同型半胱氨酸試劑攜帶污染對腺苷脫胺酶檢測的干擾及對策

牛新海，高小煥，殷菁華，束 煒，張 歡

（江蘇省鎮江市丹徒區人民醫院檢驗科，江蘇鎮江212028）

全自動生化分析儀中同型半胱氨酸與腺苷脫胺酶組合測 定時，如果分析順序先同型半胱氨酸后腺苷脫胺酶，由于同型半胱氨酸試劑2中含有腺苷脫胺酶酶，會污染全自動生化分析儀的試劑探針。試劑探針清洗不徹底時，污染的腺苷脫胺酶試劑會使腺苷脫胺酶試劑在使用后余下的試劑處于緩慢的酶促反應過程，緩慢降解腺苷脫胺酶試劑，進而影響腺苷脫胺酶試劑穩定，影響腺苷脫胺酶的檢驗測定結果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 貝克曼AU680全自動生化分析儀。同型半胱氨酸檢測試劑為上海長征公司產品；腺苷脫胺酶試劑為寧波美康公司產品。同型半胱氨酸檢測試劑為酶循環法雙試劑；腺苷脫胺酶檢測使用的是酶比色法雙試劑。同型半胱氨酸檢測試劑成分包括試劑1：Tris緩沖液，試劑2：Tris緩沖液，腺苷同型半胱氨酸水解酶、腺苷同型半胱氨酸轉甲基酶、腺苷脫胺酶。腺苷脫胺酶檢驗需要檢驗的成分是腺苷脫胺酶，與同型半胱氨酸試劑成分相同，理論上存在試劑交叉污染的可能。

1.2 方法 攜帶污染試驗證明同型半胱氨酸會對腺苷脫胺酶檢測結果產生影響。命名水平R1 新試劑為A，R2 新試劑為B，并做質控（水平結果為27.6和27，靶值27.7）樣本，試劑正常使用。（1）證明同型半胱氨酸對腺苷脫胺酶水平檢測的影響將在第2天和第3天產生明顯影響。試驗前期準備：足量A1、B1試劑，已知濃度的大量混合血清S［已分裝重復檢測，同型半胱氨 酸 檢 測 結 果 為（15.50±0.19）μmol／L，水 平 結 果 為（15.60±0.21）μmol／L（檢測6次所得均值）］。試驗操作方案1：檢測同型半胱氨酸＋水平次數至10次，記錄結果數據，將試劑A1、B1留存試劑倉中，于第2天、第3天用相同的分裝混合血清測定腺苷脫胺酶。（2）證明采取糾偏措施有效試驗。操作方案2：在進行相同的對照檢驗前，設置儀器相關參數，①在添加水平的R2試劑之前，不論什么項目，都用清水清洗試劑針2次，以消除試劑針攜帶造成的交叉污染；②將水平試劑位置和檢測順序與同型半胱氨酸隔離開來（試劑位相隔9個位置，檢測項目間隔4個項目，替換上新的A2、B2試劑。

2 結 果

對照組第1天測定腺苷脫胺酶均值為（15.61±0.23）U／L，先測同型半胱氨酸后測腺苷脫胺酶，測定腺苷脫胺酶的水平為（17.8±0.31）U／L，以上述試劑進行10次測定腺苷脫胺酶；第2天測定腺苷脫胺酶水平為（106.9±2.8）U／L。第3天測定：測定出其中的腺苷脫胺酶測定水平為（1 033.0±3.7）U／L。將單獨測定腺苷脫胺酶的對照結果與按照以上組合順序測定的結果做配對t檢驗，差異有統計學意義（P＜0.01）。

采取糾偏措施后，更換新試劑，對照組第1天測定腺苷脫胺酶水平為（15.6±0.22）U／L；先測同型半胱氨酸后測腺苷脫胺酶的分析順序測定腺苷脫胺酶水平均為（15.6±0.21）U／L，以上述同型半胱氨酸試劑作為樣品進行20次測定，第2天測定腺苷脫胺酶水平為（15.6±0.23）U／L。第3天測定：測定出其中的腺苷脫胺酶測定水平均值為（15.5±0.23）U／L。將單獨測定腺苷脫胺酶的對照結果與按照以上組合順序測定的結果做配對t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討 論

