淺黃色針狀結晶(甲醇)，m.p.231～232 ℃，HCL-Mg反應呈紅色，Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為464，UVλmax257和359 nm。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.70(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.58(1H,dd,J=10.8,2.3 Hz,H-6′),6.86(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.39(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.20(1H,d,J=1.8 Hz,H-6),5.36(1H,d,J=7.4 Hz,葡萄糖H-1，β構型),上述波譜數據與文獻[8]基本一致。化合物Ⅳ用5%硫酸液水解得黃色針晶，熔點308～309 ℃，紙層析和薄層層析與槲皮素對照品Rf值一致，糖溶液薄層層析與葡萄糖Rf值一致，化合物Ⅲ紫外帶Ⅰ與苷元槲皮素比較，紫移10 nm，鋯—檸檬酸反應陰性，指示糖連接在3位羥基上。綜上結果證明化合物Ⅳ為槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷(異槲皮苷，isoquercetin)。

化合物Ⅴ：淡黃色針狀結晶(甲醇)，m.p.181～182 ℃，HCl-Mg反應呈紅色，Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為447，UVλmax257和359 nm。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：12.46(1H,s,5-OH),10.76(1H,s,7-OH),9.56(1H,s,4′-OH),9.26(1H,s,3′-OH),7.21(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′)，7.18，(1H,dd,J=10.5,2.1Hz,H-6′),6.78(1H,d,J=8.1Hz,H-5′),6.23(1H,d,J=1.8 Hz,H-8),6.06(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),2.50～5.25(m，8H,糖上質子和糖上羥基質子),上述波譜數據與文獻[8-9]基本一致。化合物Ⅴ用5%硫酸液水解得黃色針晶，熔點308～310 ℃，紙層析和薄層層析與槲皮素對照品Rf值一致，糖溶液薄層層析顯示一個糖的色斑，與鼠李糖的Rf值一致,取化合物Ⅴ與槲皮苷標準品進行薄層層析對照，二者的Rf值一致，二者相混后熔點不下降。根據以上實驗結果和數據，化合物Ⅴ確定為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷，即槲皮苷(quercitrin)。

化合物Ⅵ：淡黃色針狀結晶(甲醇)，m.p.169～171 ℃，HCl-Mg反應呈紅色，Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為448，UVλmax266和351 nm。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：12.44(1H,d,J=2.0 Hz,5-OH),8.12(2H,dd,J=9.1，2.1 Hz,H-2′，H-6′),6.98(2H,J=9.3 Hz,H-3′,H-5′),6.43(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.22(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),5.17(1H,d,J=7.8 Hz,葡萄糖H-1)，3.07～3.80(m,糖上質子和糖上羥基質子)。13C NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:156.3(C-2)，132.8(C-3)，176.8(C-4)，161.7(C-5)，98.7(C-6),165.1(C-7),93.3(C-8),156.4(C-9),103.1(C-10),121.9 (C-1′),130.1(C-2′，C-6′),115.8(C-3′，C-5′)，159.3(C-4′),101.5(C-1″)，73.6 (C-2″)，75.5 (C-3″)，69.1 (C-4″),77.2(C-5″)，61.8(C-6″)，其波譜數據與文獻[7-9]基本一致。根據以上試驗結果和波譜數據，化合物Ⅵ確定為山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucoside)。

化合物Ⅶ：淡黃色針狀結晶(甲醇)，m.p.169～171 ℃，HCl-Mg反應呈紅色，Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為448，UVλmax266和351 nm。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：12.44(1H,d,J=2.0 Hz,5-OH),8.06(2H,d,J=9.1 Hz,H-2′,H-6′),6.88(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,H-5′),6.41(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.22(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),5.27(1H,d,J=7.8 Hz,H-1″)，3.07～3.80(m,糖上質子和糖上羥基質子)。13C NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:157.3(C-2)，133.8(C-3)，178.8(C-4)，161.7(C-5)，98.7(C-6),165.1(C-7),93.3(C-8),156.4(C-9),103.8(C-10),121.9 (C-1′),130.9(C-2′，C-6′),114.8(C-3′，C-5′)，159.9(C-4′),103.5(C-1″)，71.6 (C-2″)，73.5 (C-3″)，69.1 (C-4″),76.2(C-5″)，60.8(C-6″)，其波譜數據與文獻[7]基本一致。根據以上實驗結果和波譜數據，化合物Ⅶ確定為山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷(kaempferol-3-O-β-D-galactoside)。

化合物Ⅷ：淡黃色針狀結晶，m.p.225～227 ℃ ，HCl-Mg反應呈紅色，Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為464，UVλmax257和359 nm。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.62 (1H，s，5-OH),10.88(1H，s，7-OH),9.75(1H，s，3′-OH),9.22 (1H，s，4′-OH),7.67(1H，d，J=8.4 Hz，H-6′),7.52(1H，s，H-2′),6.80 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.37 (1H，s，H-8)，6.17 (1H，s，H-6),5.37 (1H，d，J=8.2 Hz，葡萄糖端基H，β構型),3.01～3.64(6H，m，葡萄糖質子)。13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:156.4 (C-2)，133.5 (C-3)，177.6(C-4)，161.4(C-5)，98.9 (C-6)，164.8(C-7)，93.8 (C-8)，156.6 (C-9)，103.9 (C-10)，121.3 (C-1′)，115.1 (C-2′)，144.9 (C-3′)，148.4 (C-4′)，115.8 (C-5′)，122.1 (C-6′),102.1 (C-1″)，75.9 (C-2″)，73.6 (C-3″),71.5 (C-4″)，67.9 (C-5″)，60.6(C-6″),上述波譜數據與文獻[8-10]基本一致，取化合物Ⅷ與金絲桃苷標準品進行薄層層析對照，二者的Rf值一致，二者相混后熔點不下降。該化合物鑒定為槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(金絲桃苷，hyperoside)。

