微生物檢測中培養基的制備及注意事項

劉榮華

(河北省秦皇島盧龍縣疾病預防控制中心 066400)

培養基是提供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料，有液體、半固體或固體形式，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養基做得好壞，對微生物檢測工作是很重要的。培養基自身質量的優劣、保存是否得當、配制使用是否正確都直接關系到檢驗結果的正確與否。

1 培養基制備前期準備

對新買的培養基，一定要由專人做好接收工作，應仔細核對培養基的名稱、規格、數量、成分、外觀特征、批號、保質期是否符合要求，并做好記錄，過期的培養基一定不能用。

2 培養基的制備

2.1 調配按照培養基的配方，準確稱取各種成分于燒杯中。稱量時一定要用專用的角匙，避免交叉污染。干粉培養基易吸潮，應注意防潮，用完馬上蓋好瓶口。如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。

2.2 溶化制備培養基常用蒸餾水，因蒸餾水不含雜質，也可用自來水，但是用自來水配制的培養基因水中常含有鈣、鎂等，可與蛋白胨或肉浸液中的磷酸鹽生成不溶解性的磷酸鈣或磷酸鎂，經高壓滅菌后，可析出很多沉淀。因此，若用自來水配制培養基，最好先將水煮沸，使部分鹽類沉淀經過濾后方可使用。溶化時不得用鐵鍋或銅鍋，以防有金屬離子混入培養基中，影響細菌的生長。加熱溶化過程中應隨時攪拌，容器的大小要適當，注意防止燒焦和外溢。燒糊的培養基營養物質被破壞，或可產生有毒物質，如發現燒焦，或未溶解均勻前培養基有溢出，該培養基不能使用，應重新制備。對于瓊脂類培養基最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養基應棄去。

2.3 矯正PH值PH比色計應準確可靠，也可用PH試紙來矯正。微生物必須在適宜的PH范圍內才能生長繁殖，必須按各種不同培養基的要求準確測定PH值。培養基配方要求的PH值為滅菌或消毒后的PH值。培養基在高壓滅菌后，其PH值約降低0.1～0.2，故矯正時應比實際需要的PH值高0.1～0.2。培養基制備過程中，如果需要調整培養基的PH值，應用1mol/L NaOH或1mol/L HCL調整。注意PH不要調過頭，以避免回調或反復調，否則會影響培養基內各離子的濃度。

2.4 過濾澄清培養基配成后一般都有沉渣或混濁，需過濾澄清使其清晰透明方可使用。液體培養基常用濾紙過濾，固體培養基如系瓊脂培養基，于加熱融化后需趁熱用兩層紗布中夾脫脂棉過濾，也可采用自然沉淀法。

2.5 分裝根據不同的需要，可將制好的培養基分裝入不同容量的三角燒瓶、試管等，管口塞上棉塞，用牛皮紙包扎管口。分裝的量不宜超過容器的2/3，以免滅菌時外溢。分裝過程中，注意不要使培養基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染。

2.6 滅菌不同成分、性質的培養基，可采用不同的滅菌方法。一般培養基采用濕熱滅菌，即高壓蒸氣滅菌法，通常是121℃15min，含糖或特殊培養基，按照生產商提供的說明滅菌。配制好的培養基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養分，改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋要定期進行檢定，每次滅菌采用化學變色紙對滅菌效果進行驗證。

2.7 檢定(即質量的檢查)每批培養基制成后必須經檢定后方可使用。制備好的培養基應有相應的顏色，一般培養基應澄清、無渾濁、無沉淀，檢定時從每批制備的培養基中選取部分培養基放在37℃溫箱內培養24小時后，確定無雜菌生長即可待用。同時用已知菌種檢查在此培養基上的生長繁殖及生化反應情況，符合要求者方可使用。

3 培養基的保存

制備好的培養基，不宜保存過久，以少量勤做為宜。滅菌后的培養基應該迅速冷卻，避免長時間保存在高壓鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分。含染料的培養基應避光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完，應于冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發［2］。每批培養基應注明制作日期，平日少量分裝的培養基均宜存放于4℃冰箱內。

4 討論

制備培養基是細菌培養中不可缺少的工作，培養基的好壞，直接關系到檢測結果的準確性、可靠性，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在培養基制備過程中疏忽任何一個細小環節，都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此，在日常工作中要不斷完善和提高培養基的配制水平，認真對待每一個環節，為檢測工作提供高質量的培養基，以便于保證檢測結果的科學有效。

［1］王彩玉.常用細菌培養基制備及注意事項.衛生職業教育.2004，(23)∶102 －102.

［2］饒紅，陳廣全，馮騫，等.微生物實驗室培養基的質量保證措施.檢驗檢疫科學，2006，6(4)∶31 ～33.