日本血吸蟲酪蛋白激酶2α的表達、定位與免疫效果觀察*

唐 正 劉 镕 趙琴平 明珍平 鐘沁萍 蔣明森 董惠芬

武漢大學基礎醫學院人體寄生蟲學教研室，武漢 430071；#通訊作者

日本血吸蟲酪蛋白激酶2α的表達、定位與免疫效果觀察*

唐 正 劉 镕 趙琴平 明珍平 鐘沁萍 蔣明森 董惠芬#

武漢大學基礎醫學院人體寄生蟲學教研室，武漢 430071；#通訊作者

目的：克隆、表達日本血吸蟲酪蛋白激酶2α(SjCK2α)基因，并定位表達，觀察其表達產物的免疫效果。方法：首先針對SjCK2α基因的開放閱讀框設計特異性引物，以日本血吸蟲成蟲RNA逆轉錄后的cDNA為模板，擴增目的基因；并使其帶上限制性內切酶酶切位點，獲得SjCK2α的目的基因片段，回收后連入表達質粒pET28a(+)。重組質粒pET28a(+)-SjCK2α轉化入BL21細胞，構建表達菌；并用IPTG誘導表達菌的表達；用Ni-NTA樹脂純化后透析，收集重組目的蛋白。用重組蛋白免疫家兔制備多克隆血清。免疫組化法對皮膚型童蟲、肺型童蟲和常規培養肺型童蟲進行組織學定位。將重組蛋白免疫小鼠，再用日本血吸蟲尾蚴攻擊感染，6周后剖殺，灌注法收集日本血吸蟲成蟲，計算減蟲率；摘取肝臟組織剪碎、KOH消化后收集蟲卵，計算減卵率；摘取眼球取血，收集血清，ELISA檢測細胞因子干擾素γ(IFN-γ)和白細胞介素4(IL-4)的含量。另設感染對照組和化工劑對照組進行比較分析。結果：擴增的目的基因SjCK2α基因片段長度為1047bp，構建的重組質粒pET28a(+)-SjCK2α轉化入BL21細胞后，構建的表達菌在IPTG誘導下獲得大量重組蛋白，純化后免疫家兔獲得多克隆血清。免疫組化染色發現，SjCK2α主要定位于童蟲表面。將重組蛋白免疫小鼠后，攻擊感染6周后獲得15%的減蟲率和17%的減卵率，與對照組的減蟲率和減卵率差異無統計學意義(P>0.05)；此時，感染對照組的IFN-γ和IL-4含量分別為42.77±12.11和17.31±9.13，佐劑對照組的IFN-γ和IL-4的含量分別為30.99±16.55和18.65±7.52，重組蛋白免疫組的IFN-γ和IL-4的含量分別為36.19±14.56和9.90±5.20，三組間兩指標比較均無統計學差異(P>0.05)。結論：本實驗成功克隆和表達SjCK2α基因，其主要表達于童蟲表面；SjCK2α免疫小鼠后未能獲得免疫性保護。

日本血吸蟲；酪蛋白激酶2α；克隆表達；定位；免疫保護

國家自然科學基金(No.81273010)