尿液有形成分染色技術(shù)的研究及應(yīng)用進(jìn)展

黃明雄

(廣西南寧市上林縣人民醫(yī)院 廣西 南寧 530500)

尿液有形成分檢查又被稱為"尿沉渣檢查"或"體外腎活檢"，其臨床作用是幫助醫(yī)生對患者的泌尿系統(tǒng)各部位變化，泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病定位診斷、鑒別診斷以及預(yù)后判斷有進(jìn)一步的了解[1]。傳統(tǒng)的尿液理化檢查的漏診、誤診率相對較高，而尿液有形成分檢查可以借助染色技術(shù)將尿液中各種有形成分分別染成不同的顏色，使其清晰地展現(xiàn)某些細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)，使尿液中細(xì)胞、管型等更容易區(qū)分，有助于檢驗(yàn)醫(yī)生及臨床醫(yī)生更好地了解尿有形成分的形態(tài)學(xué)變化，有關(guān)提高了對尿中有形成分判斷的準(zhǔn)確性。

1.臨床應(yīng)用

現(xiàn)階段尿液有形成分染色在臨床中的主要應(yīng)用范圍有:(1)鄰近生殖系統(tǒng)疾病的波及(2)抗生素等藥物對腎臟造成的損傷(3)汞、砷、鉍等重金屬中毒對腎臟造成的損傷(4)苯丙酮酸尿癥等[2]遺傳代謝性疾病的篩查(5)對腦疾病，自身免疫疾病，循環(huán)系統(tǒng)疾病，代謝性疾病(肝、膽、胰)以及變態(tài)反應(yīng)病的診治(6)對腫瘤、炎癥、外傷、結(jié)石、腎移植術(shù)后觀察等的診斷與治療監(jiān)測參考價(jià)值(7)無癥狀腎臟疾病的篩查作用，常用于對弱勢人群(嬰幼兒、婦女、老年人)的健康檢查以及新兵與學(xué)生的健康體檢等。

2.臨床價(jià)值

2.1 泌尿系統(tǒng)疾病

(1)白細(xì)胞:如果尿液中的白細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)異常升高則考慮泌尿系感染(且經(jīng)常與細(xì)菌尿并存)(2)尿路出血部位判斷:通過尿液有形成分染色技術(shù)可以對尿液中的紅細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行動態(tài)觀察，有助于幫助檢驗(yàn)醫(yī)生判斷尿路出血的部位是腎臟還下尿路(3)判斷損傷部位:通過觀察各種類型的尿路上皮細(xì)胞的數(shù)量變化可以增加對損傷部位判斷的準(zhǔn)確性(4)泌尿道腫瘤:通過觀察尿液中的腫瘤細(xì)胞有助于對泌尿道腫瘤進(jìn)行篩查和診斷(5)菌群失調(diào)或污染:如果在新鮮尿液中檢出霉菌則提示機(jī)體存在菌群失調(diào)或污染(6)結(jié)石:如果尿液中發(fā)現(xiàn)代謝性氨基酸、膽固醇、藥物結(jié)晶等結(jié)晶成分，由有助于對結(jié)石病、藥物代謝紊亂的診斷與鑒別。

2.2 腎臟疾病

如果尿液有形成分染色檢查中發(fā)現(xiàn)尿管型增多，尤其是當(dāng)出現(xiàn)顆粒管型、蠟樣管型、細(xì)胞管型、寬大管型等，則預(yù)示有發(fā)生腎盂腎炎、腎小球腎炎、腎淀粉樣變性、腎小管壞死、腎小管(遠(yuǎn)端)集合管病變甚至腎功能衰竭等腎臟疾病的風(fēng)險(xiǎn)。

(1)腎病綜合征[3]:尿液中有少量紅細(xì)胞、白細(xì)胞，透明管型增多，出現(xiàn)顆粒管型、各種細(xì)胞管型，慢性期可出現(xiàn)脂肪管型、腎衰竭(寬大)管型、蠟樣管型等，尿潛血陽性，尿蛋白++～+++;

(2)腎盂腎炎:尿液中白細(xì)胞明顯增多、成團(tuán)，并可見白細(xì)胞管型、細(xì)菌尿及少量紅細(xì)胞，亞硝酸鹽陽性，尿蛋白微量～+;

(3)急性腎炎:尿液中有大量紅細(xì)胞、紅細(xì)胞管型，異型紅細(xì)胞異常增多，尿潛血陽性，尿蛋白+～++;

(4)急性腎小管壞死:尿液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞異常增多，除顆粒管型外還可見腎小管上皮細(xì)胞管型增多，尿蛋白可呈陰性;

(5)間質(zhì)性腎炎:尿中嗜酸粒細(xì)胞增多提示變態(tài)反應(yīng)或由抗生素?fù)p害;

3.發(fā)展前景

以往尿液有形成分染色技術(shù)主要有單一染色、復(fù)合染色等，隨著染色技術(shù)的不斷改良目前臨床中又相繼出現(xiàn)了熒光染色法、細(xì)胞化學(xué)染色法、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法及紡織染料染色法等新的染色技術(shù)，不同的染色技術(shù)都可以為泌尿系統(tǒng)疾病的診斷、鑒別診斷、相關(guān)預(yù)后判斷及藥物治療監(jiān)測等有重要價(jià)值。

