3種梅毒血清學檢測方法的應用評價

顧文剛，南志敏，蔣 芬，陳淑云△

（1.武警北京總隊醫院檢驗科，北京100027；2.武警北京總隊第二醫院信息科，北京100037）

梅毒是常見性傳播疾病，感染性強，危害大，臨床表現也比較復雜。早期潛伏狀態時無臨床表現，患者自身難以察覺，很容易通過性行為傳播給他人。目前實驗室主要通過血清學試驗來檢測梅毒螺旋體［1］，梅毒血清學檢測的方法很多，特異度和靈敏度都有差別，選擇合適、有效的檢測方法有利于梅毒的早期診斷和治療。為此本研究對梅毒酶聯免疫吸附試驗（TPELISA）陽性的患者進行梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）、膠體金免疫層析法（GIGA）以及梅毒螺旋體非特異性血漿反應素試驗（RPR），以比較后3種方法的診斷效率，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院2011年1月至2013年12月的住院及門診患者359例，TP－ELISA 結果均為陽性，年齡20～85 歲，其中男187例，女172例。

1.2 儀器與試劑 水浴箱、振蕩器、水平轉動儀、酶標儀（上?？迫A），TP－ELISA 和RPR 試劑購自上?？迫A生物工程股份有限公司，GIGA 試劑來自英科新創（廈門）科技有限公司，TPPA試劑購于富士瑞必歐株式會社。

1.3 方法 采集靜脈血標本3 mL，分離血清，用TP－ELISA法進行篩檢，陽性標本做TPPA、GIGA 和RPR 檢測，TPELISA 法采用兩步法設置空白、陰性和陽性對照，嚴格按試劑盒說明書操作。TPPA 法在U 型板上1～4 空分別加入標本稀釋液100、25、25、25μL，取待測血清25μL 加入第1孔中混勻后吸出25μL加入第2孔，依此加到第4孔，然后在第3孔加入25μL未致敏粒子，第4孔加入25μL 致敏粒子，用振蕩器混勻，靜置2h后觀察結果。GIGA 法直接滴板，15 min后觀察結果即可。RPR 法取50μL 待測血清加入紙卡的圓圈中，然后垂直滴加一滴RPR 試劑到血清中，在水平轉動儀上轉8min后3min內觀察結果。

1.4 判定標準 以TPPA 陽性或TPPA 為陰性的高危人群，結合臨床回訪調查及性接觸史綜合判定符合梅毒判定標準的患者為確診梅毒感染者。特異度＝真陰性／（假陽性＋真陰性），靈敏度＝真陽性／（真陽性＋假陰性）。

2 結 果

2.1 3種方法的檢測陽性率比較 TP－ELISA 法進行篩檢，陽性患者359例，對359例疑似梅毒感染者的標本進行TPPA、GIGA、RPR 檢 測，GIGA 陽 性 率 最 高，為95.0%（343／359），TPPA 法陽性率為93.3%（335／359），RPR 法 陽性率最低，為70.2%（252／359）。

2.2 3種方法的特異度和靈敏度 359例TP－ELISA 陽性患者中，確診338例為梅毒感染者。TPPA 法真陽性333例，假陽性2例，真陰性19例，假陰性5例；GIGA 法真陽性335例，假陽性8例，真陰性13例，假陰性3例；RPR 法真陽性251例，假陽性1例，真陰性20例，假陰性87例。TPPA 法、GIGA 法、RPR法的靈敏度分別為98.5%（333／338）、99.1%（335／338）、74.3%（251／338），TPPA 法、GIGA 法、RPR 法的特異度分別為90.5%（19／21）、61.9%（13／21）、95.2%（20／21）。

