胃腺癌組織CXCL10與CXCR3的表達及意義

張巍巍，孟欣穎，馬春紅，王濤，馬健，周長宏

(青島市市立醫院東院區，山東 青島 266071 1 干部保健科； 2 消化內科)

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胃腺癌組織CXCL10與CXCR3的表達及意義

張巍巍1，孟欣穎2，馬春紅1，王濤2，馬健2，周長宏2

(青島市市立醫院東院區，山東 青島 266071 1 干部保健科； 2 消化內科)

目的 探討胃腺癌組織中CXC趨化因子配體10 (CXCL10)及CXC趨化因子受體3(CXCR3)的表達及臨床意義。方法 胃腺癌及癌旁組織標本各50例，對照胃組織標本20例，應用免疫組化SP方法檢測3種胃組織中CXCL10、CXCR3的表達，并評估胃腺癌組織中CXCL10、CXCR3的表達與臨床病理特征間的關系及兩者之間的相關性。結果 胃腺癌組織中CXCL10和CXCR3的表達強度明顯高于癌旁組織和對照胃組織(χ2=8.24～22.69，P<0.05)；癌旁組織和對照胃組織中兩者的表達強度差異無顯著性(P>0.05)。胃腺癌組織中CXCL10的表達與腫瘤TNM分期有關(χ2=7.07，P<0.05)。CXCL10與CXCR3在胃腺癌組織中的表達水平呈正相關(rs=0.546，P<0.01)。結論 CXCL10及CXCR3在胃腺癌發生、發展中具有一定促進作用。

CXC趨化因子配體10；CXC趨化因子受體3；胃腫瘤；病理學,臨床

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其5年生存率低，發現時大部分已有浸潤和轉移[1]，因此，早期診斷胃癌已成為當今研究的焦點。近年的研究結果顯示，趨化因子及其受體與腫瘤免疫、轉移密切相關。本研究通過檢測胃腺癌及癌旁組織中CXC趨化因子配體10(CXCL10)及CXC趨化因子受體3(CXCR3)的表達，進一步探討其在胃癌發生、發展中的作用?，F將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1材料及其來源

2011年1月—2012年1月，我院普外科手術切除并經病理證實的胃腺癌及癌旁組織標本各50例，其中男37例，女13例，平均年齡62.5歲。病人留取標本前未經過任何治療。另外選取年齡、性別和胃癌病人相匹配的健康查體人員胃鏡檢查胃組織標本20例，其中男13例，女7例，平均年齡61.0歲，均經胃鏡病理檢查證實為輕度、非活動性慢性非萎縮性胃炎，幽門螺桿菌檢查均為陰性。所有組織經甲醛固定，石蠟包埋后制成5 μm厚的石蠟切片待檢。本研究經青島市市立醫院倫理委員會批準，所有病人均簽署了知情同意書。

1.2研究方法

采用免疫組織化學SP法分別檢測3種組織中CXCL10及CXCR3的表達。石蠟切片經二甲苯脫蠟，梯度脫水，于體積分數0.03的H2O2中室溫下孵育15 min；浸入0.01 mol/L的枸緣酸鹽緩沖液(pH6.1)中，微波抗原修復；以體積分數0.10的非免疫性牛血清蛋白封閉，分別加入一抗(1∶200兔抗人CXCL10單克隆抗體、1∶200兔抗人CXCR3單克隆抗體，均購自北京博奧森生物技術有限公司)，于37 ℃溫箱中孵育1 h；加入通用型免疫組化二抗(購自福建邁新生物技術有限公司)，37 ℃溫箱孵育10 min；DAB顯色，蘇木精復染，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3結果判定

細胞膜及細胞質中出現淡黃色至棕黃色的顆粒，為CXCL10、CXCR3陽性染色。在顯微鏡下隨機選取5個視野(200倍)，按照染色細胞數目的多少及其染色深淺來進行評分[2]。①根據顯微鏡視野中陽性細胞著色深淺計分：細胞不顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②根據顯微鏡視野中陽性細胞所占的比例評分：陽性細胞在所有細胞中所占比例<15%為0分，15%～25%為1分，26%～75%為2分，≥76%為3分。兩項積分乘積評定結果，其中0分為“-”；1～3分為“+”；4～6分為“”；7～9分為“”。

1.4統計學分析

采用SPSS 17.0軟件進行統計學分析， 計數資料組間比較采用χ2檢驗，相關性采用Spearman相關分析，以P<0.05為差異有顯著性。

2 結 果

2.1CXCL10、CXCR3在各組織中的表達

CXCL10及CXCR3主要表達于胃癌組織中的胃癌細胞以及胃癌組織浸潤的單個核細胞的細胞膜及細胞質。在癌旁組織和對照胃組織，CXCL10及CXCR3主要表達于間質的單個核細胞的細胞膜及細胞質。胃癌組織中CXCL10和CXCR3的表達強度均明顯高于癌旁組織和對照胃組織(χ2=8.24～22.69，P<0.05)，癌旁組織和對照胃組織中兩者的表達強度差異無顯著性(P>0.05)。見表1。

表1 各組織中CXCL10、CXCR3的表達(例)

2.2胃腺癌組織CXCL10、CXCR3表達與臨床病理特征的關系

CXCL10表達與腫瘤分期有關(χ2=7.07，P<0.05)；CXCR3表達與胃癌TNM分期有一定關系，但差異無顯著性(P>0.05)。兩者與病人年齡、性別、分化程度等無關(P>0.05)。見表2。

2.3胃腺癌組織CXCL10與CXCR3表達相關性

相關分析顯示，CXCL10與CXCR3的表達水平呈正相關(rs=0.546,P<0.01)。

表2 胃腺癌組織中CXCL10、CXCR3表達與臨床病理特征間的關系(例)

