乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定研究*

薛利華

西安市中醫醫院(710001)

乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定研究*

薛利華

西安市中醫醫院(710001)

目的：控制乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的含量。方法：采用高效液相色譜法建立了乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定方法。結果：該方法靈敏度高，準確可靠, 可以作為乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的質控方法。結論：該品中不含馬兜鈴酸。

乳沒鎮痛膠囊是由鎮痛飲進行劑型改革而來的制劑，是國家級名老中醫姚樹錦主任醫師集30余年臨床經驗總結出治療痹痛的經驗方，處方由乳香、沒藥、細辛、蟲、血竭等藥組成，功效為活血定痛，破瘀化滯，祛寒逐風[1]。方中細辛為馬兜鈴科植物北細辛、漢城細辛或華細辛的干燥全草[2]。馬兜鈴酸是馬兜鈴科植物中的主要成分,近年來已證實其具有腎臟毒性[3-5]。2010版中國藥典規定細辛中馬兜鈴酸的限量為0.001%[2]，但中藥復方制劑中是否含有馬兜鈴酸還有待進一步研究，為了更有效的控制產品的質量，保證臨床用藥安全，采用高效液相色譜法建立了乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定方法。

1 儀器與試藥 1.1 儀器LC-20AT恒流泵 SPD-20A紫外檢測器；SIL-20A自動進樣器；CTO-10ASVP校溫箱(日本島津)；FA2104(上海民橋精密科學儀器有限公司) 。

1.2 試藥 乳香、沒藥、細辛等藥味(購自西安盛興飲片廠)；磷酸(廣東汕頭市西隴化工廠)；甲醇(天津市致遠化學試劑有限公司)；馬兜鈴酸對照品(110746-200507購自中國食品藥品檢定研究院，含量測定用)；乙腈、磷酸為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。乳沒鎮痛膠囊樣品及相應藥材陰性樣品由本實驗室自制。

2 方法與結果 2.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.05%磷酸溶液為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為260nm。理論板數按馬兜鈴酸Ⅰ峰計算應不低于5000。

2.2 供試品溶液的制備 取乳沒鎮痛膠囊內容物5g，天平精密稱定，放置錐形瓶中，用移液管加入70%甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率40kHz)40min，放置室溫，再稱量，所減少重量用70%甲醇補足，震搖均勻，微孔濾過，取續濾液做供試品溶液備用。

表1 馬兜鈴酸Ⅰ峰值情況

2.3 對照品溶液的制備 取適量對照品馬兜鈴酸Ⅰ，天平精密稱定，加甲醇制成濃度0.4μg/mL的溶液，備用。

2.4 陰性對照品的制備 取不含細辛的乳沒鎮痛膠囊處方藥材, 按乳沒鎮痛膠囊生產工藝制備膠囊,作為陰性膠囊。取適量, 按2.2中方法制備，備用。

2.5 檢測方法 分別吸取上述備用供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄結果。如圖2，圖3。

2.6 線性范圍考察 按上述色譜條件吸取備用對照品溶液3、5、10、15、20、25μL注入色譜儀，以進樣量、峰面積分別為橫坐標和縱坐標，計算得回歸方程為Y=72.906,X+8.3167，r=0.9999。 結果表明馬兜鈴酸Ⅰ在0.198～1.316μg范圍內呈良好線性關系 。結果見圖1。

圖1 標準曲線

2.7 重復性實驗 取同一批次乳沒鎮痛膠囊樣品，按2.2中所述方法制備供試液6份，每次自動進樣10μL測定，6份均未檢出，顯示方法重復性良好。

2.8 精密度實驗 精密吸取馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液(0.4μg/mL)， 重復測定6 次，結果馬兜鈴酸Ⅰ峰面積的RSD2.4%。

2.9 穩定性實驗精密進樣按2.3中方法所制馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液，每次10μL，分別在0, 2, 4, 6, 8 h 進樣, 檢測溶液的穩定性，計算峰面積RSD為2.5%，說明該溶液在8h內穩定性良好。

