飼料中“瘦肉精”的檢測方法

楊金鳳 楊小燕 黑龍江省大慶市綠色農產品監測中心 163316

“瘦肉精”是一種白色或類似白色的結晶體粉末，無臭、味苦，化學性質穩定，一般燒煮加熱方法不能將其破壞，只有加熱到172℃時才能夠被分解。人吃了含有“瘦肉精”的肉制品后，不僅會影響到正常的生長發育，而且對心臟造成很大損害。急性中毒常表現為頭暈、嘔吐、腹痛、腹泄、肌肉震顫、心跳過速、呼吸困難和神經紊亂等癥狀，嚴重的會危及生命。下面將介紹幾種飼料中鹽酸克侖特羅（CLB）的檢測方法。

1 酶聯免疫吸附法（ELISA）

原理是抗原抗體反應。單克隆抗體既能與CLB 結合，又能與酶標記物相結合。當樣品中含有鹽酸克侖特羅時，它會與酶標記物競爭性地結合單抗上的結合位點，經過洗滌后沒有與單抗結合的酶標記物則被洗去。待加入基質和發色劑后，結合的酶標記物把無色的發色劑轉化為藍色的產物，顏色的深淺和樣品中鹽酸克侖特羅的濃度有關。加入終止后，藍色變為黃色，最后用酶標儀進行測定。

鹽酸克侖特羅的提取，即把粉碎后的飼料加入鹽酸溶液和雙蒸水均質，再經旋流、振蕩、離心后，轉移出上清液用氫氧化鈉調pH 值到7～9。離心，取上清液分析測試。分別按標準稀釋溶液，擺放樣品。加入標準品到指定微孔中，再加入酶標記物，用酶標板密封膠紙蓋住酶標板，渦旋混勻，在室溫下孵育1 小時。傾倒出孔中的液體，用緩沖劑清洗酶標板3 次。加入酶標底物到微孔中，室溫暗處孵育。反應孔中加入終止液，劇烈振蕩5 秒鐘。用酶標儀測定其吸光度值。

2 高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜-質譜法（GC-MS）

該方法的主要原理是用加有甲醇的稀酸溶液將飼料中的鹽酸克侖特羅鹽酸鹽溶出，溶液被堿化，經液相萃取和固相萃取凈化后，在高效液相色譜儀上分離測定，或經衍生后于氣相色譜-質譜儀上分離、檢測。稱取配合飼料5g（預混料和濃縮料則稱取2g)精確至0.0001g 于100mL 三角瓶中，加入提取液（濃度為0.5%偏磷酸：甲醇=80∶20）50mL，超聲提取15分鐘,每隔5 分鐘振搖1 次，取上層液于離心機內上4000rpm 離心10 分鐘。準確吸取上清液10.00mL 于150mL 分液漏斗中，同時滴加2mol/L 氫氧化鈉溶液，調pH 至11～12。溶液分別用30mL、25mL 乙醚萃取2次，使醚層過無水硫酸鈉干燥，用少許乙醚淋洗分液漏斗和無水硫酸鈉，并用乙醚定容至50mL。再準確吸取25.00mL 于50mL 燒杯中，低于50℃加熱塊或沙浴上蒸干，殘渣溶于2.00mL 0.02mol/L 鹽酸溶液，取1.00mL 置于預先已分別用1mL 甲醇和1mL 去離子水處理過的SPE 小柱內，控制其過柱速度不超過1mL/min，再分別用1mLSPE 淋洗液-1（含2%氨水的5%甲醇水溶液）和2-（含2%氨水的30%甲醇水溶液）進行充分淋洗，最后再用甲醇溶液進行洗脫，洗脫液置于70+5℃加熱塊或沙浴上，最后用氮氣吹干。向吹干的樣品中準確加入1.00～2.00mL 0.02mol/L 鹽酸，振搖、超聲，過0.45um 的濾膜，取上清液于高效液相色譜儀進行測定。氣相色譜-質譜法則于吹干的樣品中加入衍生劑BSTFA 50μL，渦旋混合后，置70+5℃烘箱中衍生反應30 分鐘。用氮氣吹干，加入甲苯100μL 混勻于氣質聯用儀進行測定。

3 液相色譜—串聯質譜法

原理是飼料經鹽酸-甲醇混合溶液提取、醋酸鉛沉淀蛋白后用固相萃取小柱凈化，洗脫液蒸干后用甲酸溶解，供液相色譜-串聯質譜儀進行檢測，采用外標法進行定量。稱取2g 試樣于50mL 離心管中，準確加入19mL 鹽酸甲醇提取液和飽和醋酸鉛溶液，充分振蕩20 分鐘、離心10 分鐘。固相萃取小柱用甲醇和水活化。取上清液5mL 進行過柱，再用水和甲醇淋洗，空氣抽干2 分鐘，用氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液旋轉蒸發至干，再用甲酸水溶液溶解，過濾膜后上機測定。

“瘦肉精” 是國家明令禁止在飼料和飼養過程中使用的獸藥，為此要從源頭抓起，加大飼料和養殖產品質量安全監督檢測力度，加強市場的監督抽查和監管力度。各相關部門按照職責分工，協調配合，形成合力，強化對生豬養殖、收購、販運、屠宰、集貿市場銷售及餐飲消費等關鍵環節的監督管理，共同做好“瘦肉精”監管工作。同時進一步加強輿論宣傳，通過各種媒介宣傳“瘦肉精”對人體的危害。