先同型半胱氨酸后腺苷脫胺酶的分析順序測定腺苷脫胺酶。試劑針清洗不干凈易造成試劑間的交叉污染，證明同型半胱氨酸和水平同時檢測時會對水平試劑產生污染，且影響隨著時間增大。生化分析儀檢測順序必須避免先測定同型半胱氨酸后再測定腺苷脫胺酶；在添加水平的R2試劑之前，不論什么項目，都用清水清洗試劑針2次，以消除試劑針攜帶造成的交叉污染。據試劑配方顯示，同型半胱氨酸試劑中含有大量的腺苷脫胺酶成分。腺苷脫胺酶需要檢驗的成分是腺苷脫胺酶，理論上同型半胱氨酸與腺苷脫胺酶存在試劑交叉污染的可能。

同型半胱氨酸試劑污染腺苷脫胺酶試劑2，相當于在腺苷脫胺酶試劑中加入了腺苷脫胺酶，以致產生酶促反應過程，緩慢降解腺苷脫胺酶試劑，進而影響腺苷脫胺酶試劑穩定，導致水平的檢驗測定結果明顯偏高的錯誤。錯開設置同型半胱氨酸、腺苷脫胺酶檢驗順序，只能相對避免試劑污染，由于每天工作量的關系，如果試劑針清洗不徹底，仍有同型半胱氨酸中腺苷脫胺酶酶分子污染水平試劑的可能。如果儀器分析順序先測同型半胱氨酸后測腺苷脫胺酶，那么試劑針清洗不干凈易造成試劑間的交叉污染。正如上面的實驗顯示，同型半胱氨酸試劑會使腺苷脫胺酶的檢測結果顯著升高，污染后腺苷脫胺酶試劑在第2天測定正常樣本腺苷脫胺酶水平會出現錯誤結果高達106.9U／L，第3天進行測定正常血清腺苷脫胺酶水平會出現錯誤結果高達1 033U／L。

AU680全自動生化分析儀的工作方式是先測試一個標本的所有試驗項目，再測試下一個標本。一個標本在所有項目未完成之前，樣品針只吸注同一個標本，而試劑針在不同試劑之間吸注；另外試劑針比樣品針吸注量大幾十倍，沖洗后殘留污染也就更多，所以樣品針不容易污染，而試劑針最容易受到污染。

設置同型半胱氨酸與腺苷脫胺酶檢驗順序時，中間間隔5～6個其他項目，在添加水平的試劑之前，不論什么項目，都用清水清洗試劑針2次。通過比對檢驗，發現該特殊清洗可有效避免同型半胱氨酸與水平試劑之間的直接接觸。

儀器維護：按照AU680操作SOP要求，按時、定期進行儀器維護保養堅持日保養、周保養、月保養；定期對儀器進行校準；全自動生化分析儀標本和試劑用量較少，有少量殘存即會影響測試結果，每天應用無水乙醇擦洗加樣針及攪拌棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染［1］。

通過同型半胱氨酸試劑攜帶污染對腺苷脫胺酶檢測實驗，科室組織品管圈進行相關學習討論，分別提出雙縮脲試劑對血清銅測定的攜帶污染［2］，葡萄糖試劑攜帶污染影響尿酸檢測［3］，以及其他臨床檢驗中發現的一些試劑交叉污染現象。

全自動生化分析儀的自凈率都是有限的［4］，檢測試劑排序不當就會出現不可逆轉的結果誤差［5］，容易給臨床造成無效數據，影響臨床診療。通過實驗驗證，遇可能發生試劑交叉污染的項目時，重點要設置項目檢驗順序和試劑針的清洗。

［1］郭旭.初探全自動生化分析儀交叉污染的原因及解決對策［J］.醫療裝備，2011，24（5）：83.

［2］汪宇嬰，馮春顏.雙縮脲試劑對血清銅測定的攜帶污染探討［J］.中國誤診學雜志，2009，9（9）：2084－2085.

［3］張艷超.試劑交叉污染對尿酸測定結果的影響［J］.河南大學學報：醫學版，2009，28（4）：300－301.

［4］郭杰，蔡忠，張連祥，等.全自動生化分析儀的精密度和交叉污染率評價［J］.檢驗醫學，2004，19（2）：140－142.

［5］韓來新，張團結，劉玉霞，等.總膽固醇試劑對總膽汁酸測定有攜帶污染［J］.現代檢驗醫學雜志，2004，19（1）：51－51