糖化血紅蛋白的檢測意義及常用方法比較

雷 斌，李 碧

（1.湖南省資興市中醫醫院檢驗科，湖南資興 423401；2.湖南省資興市第一人民醫院檢驗科，湖南資興 423402）

糖化血紅蛋白的檢測意義及常用方法比較

雷 斌1，李 碧2

（1.湖南省資興市中醫醫院檢驗科，湖南資興 423401；2.湖南省資興市第一人民醫院檢驗科，湖南資興 423402）

目的使用國產設備、試劑及配套的校準系統對糖化血紅蛋白檢測的性能進行評價，比較生化免疫比濁法和陽離子交換色譜法在糖化血紅蛋白檢測中的意義。方法分別使用生化分析儀和糖化血紅蛋白儀檢測糖化血紅蛋白，并進行比較。結果檢測結果均值與靶值的差異度及變異系數均小于5%。結論使用國產設備和試劑檢測糖化血紅蛋白符合實驗室要求，并能滿足臨床需要，此外液相層析法的準確性和線性范圍略高于生化免疫比濁法。

糖化血紅蛋白； 生化免疫比濁法； 液相層析法； 溯源性； 標準化

2010年中日友好醫院楊文英教授組織的全國糖尿病流行病學調查發現國內20歲以上成年人糖尿病患病率達9.7%，其中60.0%未得到診斷，糖尿病前期患病率高達15.0%［1］。2010年國內糖尿病患者官方數據為9 260萬，因此及時診斷和發現糖尿病，延緩和控制糖尿病并發癥的發生，對維護人民的身體健康有著重要的意義。檢測和診斷糖尿病的檢測方法已日漸成熟，國際糖尿病協會也早已公布較為完善的診斷標準。世界衛生組織（WHO）已明確糖化血紅蛋白（Hb A1c）≥48 mmol/mol（6.5%）診斷為糖尿病。糖耐量試驗（OGTT）是國際公認的確診糖尿病金標準，但由于OGTT檢測程序復雜、成本高、血糖變異度大等原因造成其在診斷糖尿病過程中受到制約。因為血液的葡萄糖測定，只代表采樣時的血糖水平，其體內控制依賴于基礎胰島素的分泌和肝臟適當的胰島素敏感性以控制肝糖的生成和輸出，還受各種因素如飲食、分析方法及采用的儀器溯源性、藥物及其他疾病的影響，此外患者采取了限制飲食或加強運動的自我治療措施使高血糖得到適當的改善，因此血糖測定并不能完全正確的評價疾病控制程度和療效。而Hb A1c的檢測不要求患者空腹，日間變異小于2.0%，受干擾因素小，結果更可靠、直觀，是評價糖尿病患者長期血糖水平控制的金標準［2］。Hb A1c與糖尿病并發癥，尤其是微血管病變具有高度的相關性，也是WHO推薦的糖尿病診斷標準［3］。近年來，隨著國內Hb A1c的檢測更加規化范，其越來越受到臨床醫生的重視。目前檢測Hb A1c常用方法有液相層析法（親和層析、陽離子交換色譜法）、即時檢測法（POCT）及免疫化學法。POCT法快速、簡單但重復性和準確性存有局限性，免疫化學法和液相層析法技術簡單，自動化程度高，重復性準確性較高。本研究對免疫化學法和陽離子交換色譜法進行比較，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑 深圳邁瑞800生化分析儀，使用寧波美康生物科技有限公司生產的試劑及校準物（批號20111111）。上?；葜嗅t療科技有限公司生產的MQ－2000 Hb A1c分析儀，使用上海華臣生物有限公司的試劑及校準物（批號HBA1C11445）。第三方質控物:Bio－Rad質控，2個水平濃度。

1.2 方法

1.2.1 生化免疫比濁法 采用十四基三甲銨溴化合物（TTAB）作為溶血劑，使紅細胞溶血，加入抗Hb A1c抗體緩沖液與Hb A1c反應形成可溶性抗原抗體復合物，然后加入多聚半抗原緩沖液，與過剩的抗Hb A1c抗體結合，生成不溶性的抗體多聚半抗原復合物，比濁進行測定。

