馬海治癱膠囊對局灶性腦缺血大鼠的作用

蒙麥俠 袁秋貞 張小麗 楊智峰 陳瑞明 范引科 姜姍姍 柴 焱 魯文靜

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

馬海治癱膠囊對局灶性腦缺血大鼠的作用

蒙麥俠 袁秋貞△張小麗 楊智峰 陳瑞明 范引科 姜姍姍 柴 焱 魯文靜

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

目的：評價(jià)馬海治癱膠囊(MHZTJN)對大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞的保護(hù)作用。方法：采用線栓法阻塞大鼠大腦中動(dòng)脈,建立局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ停ㄟ^神經(jīng)癥狀評分和傾斜板實(shí)驗(yàn)評價(jià)大鼠行為學(xué)的改變，TTC染色法觀察腦缺血范圍。結(jié)果：與模型組相比，MHZTJN中劑量和大劑量組神經(jīng)功能評分顯著降低，腦梗塞體積顯著降低，傾斜板停留時(shí)間顯著升高；大劑量組能顯著改善腦缺血引起的腦組織含水量增加，減輕側(cè)腦水腫程度。結(jié)論：MHZTJN顯著改善神經(jīng)功能癥狀和行為學(xué)障礙，顯著改善腦缺血引起的腦組織含水量增加，減輕側(cè)腦水腫程度，能顯著降低腦梗塞體積。

MHZTJN是我院多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、制馬錢子、水蛭、當(dāng)歸等藥味組成，治療腦中風(fēng)后遺癥具有較好的臨床效果。前期我們也進(jìn)行了一些藥理實(shí)驗(yàn)研究，為了進(jìn)一步支持臨床應(yīng)用，擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍，我們對其治療中風(fēng)后遺癥及其機(jī)理做了深入研究。

1 材 料

1.1 試 藥 MHZTJN，由本院制劑研究室提供，批號(hào)20120412，1g相當(dāng)于2.33g生藥材；腦心通膠囊(批號(hào)：20120307)。

1.2 試 劑 2，3，5-氯化三苯基四氮唑( 2，3，5-triphenyltetrazoli-umchloride，TTC) 。

1.3 動(dòng) 物 清潔級健康SD大鼠，體重在180～220g之間，雌雄兼用。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證：SCXK(陜)：2007-001。

2 方 法

2.1 動(dòng)物分組及給藥 受試動(dòng)物隨機(jī)分為6組：假手術(shù)組、模型組、MHZTJN給藥組大劑量0.4g/kg、中劑量0.2g/kg、小劑量0.1g/kg，陽性藥組(腦心通0.4g/kg)，各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥28d，假手術(shù)組及模型組給予等體積蒸餾水。第28天給藥lh后，除假手術(shù)組僅在麻醉狀態(tài)下分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，不予阻斷血流；其余各組均按照2.2所述方法建立大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞模型，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)死亡的大鼠均被廢棄[1]。

2.2 大腦中動(dòng)脈栓塞( MCAO) 模型的制備 模型組、陽性藥組、MHZTJN給藥組大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型參照文獻(xiàn)方法制備，假手術(shù)組大鼠只分離血管，不結(jié)扎及導(dǎo)入線栓[2]。

2.3 Bederson’s 法神經(jīng)行為學(xué)評分 各組動(dòng)物于腦缺血 48 h后進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評價(jià)，評分標(biāo)準(zhǔn)參照 Bederson 方法，觀察以下三方面行為學(xué)的改變：觀察前肢變化，將鼠尾提住離開操作臺(tái)約 1尺；觀察大鼠肢體力量，將其放于水平臺(tái)面，推動(dòng)其雙肩，比較阻抗力是否有差異；觀察大鼠行走狀態(tài)，將其置于平面上觀察。上述觀察項(xiàng)以3分為一個(gè)檔積分，共10分，分?jǐn)?shù)高則活動(dòng)力差。

2.4 傾斜板實(shí)驗(yàn) 設(shè)置長24cm、寬14cm的粗糙斜面，傾斜度為85°，將24h的缺血后大鼠放于糙面中央，記錄大鼠停留情況，如超過180s則記180s。

2.5 大鼠腦梗死范圍的測量 待上述行為學(xué)測定后，將大鼠處死(斷頭法)，并取腦組織后立即置于-20℃冰箱中，20min后置室溫環(huán)境，進(jìn)行小腦、嗅球和低位腦干的切除術(shù)，對大腦組織進(jìn)行2mm厚度的冠狀位切片，完成后立即將切片置于TTC溶液中染色，37℃避光、20min恒溫?fù)嵊瓌?dòng)頻率1次間隔5min。梗死腦組織因未染色呈白色，正常組織呈玫紅色。整齊排列腦切片并進(jìn)行掃描保存，應(yīng)用硫酸紙繪出梗死面積，稱重，計(jì)算腦切片的梗死面積乘以2 mm的切片厚度，即腦片的梗死體積[3]。

