柴石解郁片中黃芪甲苷HPLC-ELSD測定方法的建立及評(píng)價(jià)

楊美林，仲崇琳，徐軍

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春 130012)

柴石解郁片是由夏枯草、丹參、防己等十二味中藥經(jīng)一定的工藝制成的膠囊劑。該藥解郁安神，用于治療抑郁癥(肝郁氣滯型)的患者。為了更好地控制柴石解郁片的質(zhì)量，本試驗(yàn)建立了HPLC-ELSD法測定柴石解郁片中黃芪甲苷含量的方法[1～5]。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP高效液相色譜儀(日本島津公司)；N2010色譜數(shù)據(jù)工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)；Alltech2000ES型蒸發(fā)光散色器(美國GRACE公司)。

柴石解郁片(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制，批號(hào)：130301、130302、130303)；黃芪甲苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所)；乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μ)；流動(dòng)相：乙腈-水(32∶68)；流速：1.0mL/min；檢測：蒸發(fā)光散色器；漂移管溫度：105℃；霧化氣體：氮?dú)猓涣魉伲?.0L/min；柱溫：室溫。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.25mg/mL的黃芪甲苷對(duì)照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，研細(xì)，精密稱取6g，置具塞錐形瓶內(nèi)，加入甲醇50mL溶解，密塞，超聲處理30min，放冷后過濾，取續(xù)濾液25mL蒸干，殘?jiān)铀?0mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40mL，合并正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

分別吸取“2.2”、“2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各20μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜(圖1)。

A.對(duì)照品HPLC圖譜；B.樣品HPLC圖譜；C.陰性對(duì)照品HPLC圖譜

由圖1可知，陰性對(duì)照品溶液在黃芪甲苷峰位置處無吸收峰，黃芪甲苷峰與其他成分基線分離。

2.5 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定其峰面積積分值。以峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)(Y)為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=6327.62+2 719 018.63X，r=0.9997。結(jié)果表明，黃芪甲苷線性范圍為1.024μg～5.12μg。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，得其色譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.60%，表明其精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，每隔3h進(jìn)樣1次，測定峰面積，得其色譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.78%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下平行測定5次，測得黃芪甲苷含量分別為0.0949mg/片、0.0963mg/片、0.0947mg/片、0.0948mg/片、0.0965mg/片，平均0.0954mg/片，RSD=0.92%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量黃芪甲苷對(duì)照品溶液，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備回收率樣品，測定黃芪甲苷含量并計(jì)算回收率，結(jié)果黃芪甲苷平均回收率為97.59%，RSD=0.92%，測定結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.10樣品含量測定

分別稱取3個(gè)批號(hào)的樣品，按“2.2”、“2.3”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品及供試品溶液，按上述色譜條件分別吸取對(duì)照品溶液5μL、15μL及供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

表1樣品含量測定結(jié)果

Table1Resultsofcontentdeterminationofsamples

批 號(hào)Batchnumber黃芪甲苷含量(mg/片)Astragalusglycosidescontent(mg/tablet)1303010.09541303020.09721303030.0961

3 討論

根據(jù)測定結(jié)果，柴石解郁片中黃芪甲苷的含量均不少于0.0954mg/片。本研究所用的測量柴石解郁片中黃芪甲苷的定量分析方法結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為控制該制劑質(zhì)量的手段之一。柴石解郁片中其它藥材成分含量的定量分析，有待于進(jìn)一步研究。

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