UPLC-PDA法動(dòng)態(tài)測(cè)定白花延齡草中二種化學(xué)成分

王玉方，趙卉，金春愛，羅婧，劉繼永

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長春 130112)

延齡草為百合科(Liliaceae)延齡草屬(Trillium)植物延齡草(TrilliumtschonoskiiMaxim.)的干燥根、根莖及果實(shí)，又名頭頂一顆珠、芋兒七、獅兒七等，為土家族七藥之一。延齡草屬植物全世界共有約50種，我國有3種，即延齡草(T.tschonoskiiMaxim.)、白花延齡草(T.kamtschaticumPall.)和西藏延齡草(T.govanianumWall.)[1，2]。延齡草以干燥根和根莖、果實(shí)入藥，具有降壓、陣痛、抗腫瘤功效。延齡草屬植物中次生代謝產(chǎn)物以皂苷為主[3，4]，化學(xué)成分研究多針對(duì)根、根莖。為科學(xué)評(píng)價(jià)延齡草不同部位藥用價(jià)值，本試驗(yàn)采用重樓皂苷Ⅵ(Polyphyllin Ⅵ)和偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷為標(biāo)準(zhǔn)性成分，采用超高效液相色譜-光電二極管陣列檢測(cè)器(HPLC-PDA)法對(duì)不同采收期白花延齡草根及莖葉中2種化合物含量進(jìn)行測(cè)定，以確定白花延齡草最佳采收期。

1 儀器、材料與試劑

1.1 儀器

Acquity UPLC H-Class(美國Waters公司)；XS205電子天平(瑞士Mettler toledo公司)；Milli-Q Advantage A10超純水器(美國Millipore公司)；YQ1001C超聲波清洗機(jī)(上海易凈超聲波儀器有限公司)。

1.2 材料與試劑

1.2.1材料白花延齡草全株采自吉林省左家延齡草馴化栽培試驗(yàn)田。采收時(shí)期：樣品1：7月24日；樣品2：8月4日；樣品3：8月14日。

1.2.2試劑重樓皂苷Ⅵ(純度≥98%)、偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(純度≥98%，農(nóng)業(yè)部特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物及產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心制，以下簡(jiǎn)稱為“YLC”)；乙腈、甲醇(HPLC級(jí)，F(xiàn)isher公司)；甲醇(AR，北京化工廠)。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)；檢測(cè)器：PDA；流動(dòng)相：乙腈(A)-水(B)；流速：0.4mL/min；線性梯度洗脫：0min～5min，40%A～47%A；柱溫：35℃；檢測(cè)波長203nm；進(jìn)樣量：2μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

稱取重樓皂苷Ⅵ 10.02mg、YLC 10.04mg，以HPLC級(jí)甲醇分別溶解并定容至50mL容量瓶中，配制成含2種目標(biāo)物、濃度各為0.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 供試樣品溶液的制備

根莖粉末0.1000g，以分析純甲醇25mL浸泡過夜后超聲提取1h，以0.2μm有機(jī)系濾膜超濾后待測(cè)；稱取莖葉粉末2.000g，以分析純甲醇25mL浸泡過夜后超聲提取1h，以0.2μm有機(jī)系濾膜超濾后待測(cè)。

2.4 線性關(guān)系

2.5 精密度

取0.1mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣6次，重樓皂苷Ⅵ和YLC峰高RSD值分別為0.56%和0.47%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性

根莖、莖葉粉末各6份，按“2.3”項(xiàng)處理后測(cè)定，重樓皂苷Ⅵ和YLC峰高RSD值分別為0.91%和1.02%，表明重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性

按“2.3”項(xiàng)制備的根莖和莖葉的樣品溶液間隔4h測(cè)定，測(cè)定7次，重樓皂苷Ⅵ和YLC峰高RSD值分別為1.26%和1.06%，表明4h之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率

根莖和莖葉按“2.3”方法各稱樣3份，根莖各加入0.1mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，各加甲醇15mL；莖葉各加0.05mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL，各加甲醇24mL，按“2.3”項(xiàng)處理，根莖和莖葉的重樓皂苷Ⅵ、YLC平均回收率見表1。

表1不同部位2種成分加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果

Table 1 The recovery of two components from different positions (%)

續(xù)表1

成 分Component部 位Position樣 品Sample添加量Addition測(cè)得值Measuredvalue回收率Recoveryrate平均回收率Averagerecovery相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSDYLC根 莖Rhizome1.1201.0002.130101.11.1201.0002.10098.01.1201.0002.120100.099.71.5莖 葉Stemleaves0.0490.0500.100101.00.0490.0500.09899.00.0490.0500.099100.0100.01.0

由表1可知，該方法具有較好的回收率。

2.9 樣品測(cè)定

3個(gè)采收期白花延齡草樣品根莖和莖葉的重樓皂苷Ⅵ、YLC含量測(cè)定結(jié)果見表2。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的UPLC色譜圖分別見圖1、圖2、圖3。根莖和莖葉中2種成分動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)見圖4和圖5。

表2不同采收期的根莖和莖葉中2種成分的含量

Table 2 The content of two components from rhizome and stem leaves at different harvest time

1.YLC；2.重樓皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

3 結(jié)論

由表2、圖4和圖5可知，不同時(shí)期采集的3個(gè)樣品中，根莖中2種成分含量隨采收期的延后呈上升趨勢(shì)，其含量分別為重樓皂苷Ⅵ：1.16%、1.19%、1.35%；YLC：0.910%、0.970%、1.120。莖葉中2種成分含量呈下降趨勢(shì)，分別為重樓皂苷Ⅵ：0.013%、0.019%、0.002%；YLC：0.064%、0.049%、0.012%。因此，白花延齡草栽培過程中若以重樓皂苷Ⅵ和偏諾皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，則其適宜采收期為8月中旬。

1.YLC；2.重樓皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

1.YLC；2.重樓皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

1.YLC；2.重樓皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

Fig.4ContentdynamiccurvesofpolyphyllinⅥandYLCintherhizome

1.YLC；2.重樓皂苷Ⅵ 1.YLC;2.polyphyllin Ⅵ

Fig.5ContentdynamiccurvesofpolyphyllinⅥandYLCinthestemleaves

[1]謝萬宗.全國中草藥匯編:上冊(cè)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:225-226.

[2]宋立人,洪恂,丁緒亮,等.現(xiàn)代中藥學(xué)大詞典[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:787-788．

[3]張忠立,左月明,熊師華,等.延齡草根及根莖的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2011,9(42):1689-1691．

[4]Nohara T,Miyahara K,KawasakiT.Steroid saponins and sapogenins of underground parts of trillium kamtschaticum PALL.Ⅱ.Pennogenin-and Kryptogenin 3-O-Glycosides and related compounds[J].Chem Pharm Bull,1975,23(4):872-885.