化合物Ⅸ：淡黃色針狀結晶(甲醇)，m.p.169～170 ℃，HCl-Mg反應呈紅色，Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為624，UVλmax253、 266和358 nm。化合物Ⅸ用5%硫酸液水解后顯示兩個糖的色斑，其Rf值分別與葡萄糖和鼠李糖對應，取水解后的苷元與異鼠李素做薄層層析對照，二者顯示相同的Rf值，二者相混熔點不下降。鋯-檸檬酸反應顯陰性，指示糖連接在3位羥基上。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:8.03(d,J=2.1Hz,H-2′),7.59(dd,J=1.8,10.2 Hz,H-6′),6.90(d,J=2.9 Hz,11.4 Hz,H-5′),6.40(d,J=2.1 Hz,H-8),6.20(d,J=2.1Hz,H-6),5.24(d,J=7.5 Hz,H-1″),4.52(d,J=1.5 Hz,H-1),3.96(3′-OMe),3.20～4.00(m,糖質子),1.15(4H,d,J=2.7 Hz,H-6)。13C NMR(125 MHz ，DMSO-d6)δ:156.51(C-2)，133.0(C-3)，176.72(C-4)，160.79(C-5)，99.24(C-6)，164.0(C-7)，93.95(C-8)，156.20(C-9)，103.4(C-10)，121.02(C-1′)，115.06(C-2′),149.35(C-3′),146.90(C-4′)，113.44(C-5′)，121.83(C-6′)，55.84(OCH3)，101.4(C-1，葡萄糖)，74.3(C-2，葡萄糖)，76.7(C-3，葡萄糖)，70.8(C-4，葡萄糖)，76.0(C-5，葡萄糖)，66.9(C-6，葡萄糖)，100.7(C-1，鼠李糖)，70.3(C-2，鼠李糖)，70.4(C-3，鼠李糖)，72.1(C-4，鼠李糖)，68.1(C-5，鼠李糖)，17.5(C-6，鼠李糖)，上述波譜數據與文獻[9-11]基本一致。綜上所述，化合物Ⅸ鑒定為異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷(isorhamnetin-3-O-β-D-rutinoside)。

化合物Ⅹ：黃色粉末，m.p.179～181 ℃ ，易溶于甲醇，HCl-Mg反應呈紅色，三氯化鋁反應呈黃色熒光,Molish反應陽性。LC-ESIMS顯示相對分子質量為610，UVλmax257和361 nm。 鹽酸鎂粉反應呈陽性。薄層色譜分析在3種不同的展開系統中與蘆丁對照品Rf值一致，與對照品混合熔點不下降,化合物Ⅹ鑒定為蘆丁 (rutin)。

2.2 化合物結構

1.2節分離得到的化合物Ⅰ～Ⅹ分別通過顏色反應、與對照品進行LC對照分析、LC-ESIMS、1H NMR、13C NMR等分析方法進行了結構鑒定。

結構式為：

3 結 論

從虎尾草(地上部分)的乙醇提取物中分離得到了10個黃酮類化合物，其結構鑒定結果依次為槲皮素(Ⅰ)、山奈酚(Ⅱ)、異鼠李素(Ⅲ)、槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷(異槲皮苷)(Ⅳ)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(槲皮苷)(Ⅴ)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷(Ⅶ)、金絲桃苷(Ⅷ)、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷(Ⅸ)和蘆丁(Ⅹ)，其中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷為首次從該植物中分離得到，化合物異鼠李素、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷為首次從該屬植物中分離得到的化合物。

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Chemical Constituents of Flavonoids fromLysimachiaBarystachysBunge

GUO Li-qun1, ZHANG Li-ling2

(1.Yunnan Pharmaceutical Industrial Co.,Ltd., Kunming 650106, China； 2.Yunnan Phytopharmaceutical Co.,Ltd., Kunming 650109, China)

Ten compounds were extracted by 70%ethanol and then isolated with silica gel and polyamide chromatography from the aerial parts ofLysimachiabarystachysBunge.Their structures were determined by spectral analysis and chemical evidence.They were identified as quercetin(Ⅰ),kaempferol(Ⅱ),isorhamnetin(Ⅲ),quercetin-3-O-β-D-glucoside(Ⅳ),quercitrin(Ⅴ),kaempferol-3-O-β-D-glucoside (Ⅵ)，kaempferol-3-O-β-D-galactoside(Ⅶ)，hyperoside(Ⅷ)，isorhamnetin-3-O-β-D-rutinoside(Ⅸ)and rutin (Ⅹ).Compounds Ⅴ，Ⅵ were isolated from this plant and compoundsⅢ,Ⅸ were isolated from this genus for the first time.

LysimachiabarystachysBunge；chemical composition

聯系地址：210042 南京市鎖金五村16號中國林科院林產化學工業研究所電 話：(025)85482449，85482533聯系人：譚衛紅傳 真：(025)85482450

10.3969/j.issn.1673-5854.2015.04.008

2015-04-16

郭利群(1960—)，女，云南昆明人，高級工程師，主要從事中藥、天然藥物新產品研發及質量控制;E-mail:guoliqun92@163.com。

TQ35

A

1673-5854(2015)04-0040-05