1.2.2 陽離子交換色譜法 在選定低濃度條件下洗脫，Hb A1c首先被洗脫；再用高濃度洗脫液洗出非Hb A1c，得到相應的血紅蛋白層析譜，其坐標是時間，縱坐標是百分比。Hb A1c值以色譜圖中的Hb A1c峰面積占全血紅蛋白面積的百分率來表示。

1.2.3 質量控制 選取第三方質控物Bio－Rad 2個水平濃度，水平1:Level1－38411，示值5.42，水平2:Level2－38412，示值9.28。批號38410，在有效期內使用。

1.3 統計學處理 采用SPSS19.0軟件進行數據處理及統計學分析，計數資料以例數或百分率表示。

2 結 果

2.1 2種方法2個濃度水平的測定結果比較 2011年美國生化科學院在糖尿病診斷和管理中的應用于建議中指出:測定Hb A1c的室內變異小于2.0%，室間變異小于3.5%，并至少需要做2個水平的質控物。本研究結果顯示2種方法均值與靶值的差異度及變異系數（CV）均小于5%，可見生化免疫法和陽離子交換法的精密度、準確性均可以接受，并具有一定的可比性，但離美國生化科學院的規定以及進口設備和試劑還有差距，本次實驗使用的生化免疫法試劑在測定高值時，結果略有偏低，線性范圍偏窄。見表1。

2.2 2008年上海地區Hb A1c間質評結果匯總 上海地區開展Hb A1c實驗室檢測室間CV較高，見表2。

3 討 論

Hb A1c的測定結果是以百分率來表示，指的是葡萄糖結合的血紅蛋白（Hb）占全部Hb的比例，健康成年人的Hb A1c水平平均約為（4%～6%），不同方法參考范圍略有差異。臨床研究發現，糖尿病患者將Hb A1c控制在8%以內，糖尿病患者并發癥將大大降低，如果糖尿病患者體內的Hb A1c長期大于9%，反映患者持續性高血糖，患者體內的紅細胞攜氧能力下降，致使周圍組織缺氧，導致糖尿病性腎病、動脈硬化、白內障、足部炎癥等并發癥高發。

紅細胞中的血紅蛋白的Hb A1占97.0%，Hb A2為2.5%，HbF占0.5%。其中Hb A1又可分為Hb A1a1、Hb A1a2、Hb A1b和Hb A1C，其中Hb A1c具有重要的臨床意義，反映的是檢測前120 d內的平均血糖水平。

西雙說，那簡單，現在就可以還你。他將手里的借條折一下，再折一下，然后展開，問羅衫，是不是三等分？羅衫莫名其妙地看著他，搞不懂他接下來會有什么名堂。西雙嗤地從借條上撕下一綹，彈一下，甩給羅衫，說，三萬塊錢的三分之一，正好一萬，還你。

由于國內對于Hb A1c測定的標準化工作起步較晚，目前仍處于初級階段。并且由于不同的Hb A1c測定方法，可得到不同的測定值。2007年由美國糖尿病組織、歐洲糖尿病研究學會、國際糖尿病聯盟和國際臨床化學實驗醫學聯盟（IFCC）等學術組織達成共識確認Hb A1c結果應用IFCC單位（mmol/mol），IFCC決心對Hb A1c的檢測進行標準化，于1996年創建了國際Hb A1c標準計劃（NGSP），其宗旨非常明確，即標準化Hb A1c檢測，使測定結果具有可比性。為此，NGSP組建了以指導委員會為核心的參考實驗室網絡［4］。同時推薦將IFCC參考物質（IFCC－RM）應用于參考實驗室［5］。2011年美國生化科學院發布實驗室檢測在糖尿病診斷和管理中的應用與建議中指出:測定Hb A1c的室內變異小于2.0%，室間變異小于3.5%，并至少需要做2個水平的質控物［6］。