3 討 論

隨著人們生活方式的改變和人口流動性增加，梅毒發病率呈逐年增高的趨勢［2］，選擇合適有效的檢測方法對梅毒的診斷和治療具有重要的意義。本研究結果顯示TPPA 法靈敏度（98.5%）和特異度（90.5%）均較高，GIGA 法靈敏度（99.1%）較高但特異度（61.9%）較低，RPR 法的靈敏度（74.3%）較低但特異度（95.2%）較高，綜合比較TPPA 法更適合梅毒的篩查和確診。TPPA 法是將梅毒的精致菌體成分包被在人工載體明膠粒子上，而這種致敏粒子與樣品中的梅毒螺旋體進行反應后會發生凝集，由此可檢測血清中的梅毒螺旋體［3］，TPPA法被美國疾病預防控制中心定為確診方法，是當前國內外公認的梅毒血清 學 確 證 實 驗［4－5］。但 本 文 中TPPA 法 出 現 了5 例假陰性和2例假陽性結果，分析假陰性患者可能是新近感染（窗口期）的患者，這是因為梅毒螺旋體感染人體后，首先產生IgM 抗體而后產生IgG 抗體，IgM 在感染2～4 周方可 檢出，IgG 出現較晚，且一旦出現會一直存在，窗口期患者體內還未產生抗體，故TPPA 法檢測為陰性，與文獻［6］報道一致，如何提高窗口期的梅毒檢出率有待進一步探討。TPPA 假陽性可能是患者服用了免疫球蛋白制劑，也有文獻顯示由于患者本身和試劑的原因，梅毒血清學試驗有一定的假陽性，在對高齡老人的檢測中尤為突出［7］。GIGA 法采用膠體金免疫技術和層析原理，是當前快速的體外診斷技術，其包被的單克隆梅毒螺旋體抗原，能夠選擇性地結合與之相對應的抗體，具有快速簡便準確的特點，但在本文中有假陽性和假陰性出現，原因尚不明確。RPR 法是檢測梅毒非特異性反應素，該反應素在軟下疳后才會出現，其陽性滴度水平與梅毒感染情況呈正相關，經梅毒的有效治療后反應素逐步下降到最后消失，RPR 不適合梅毒的單獨篩查，必須與梅毒特異性抗體聯合檢測才能更為準確有效地判斷病情及療效［8］。考慮到RPR 法是非特異性反應素試驗，麻風等患者也可出現陽性。鑒于多種因素影響，臨床對梅毒血清學結果的解釋，必須結合患者病史、臨床表現及梅毒治療情況等進行綜合分析［9］。

綜上所述，GIGA 試驗快速、簡便，敏感性好，適合對急診患者的快速檢測，但陽性結果需經過TPPA 確證，普通患者可直接用TPPA 法篩檢，TPPA 陽性患者聯合RPR 滴度檢測，以更好了解感染情況及監測預后，TPPA 陽性RPR 為陰性的患者排除服用免疫球蛋白制劑等因素的干擾，需定期復查RPR，做到早發現早治療。

［1］袁余，李冬冬，王婷婷，等.3種梅毒血清學檢測方法的應用評價［J］.預防醫學情報雜志，2011，32（15）：1718－1719.

［2］唐滿玲，顧敏，將最明，等.幾種梅毒血清學檢測方法的評價及臨床應用［J］.國際檢驗醫學雜志，2012，33（9）：1105－1106.

［3］姜清明.ELISA 與TPPA 檢測梅毒螺旋體的臨床對比研究［J］.臨床合理用藥雜志，2011，4（3）：48－49

［4］夏映鳳.臨床常見梅毒血清學檢測方法的合理選擇［J］.檢驗醫學與臨床，2011，8（24）：3042－3044.

［5］徐新蓉，張劍波.梅毒實驗室診斷檢測策略的探討［J］.國際檢驗醫學雜志2013，34（7）：883－884.

［6］陳述文，梁連輝，蔡常輝.四種方法檢測早期梅毒螺旋體感染的的臨床應用評價［J］.國際檢驗醫學雜志，2012，32（21）：2633－2634.

［7］武建國.老年人抗梅毒螺旋體抗體測定的假陽性率偏高［J］.臨床檢驗雜志2006，24（4）：241－243.

［8］王華，李代渝，雷麗明，等.梅毒螺旋體血清學檢測方法比較［J］.中華檢驗醫學雜志，2007，30（6）：660－661.

［9］羅米.兩種方法聯合檢測梅毒螺旋體抗體的臨床應用［J］.檢驗醫學與臨床，2012，9（21）：2694－2695.