游離二氧化硅對大鼠循環成纖維細胞mRNA 表達的實驗

李舉

(四川科技職工大學職業安全健康與環保工程系 四川 成都 610101)

1.材料

8 ～13 周雄性Sprague - Dawley(SD)健康大鼠30 只，游離SiO2 標準品。

2.方法

檢測循環成纖維細胞總mRNA 純度和含量提取的RNA 2μl，滴加DEPC 水200 μl，用分光光度計測定260 納米(A260)及280 納米(A280)吸光度值，如果A260 與A280 的比值位于1.8 ～2.0，表示得到比較高的RNA 純度，此時的反應模板合適。在260 納米的吸光度值等于1mRNA 含有40 μg/ml，mRNA 濃度(μg/μl)=260 納米吸光值×40 μg/ml ×稀釋倍數×0.001，mRNA 總含量(μg)=mRNA 濃度×總體積(μl)。

3.結果

不加上清為對照，和對照(OD 值等于0.397)比較，0 濃度組(OD 值是0.398)差異無統計學意義(P ＞0.05);20、40、60、80 μg/ml 濃度組(OD值分別是0.505、0.667、0.898、0.903)差異有統計學意義(P ＜0.05)，0(OD 值是0.398)到80 μg/ml 濃度組(OD 值是0.903)表達逐漸增加;60 μg/ml(OD 值是0.898)和80 μg/ml 濃度組(OD 值是0.903)比較，差異無統計學意義(P ＞0.05)。

4.討論

濃度不同的二氧化硅實驗提示實驗組cFB 對膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動蛋白mRNA 的表達高于對照組，隨著二氧化硅濃度增加而增加，暗示二氧化硅粉塵可以促進cFB 對膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動蛋白mRNA 表達水平增加，0 濃度組和對照向接近，提示沒有經二氧化硅刺激上清不能促進cFB 對膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動蛋白mRNA 表達水平增加。Heppleston 等建立由巨噬細胞和FB 組成的矽肺模型實驗。他們認為二氧化硅粉塵作用于巨噬細胞能夠表達致成纖維細胞膠原合成因子［1］。在矽肺發病機理中徐勇認為矽塵和人肺成纖維細胞共同培養時，細胞能夠吞噬矽塵，細胞內白介素1 的mRNA 水平增加［2］，彭歡等用白介素1 刺激人外周血cFB 時發現白介素1 促進cFB 增殖，促使分泌致炎因子，促進遷移［3-5］。這和本實驗有類似。60 μg/ml 與80 μg/ml 濃度組的mRNA相比，差異無統計學意義。提示二氧化硅濃度增加時，接受刺激后cFB 對膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動蛋白的表達水平增加不太明顯，這是因為較高濃度的二氧化硅粉塵對cFB 有毒害作用［6］。

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［2］ 徐勇，彭茜.矽肺發病機制研究進展［J］.2009，24:33 -34

［3］ 彭歡，胡志前，姚厚山，等.人循環成纖維細胞的體外培養和初步鑒定［J］.第二軍醫大學學報，2009，30(4):460 -462

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［5］ Silvia Pascual，Isabel Urrutia，Aitor Ballaz，et al.Prevalence of Silicosis in a Marble Factory After Exposure to Quartz Conglomerates［J］.Arch Bronconeumol，2011，47(1):50 -51

［6］ Cristina Martinez，Amador Prieto，Laura Garcia，et al.Silicosis:a Disease with an Active Present［J］.Arch Bronconeumol，2010，46(2):97-100