3.1 加大篩選力度

《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(以下簡稱"操作規(guī)程")[4]中將尿有形成分定量檢查推薦法和尿有形成分離心沉淀檢查法列為規(guī)范化尿沉渣檢查項(xiàng)目，但是兩種方法均為非染色技術(shù)，對尿有形成分的檢驗(yàn)質(zhì)量及對尿有形成分的識別能力較差，漏檢與誤診率較高。"操作規(guī)程"中所提到的活體染色方法除了S－M法和Stemheimer法外，還有甲基藍(lán)－伊紅染色法、阿利新藍(lán)一中性紅染色法、紡織染料堿性品藍(lán)染色法等，不同的染色方法的染料質(zhì)量、染液成本、染色時(shí)間、沉渣干擾、背景顏色、保存期限及染色效果等都各有優(yōu)缺點(diǎn)，在臨床中要通過不斷的對比研究來選擇合適的染色法用于尿有形成分常規(guī)染色中，以提高尿有形成分鏡檢的準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)。

3.2 單一染色技術(shù)

以往尿液有形成分染色技術(shù)主要有單一染色、復(fù)合染色等，隨著染色技術(shù)的不斷改良目前臨床中又相繼出現(xiàn)了熒光染色法、細(xì)胞化學(xué)染色法、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法及紡織染料染色法等新的染色技術(shù)，不同的染色技術(shù)都可以為泌尿系統(tǒng)疾病的診斷、鑒別診斷、相關(guān)預(yù)后判斷及藥物治療監(jiān)測等有重要價(jià)值。

(1)單一染色:單一染色法是較早應(yīng)用于臨床的體液形態(tài)檢查手段之一，具有試劑單純、染料易得、染色簡便及檢驗(yàn)結(jié)果迅速等優(yōu)勢，國內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)可將O.5%甲苯胺藍(lán)作為尿有形成分染色觀察的常規(guī)染色劑，因?yàn)槠鋵?xì)胞核結(jié)構(gòu)染色清晰度非常高。但是，單一染色法對胞核和胞質(zhì)分辨不清，而且著色單一，成為其在臨床中的發(fā)展的局限因素。目前，我國臨床中多采用國產(chǎn)紡織染料堿性品藍(lán)染尿中有形成分[5]，使1種染料可以分別顯示紅、藍(lán)2種顏色，為單一染色技術(shù)開辟了新的方向。

(2)細(xì)胞化學(xué)染色:通過尿有形成分鏡檢法和尿有形成分染色鏡檢法雖然可以對尿中細(xì)胞、結(jié)晶、真菌、管型和滴蟲等進(jìn)行識別，但卻不能分析細(xì)胞和管型中的化學(xué)成分，因此對尿有形成分中白細(xì)胞和上皮細(xì)胞分類、管型鑒別、脂肪類成分確定以及含鐵血黃素顆粒的識別等尚無明顯效果，這就需要細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。細(xì)胞化學(xué)染色又分為直接染色與固定后染色2種，脂肪管型染色就是常用的直接染色方法，在載玻片上先滴尿沉渣1滴，再加蘇丹Ⅲ飽和乙醇液l滴，混合后即刻鏡檢，操作極為簡便;含鐵血黃素染色則屬于固定后染色，在尿沉渣中加入2%亞鐵氰化鉀液+3%鹽酸液，混勻10 min后滴于載玻片上加蓋玻片后進(jìn)行鏡檢。細(xì)胞化學(xué)染色對尿有形成分鑒別具有重要價(jià)值，具有不可替代的作用[6－7]。

(3)免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù):近年來，大量國內(nèi)外學(xué)者在腎移植排斥反應(yīng)尿中淋巴細(xì)胞檢測、血小板管型鑒別及管型內(nèi)沉積蛋白質(zhì)的性質(zhì)檢測中采用單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)，通過熒光染色法或酶免疫化學(xué)染色法對尿有形成分進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該技術(shù)可以更加清晰地識別尿內(nèi)細(xì)胞和管型，對鑒別尿有形成分具有實(shí)用價(jià)值[8]。

在今后的工作中，我們要進(jìn)一步研究并改善尿液有形成分染色技術(shù)在臨床中的應(yīng)用，開展血尿、糖尿病腎病、狼瘡性腎病、腎結(jié)石、變態(tài)反應(yīng)性腎病等疾病的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)，并針對地方人群觀察不同性別、不同年齡人群(老年人及新生兒)的尿液有形成分特點(diǎn);同時(shí)開展多種實(shí)驗(yàn)方法聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)研究、異常紅細(xì)胞形態(tài)的鑒別及分類識別等，以推進(jìn)尿液有形成分檢測在臨床中的應(yīng)用。

[1] European confederation of Laboratory Medicine.European urinalysis guideline[J].Scand JClin Lab Invest suppl，2012，23(6):85 － 86.

[2] 李順義，魏宏蓮.尿液有形成分染色技術(shù)的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，7(32):612－616.

[3] 趙捷，岳云升，郝冀洪，等.尿液有形成分新染色方法及其臨床應(yīng)用研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32(4):639 －641.

[4] Clinical and Laboratory Standards Institute.Urillalysis and couection，transponalion and preservation of Urin specimens[J].Approved Guideline.Gpl6A.Wayne，Pennsylvania，USA:CLSI，2010，11(6):6 －13.

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[6] 叢玉隆，馬駿龍.尿液有形成分鏡檢與自動化檢測方法學(xué)利弊和互補(bǔ)分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，9(11):609－611.

[7] 馬曉露，劉艷，李艷蓮.尿液有形成分顯微鏡檢查復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的探討[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，3(7):339－342.

[8] 李順義，魏宏蓮.尿液有形成分染色技術(shù)的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，5(12):612－615.