2.6 大鼠腦組織含水量的測定 將斷頭(術(shù)后12h完成)后的中間腦組織(前后各去除3mm)分為左右兩部分，吸干表面水分(濾紙吸)，稱取兩部分的濕重。之后將腦組織放于105℃下，烘烤48h至恒重，稱取干重，對組間水分進(jìn)行對比分析。

3 結(jié) 果

3.1 MHZTJN對傾斜板停留時(shí)間和神經(jīng)功能評分的影響 受試動(dòng)物術(shù)后表現(xiàn)不同程度的局灶性神經(jīng)功能障礙。模型組與假手術(shù)組相比，神經(jīng)功能評分顯著升高，傾斜板停留時(shí)間顯著降低，說明模型組動(dòng)物神經(jīng)功能癥狀有顯著損傷；MHZTJN中劑量和大劑量組與模型組相比，神經(jīng)功能評分顯著降低，停留時(shí)間顯著升高，說明給予MHZTJN后行為學(xué)障礙和神經(jīng)功能癥狀顯著改善,結(jié)果見表1。

3.2 對造模大鼠腦含水量的影響 模型組的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)；MHZTJN大劑量組能顯著改善腦缺血引起的腦組織含水量增加(P<0.01)，減輕側(cè)腦水腫程度，結(jié)果如下。

表1 MHZTJN對MCAO腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能和傾斜板停留時(shí)間的影響

注：與對照組比較，△P<0.05 ，▲P<0.01，■P<0.001

表2 MHZTJN對造模大鼠腦含水量的影響

組 別劑量(mg/kg)腦含水量(g)假手術(shù)組-1.27±0.09△模型組-1.37±0.08腦心通組4001.25±0.12△馬海治癱膠囊組4001.24±0.10▲馬海治癱膠囊組2001.30±0.20馬海治癱膠囊組1001.34±0.17

注：與對照組比較，△P<0.05 ，▲P<0.01

3.3 對造模大鼠腦梗體積的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠大腦皮質(zhì)均出現(xiàn)明顯的梗死灶，TTC 染色后為白色；與模型組相比，MHZTJN中劑量、大劑量組及腦心通組均能顯著降低腦梗塞體積，結(jié)果如下。

表3 MHZTJN對造模大鼠腦梗體積的影響

組 別劑量(mg/kg)腦梗體積(cm3)假手術(shù)組-0±0模型組-1.23±1.11腦心通組4000.40±0.33△馬海治癱膠囊組4000.12±0.14▲馬海治癱膠囊組2000.66±0.2△馬海治癱膠囊組1001.12±0.31

注：與對照組比較，△P<0.01，▲P<0.001

4 討 論

本課題研究中，大鼠腦組織缺血后，神經(jīng)及傾斜板實(shí)驗(yàn)均表現(xiàn)出一定的不良跡象，出現(xiàn)對側(cè)的肢體無力、癱瘓等神經(jīng)功能缺陷體征。MHZTJN能有效改善缺血所致的大鼠神經(jīng)功能障礙；大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞后，缺血腦組織因壞死而不能與TTC 反應(yīng)呈白色，給予MHZTJN的給藥組與模型組動(dòng)物相比，腦梗死范圍顯著減小；給予MHZTJN后，能有效改善腦缺血引起的腦組織含水量增加；說明馬海治癱膠囊對線栓法阻塞大腦中動(dòng)脈導(dǎo)致的局灶性腦缺血具有顯著保護(hù)作用，間接反映其治療腦血管疾病的作用機(jī)理。

[1] 王月華，賀曉麗，楊海光，等.小續(xù)命湯有效成分組對局灶性腦缺血大鼠的作用[J].中國藥學(xué)雜志，2012，47(3)：194-198．

[2] 喬靖怡，張小磊，王 燦，等.短暫腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ图疤攸c(diǎn)分析[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011，22(3)：748-750．

[3] 張臻年，李繼英，趙 楊，等.通腦活絡(luò)針刺法對大鼠急性腦梗死細(xì)胞凋亡及梗死容積的影響[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2012，23(10)：222-223．

(收稿2014-05-06；修回2014-06-17)

*西安市科技計(jì)劃資助項(xiàng)目[HM1123(4)]

△陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)

馬海治癱膠囊 腦血管 局灶性腦缺血

R743

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.056