2.10 回收率實驗 取乳沒鎮痛膠囊樣品5份，每份20 粒。取內容物混勻，取約0.20g，天平精密稱定，置25 mL 棕色瓶中，分別精密加入馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液(0.4μg/mL)10 mL，按2.2中方法制取供試品溶液5份，計算測定所得平均回收率為97.9%, RSD 為0. 8%。說明本研究方法回收率良好。

2.11 空白干擾實驗 取乳沒鎮痛膠囊陰性對照品備用溶液, 依2.5中方法測定, 在馬兜鈴酸Ⅰ峰相應位置無干擾。

2.12 含量測定 取乳沒鎮痛膠囊樣品3批, 依2.2中方法制備供試品, 經測定,該 3批乳沒鎮痛膠囊中均未檢出馬兜鈴酸Ⅰ。

圖2 馬兜鈴酸Ⅰ對照品

圖3 供試品溶液

2.13 結 論 本品中未檢測出馬兜鈴酸Ⅰ，因此規定本品不得檢出馬兜鈴酸。 3 討 論 3.1 臨床研究表明, 馬兜鈴酸的腎臟毒性作用, 主要表現為急性腎功能障礙。而馬兜鈴酸Ⅰ是馬兜鈴屬植物中毒性最強的成分[5]。近年來由于馬兜鈴酸已確定為一種具有腎毒性和致癌作用的物質[4-6]，從而引起人們對安全使用馬兜鈴科中藥的的關注。乳沒鎮痛膠囊是本院腎病科所用制劑，本實驗為臨床用藥安全提供依據。

3.2 本實驗檢測乳沒鎮痛膠囊樣品三批, 檢測結果均未檢出馬兜鈴酸Ⅰ。 據此可規定乳沒鎮痛膠囊質量標準中不得檢出馬兜鈴酸。

3.3 用HPLC法測定本制劑中馬兜鈴酸Ⅰ含量[7-11]專屬性強, 結果準確可靠，操作方法簡單,可以用來控制乳沒鎮痛膠囊中馬兜鈴酸的檢測。

[1] 王維英.姚樹錦中醫世家經驗輯要[M].西安.陜西科學技術出版社2002:1.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典．一部[S].北京:中國醫藥科技出版社，2010: 133,173,207,214.

[3] 中華醫學會． 臨床診療指南-腎臟病學分冊[S]． 北京: 人民衛生出版社，2011: 167-169．

[4] 于 艷,修麗麗,魏新智，等.北細辛不同提取物中總馬兜鈴酸的含量測定[J].中國實驗方劑學雜志,2012.18(24):141.

[5] 陳 杰,李詒光,孟淑娟，等.辛麻止咳顆粒中馬兜鈴酸的含量測定研究[J]. 時珍國醫國藥，2007,18(11):2725.

[6] 薛 燕，童湘暉，王 峰，等． 細辛飲片中馬兜鈴酸A 痕量檢查方法的建立[J]．藥物分析雜志，2010，30( 5) : 842.

[7] 杜曉曦,周躍華,路金才,等. RP-HPLC 法測定馬兜鈴酸含量方法的優化[J].中國中醫藥信息雜志,2007，7(14):47.

[8] 李 琳, 高慧敏, 王智民，等.冠心蘇合制劑中馬兜鈴酸A 的含量[J]中國中藥雜志，2006.1(31)：122.

[9] 宋雙紅， 色林格， 陳 蓓，等.HPLC 法測定4 種細辛中馬兜鈴酸Ⅰ和細辛脂素[9].中成藥2014 ， 36(8)1711-1715.

[10] 胡志祥,王永紅,彭崇勝,等.近5 年細辛及其制劑中馬兜鈴酸的研究進展[J].中草藥，2010,41(2):318.

[11] 曾 超，劉雪梅，蒙萬香,等． HPLC 法測定不同產地細辛藥材中馬兜鈴酸的含量[J]．內科，2013，8( 1) : 56-57．

(收稿2014-11-12；修回2014-11-25)

*陜西省中醫藥管理局立項課題 題目編號ZY49

@乳沒鎮痛膠囊 馬兜鈴酸 含量測定

R28

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.04.049

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