肌肉中硝基呋喃類代謝物測定方法優化

龔波

摘要：比較了肌肉中硝基呋喃類代謝物殘留量檢測的常用方法，并加以改進。

關鍵詞：肌肉；硝基呋喃類代謝物；檢測方法；比較

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）12-0007-01

硝基呋喃類藥物是一類人工合成的具有5-硝基結構的廣譜抗生素，對革蘭氏陽性及陰性菌均有一定抗菌作用。因其價格低廉，效果好，被廣泛應用于畜牧養殖中[1]。研究表明，此類藥物及其代謝物可使試驗動物發生癌變和基因突變，我國已于2002 年頒布了禁止使用硝基呋喃類抗生素的禁令[2]。硝基呋喃類藥物在動物體內代謝速度快，不易被檢測到[3]，然而其代謝產物可在相當長時間內留存于可食組織中，因此常通過監測其代謝物的殘留來監控硝基呋喃類物的使用情況。

1 常用方法

目前，在肌肉中硝基呋喃類代謝物殘留量檢測中，常用的方法有農業部781號公告-4-2006動物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 高效液相色譜-串聯質譜法[4]（以下簡稱《公告》）。該標準采用依次用甲醇、乙醇和乙醚洗滌，去除雜質。在酸性條件下水解，與2-硝基苯甲醛溶液衍生化反應，調PH值后產物經乙酸乙酯提取，氮氣吹干。溶解殘余物，用LC-MS測定，同位素內標法定量。

另一種方法是GB/T 21311-2007動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法 高效液相色譜-串聯質譜法[5]（以下簡稱《國標》）。該標準樣品經鹽酸水解，鄰硝基苯甲醛衍生化反應，調PH值后，產物經乙酸乙酯提取，正己烷凈化，氮氣吹干。溶解殘余物，用LC-MS測定，同位素內標法定量。

2 方法比較

2.1 洗滌

《公告》中樣品用甲醇、乙醇和乙醚洗滌6次，步驟繁瑣，且經乙醚洗滌后，造成后面步驟中離心管易膨蓋，提取液灑出，影響實驗結果的準確性。

《國標》中，樣品經過10mL甲醇-水溶液（1+1）洗滌1次后，可直接酸水解衍生，步驟簡單，易操作。

2.2 衍生

雖然2種方法中加入鹽酸的濃度和衍生劑的溶劑均不同，但經試驗比較，兩者對試驗結果并沒有十分顯著的影響，均具有可操作性。

2.3 提取

《公告》方法中的樣品經提取吹干后得到清亮的復溶液，經濾膜過濾后即可上機。而《國標》方法中的樣品提取吹干后復溶液渾濁，即使按照方法中用乙腈飽和的正己烷去脂2次后，溶液任然較渾濁，不易通過濾膜，上機后對儀器有一定損傷。

2.4 流動相的選擇

比較兩種方法梯度洗脫程序，見表1，表2。《公告》方法流動相配置復雜，

且峰型不如《國標》的好，但兩種程序耗時都較長。筆者以XbridgeC182.1*150mm， 3.5μm為例比較了乙腈- 乙酸銨、甲醇- 乙酸銨兩種不同流動相對目標物離子化程度的影響。結果表明，乙腈-0.5 mmol /L 乙酸銨作為流動相時，四種代謝物的衍生物響應較為穩定[6]。在水相中不加入0.1%甲酸，也能得到較好的質譜離子化效率。因此，筆者優化了梯度洗脫程序，方案見表3。

3 小結

經過比較，《國標》方法雖然洗滌步驟比較簡單，但提取后油脂太多，難以得到清亮的待測液，對儀器有一定損傷，故建議按照《公告》的方法進行前處理。但《公告》方法的流動相及洗脫程序繁瑣耗時，建議按照筆者改進的流動相及洗脫程序進行上機分析。這樣，既可以保證檢測結果的可靠性，也可以提高工作效率。