臨床病理特征nCXCL10-～+ ～ CXCR3-～+ ～ 年齡(歲) ≥602712151215 <6023815914性別 男3715221423 女135876分化程度 中高分化2611251115 低分化249151014TNM分期 Ⅰ期+Ⅱ期2615111412 Ⅲ期+Ⅳ期24519717

3 討 論

趨化因子是一類對不同靶細胞具有趨化和誘導功能的小分子多肽物質，根據其N末端4個保守半胱氨酸殘基的前兩個C間是否含有其他氨基酸，將它們分為4個亞族：CXC類、CC類、CX3C類、C類。趨化因子受體是介導趨化因子行使功能的G蛋白耦聯的7次跨膜型受體超家族，根據與其特異性結合的相應配體而命名。CXCL10由LUSTER等[3]從活化的U937細胞株的基因表達產物中篩選出來，而CXCR3 是CXCL10的惟一受體。CXCL10與CXCR3結合后可引起鈣離子內流，從而激活磷脂酰肌醇3激酶和絲裂原活化蛋白激酶，參與細胞的生長、分化、凋亡、分布、炎癥反應及腫瘤的生長和轉移等多種病理生理過程[4-5]。CXCL10和CXCR3在胃癌中的作用鮮見報道。

本文研究結果顯示，在胃癌組織中CXCL10和CXCR3的表達水平均明顯高于癌旁組織和對照胃組織，提示在胃癌發生過程中CXCL10 和CXCR3均具有促進作用。何甜等[6]研究結果顯示，胃癌組織中CXCL10蛋白的陽性表達率明顯高于慢性非萎縮性胃炎和癌前病變組組，表明CXCL10在胃黏膜的發育、演變過程中起一定的作用，與本研究的結果相近。CXCR3在胃癌中的作用還未見文獻報道。CXCR3(+)細胞的減少會導致胃癌局部微環境呈現免疫抑制狀態[7]，并且CXCR3與腫瘤轉移和較差的預后有關[8-9]。這些結果提示，CXCR3在腫瘤的發生發展過程中起一定的促進作用。結合本文的研究結果，提示CXCR3在胃癌的發生中也具有促進作用。

本研究結果還顯示，CXCL10的表達水平與胃癌的臨床分期有關，即在晚期腫瘤中，CXCL10的表達水平明顯高于早期腫瘤，表明CXCL10對胃癌的進展也具有促進作用。CXCR3表達水平雖與胃癌臨床分期有一定的相關性，但無統計學意義，這點值得關注。CXCR3分為CXCR3A和CXCR3B亞型，CXCR3B較CXCR3A在氨基端的胞外區長52個氨基酸殘基，這種結構的差異導致了兩者生物學功能的差異，即CXCR3A主要發揮促進腫瘤生長和轉移的作用，而CXCR3B的作用則相反。WU等[10]對前列腺癌的研究結果顯示，CXCR3A的表達增強及CXCR3B表達的下調開啟了促進前列腺癌細胞轉移和侵襲的信號途徑。在一項關于卵巢癌的研究中也有類似報道[11]。本研究顯示CXCR3與胃癌臨床分期的相關性無統計學差異，或與未對CXCR3進行分型有關，這一點值得深入研究。

本研究結果還顯示，胃腺癌組織中CXCL10的表達水平與CXCR3的表達水平呈正相關。這點尚未見相關的文獻報道。這提示，CXCL10是通過與CXCR3相結合發揮其生物學作用，兩者在胃癌的發生、發展過程中呈協同作用。

綜上所述，CXCL10與CXCR3在胃癌的發生、發展過程中發揮了促進作用，兩者呈協同效應。對CXCL10和CXCR3在胃癌中作用的深入研究，將為研發針對CXCL10-CXCR3反應軸的分子靶向治療奠定基礎。

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(本文編輯 厲建強)

EXPRESSION OF CXCL10 AND CXCR3 IN GASTRIC ADENOCARCINOMA AND ITS SIGNIFICANCE

ZHANGWeiwei,MENGXinying,MAChunhong,WANGTao,MAJian,ZHOUChanghong

(Department of Gastroenterology, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266071, China)

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of CXCL10 and CXCR3 in gastric adenocarcinoma (GAC).MethodsFifty GAC samples, 50 paracancerous samples and 20 gastric tissue samples were collected for this study. The expressions of CXCL10 and CXCR3 in these three gastric tissues were detected using immunohistochemical SP method. The correlation between the expressions of CXCL10 and CXCR3 in gastric cancer tissues and clinical pathology was analyzed.ResultsThe expression intensity of CXCL10 and CXCR3 in gastric cancer tissue was significantly higher than that of the adjacent cancer tissue and control gastric tissue (χ2=8.24-22.69,P<0.05). No significant difference was noted between the expression intensity of adjacent cancer tissue and the control gastric tissue (P>0.05). The expression of CXCL10 in gastric cancer was related with the tumor TNM staging (χ2=7.07,P<0.05). The level of expression of CXCL10 was positively correlated with CXCR3 in gastric cancer (rs=0.547,P<0.01).ConclusionCXCL10 and CXCR3 play a certain role in the occurrence and development of gastric adenocarcinoma.

CXC chemokine ligand 10; CXC chemokine receptor 3; stomach neoplasms; pathology, clinical

2014-05-28;

2014-09-16

張巍巍(1979-)，女，博士，主治醫師。

周長宏(1963-)，女，主任醫師，碩士生導師。

R735.2

A

1008-0341(2015)01-0021-03