從檢測原理及相關資料分析證明免疫法用的是抗原抗體結合方式，抗體能特異性識別鏈糖基化多肽，避免電荷數改變引起的干擾，缺點是當存在含有結構改變的Hb或紅細胞生存周期異常情況時不可避免會受到影響。而陽離子交換色譜法精密度及線性略高于免疫法，缺點是不能把胎兒型血紅蛋白（HbF）從Hb A1c分離出來，當含有Hb F會使Hb A1c值偏高，以及含有一些稀有異常或變種Hb皆會造成干擾測定。

從表1數據統計分析來看，本實驗的均值與靶值差異度以及CV值均小于5%，生化免疫法和陽離子交換法的精密度、準確性均可以接受，并具有一定的可比性，但離美國生化科學院的規定及進口設備和試劑還有差距，本次實驗使用的生化免疫法試劑在測定高值時，結果略有偏低，線性范圍偏窄。從表2數據統計分析來看，上海地區開展Hb A1c實驗室檢測室間CV較高，各實驗室采用的Hb A1c檢測系統包括設備、試劑、檢測原理等方面有差異，結果可比性不夠理想。

由于檢測設備和檢測方法的不同，以及異常Hb導致Hb A1c值的假性升高或降低［7］。因此許多醫生和患者在拿著不同實驗室的檢測結果時比較困惑。為此，國家臨床檢驗中心從2007年起做了大量具體工作，主要工作有:（1）根據IFCC推薦的人血液Hb A1c參考測量程序建立了Hb A1c液相－質譜－質譜候選參考測定方法，參考方法的主要作用是保證定值。（2）按照國際標準化組織（ISO）Guide35并參照國際標準和“一級標準物質技術規范”［8］的要求制備了人血基質Hb A1c，于2010年獲得國家一級標準物質證書。

2012年7月4日，“Hb A1c一級參考實驗室”在上海市臨床檢驗中心暨臨床檢驗質量控制中心建成，標志著國內的糖尿病檢測將有可依循的最高標準，也意味著國內的糖尿病檢測將可依循最高標準，進行嚴格的質量管理。因此所在實驗室也可溯源到IFCC或NGSP認可的檢測系統，包括檢測的儀器、試劑和校準方法。隨著國內廠家的研發水平不斷提高，使用國產的Hb A1c檢測設備和檢測試劑也能滿足臨床需要?？傊?，加強各實驗室檢測Hb A1c一致化、標準化的建設，提高各實驗室的結果可比性，從而正確無誤地動態監測和治療患者的血糖水平刻不容緩。

［1］Yang WY，Lu JM，Weng JP，et al.Prevalence of diabetes among men and women in China［J］.N Engl J Med，2010，362（12）:1090－1101.

［2］王東環，陳文祥.應注重糖化血紅蛋白在糖尿病診療中的臨床價值［J］.中華檢驗醫學雜志，2012，35（6）:493－496.

［3］Word Health Organization.User of glycated haemoglobin （Hb A1c）in the diagnosis of diabetes mellitus:abbreviated report of a WHO consultation［S］.Geneva:WHO，2011:1－25.

［4］American Diabetes Association.Position statement:tests of glycemia in diabetes［J］.Diabetes Care，1998，21（1）:69－71.

［5］田亞平.糖化血紅蛋白的標準化及臨床應用中值得關注的問題［J］.中華檢驗醫學雜志，2012，35（6）:481－483.

［6］宋智心，徐國賓，馬懷安，等.糖化血紅蛋白的標準化現狀［J］.中華檢驗醫學雜志，2012，35（6）:497－500.

［7］Bry LD.Effects of hemoglobin variants and chemically modified derivatives on assays for glycohemoglobin［J］.Clin Chem，2001，47 （2）:153－163.

［8］國家技術監督局.JJF 1006－94一級標準物質技術規范［S］.北京:國家技術監督局，1994.

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.10.065

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1673－4130（2015）10－1458－03

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