PMA及PNA在預(yù)測2型糖尿病并發(fā)腎病變中的實用價值*

孟凡萍,郝 坡,王長本,杜紅心

(1.重慶三峽中心醫(yī)院檢驗科 404000;2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校醫(yī)學(xué)技術(shù)系 404020)

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·論 著·

PMA及PNA在預(yù)測2型糖尿病并發(fā)腎病變中的實用價值*

孟凡萍1,郝 坡2,王長本1,杜紅心1

(1.重慶三峽中心醫(yī)院檢驗科 404000;2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校醫(yī)學(xué)技術(shù)系 404020)

目的 探討血小板-中性粒細(xì)胞聚集體(PNA)、血小板-單核細(xì)胞聚集體(PMA)檢測在預(yù)測2型糖尿病并發(fā)癥中的實用價值。方法 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測2型糖尿病并發(fā)腎病變患者血漿的PMA、PNA，并以無并發(fā)癥的2型糖尿病患者和健康人作為對照，比較上述三組PMA、PNA的水平，用ROC曲線評價此試驗的臨床應(yīng)用價值。結(jié)果 2型糖尿病并發(fā)腎病變組PMA、PNA水平顯著高于無并發(fā)癥組，而后者又顯著高于健康對照。ROC曲線顯示，PMA對2型糖尿病患者并發(fā)腎病變診斷臨界值靈敏度為96.7%，特異性為100.0%，截斷點為40.12%；PNA靈敏度為96.7%，特異性為88.3%，截斷點為26.98%，可見PMA優(yōu)于PNA。曲線下面積分別為0.986和0.963。結(jié)論 PMA、PNA可以預(yù)測2型糖尿病腎病變，應(yīng)用流式細(xì)胞法檢測其靈敏度和特異性均較滿意，PMA特異性優(yōu)于PNA。

2型糖尿??； 血小板-中性粒細(xì)胞聚集體； 血小板-單核細(xì)胞聚集體； ROC曲線

2型糖尿病(T2DM)及其并發(fā)癥嚴(yán)重危害人類健康，其血糖的異常同時也參與了血小板和白細(xì)胞的功能紊亂。有研究表明，血糖升高患者體內(nèi)的血小板-白細(xì)胞聚集體(PLA)數(shù)目有明顯的增加，同時還發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用胰島素治療的2型糖尿病患者，胰島素并不能明顯地抑制活化的血小板膜表面P-選擇素(CD62P)的表達(dá)，同樣也不能抑制纖維蛋白原與單個血小板之間的連接，相反，胰島素還會增加PLA的形成概率。這就意味著PLA也同晚期糖化終末產(chǎn)物(AGE)一樣，將可能成為預(yù)測2型糖尿病并發(fā)癥進(jìn)程的指標(biāo)。本研究通過對2型糖尿病患者PLA的檢測，評價其在并發(fā)癥進(jìn)程中的預(yù)警作用，以指導(dǎo)2型糖尿病并發(fā)癥的診斷和治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年3月至2014年1月所有住院及門診60例臨床確診的2型糖尿病患者，年齡41～65歲，其中30例確診已發(fā)生腎病變，另外30例無并發(fā)癥產(chǎn)生。另選擇相同年齡段的30例健康體檢人群作為健康對照。

1.2 實驗儀器和試劑 流式細(xì)胞儀及配套的試劑(CD15，CD14，CD45，CD41a)均購自美國BD公司。

1.3 方法 陸續(xù)搜集30例臨床確診的2型糖尿病并發(fā)腎病變的患者和30例無并發(fā)癥的2型糖尿病患者，在靜息狀態(tài)下空腹抽血，EDTA抗凝，在流式細(xì)胞儀上及時檢測。另外30例健康對照者，同樣條件抽血、抗凝、檢測。用CD45/SSP設(shè)門圈出白細(xì)胞，再用CD15/CD41a檢測血小板-中性粒細(xì)胞聚集體(PNA)，用CD14/CD41a檢測血小板-單核細(xì)胞聚集體(PMA)，3個組比較，并用ROC曲線通過PNA和PMA的特異性、靈敏度及曲線下面積，評價其臨床實用價值。

2 結(jié) 果

2.1 用流式細(xì)胞儀檢測PMA和PNA的結(jié)果 2型糖尿病并發(fā)腎病變組PNA和PMA均高于無并發(fā)癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，2型糖尿病兩組的PNA和PMA都高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 血小板-白細(xì)胞聚集體檢測結(jié)果±s，%)

注：與2型糖尿病無并發(fā)癥組比較，*P<0.01；與健康對照組比較，△P<0.01。

2.2 ROC曲線評價 PMA和PNA對于2型糖尿病有無并發(fā)腎病變的結(jié)果見圖1。由圖1可知，PMA對2型糖尿病患者并發(fā)腎病變診斷臨界值靈敏度為96.7%，特異性為100.0%，截斷點為40.12%；PNA靈敏度為96.7%，特異性為88.3%，截斷點為26.98%，可見PMA優(yōu)于PNA。曲線下面積分別為0.986和0.963。見表2。

圖1 PMA和PNA評價2型糖尿病并發(fā)腎病變的ROC曲線

檢驗結(jié)果變量面積靈敏度特異性漸近95%置信區(qū)間下限上限PNA0.9630.9670.8830.9221.000PMA0.9860.9671.0000.0001.000

3 討 論

在某些病理狀態(tài)下，血小板和白細(xì)胞活化后，其表面的黏附分子表達(dá)增加，黏附分子可通過配體間相互結(jié)合和(或)纖維蛋白原作為橋接作用形成PLA。

血小板活化后，膜表面的CD62P和糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa的表達(dá)增加。CD62P是一種跨膜糖蛋白，主要存在于活化血小板的α顆粒中和內(nèi)皮細(xì)胞的Weibel-Palade小體(WPB)中，伴隨著血小板的活化，CD62P迅速定位于活化的血小板膜上。CD62P糖蛋白受體-1(PSGL-1)，也是一種跨膜糖蛋白，其作為CD62P的結(jié)合配體，幾乎表達(dá)于所有白細(xì)胞的表面。 體內(nèi)外實驗已經(jīng)證實，PSGL-1是唯一與CD62P具有高親和力的配體，且抗PSGL-1單克隆抗體可以完全阻斷血流狀態(tài)下白細(xì)胞在表達(dá)CD62P的細(xì)胞上的滾動以及靜止?fàn)顟B(tài)下白細(xì)胞與表達(dá)CD62P的細(xì)胞的黏附。活化的血小板可以通過表面的CD62P和白細(xì)胞表面的PSGL-1結(jié)合形成PLA。此外，血小板表面的GPⅡb/Ⅲa和白細(xì)胞表面的黏附受體Mac-1(CD11b/CD18)在纖維蛋白原的橋接作用下形成PLA[1]。

已有臨床研究表明，與CD62P相比，PLA尤其是PMA評價血小板活化更加敏感，PMA目前已經(jīng)成為臨床上急性冠狀動脈綜合征和冠狀動脈介入手術(shù)抗血小板治療的新興研究靶點[2]。在2型糖尿病病程進(jìn)展中，有研究表明，血糖升高患者體內(nèi)PLA的數(shù)目有明顯的增加[3]，且其可促進(jìn)機(jī)體炎癥狀態(tài)的形成[4-8]、組織因子的釋放[9-10]，同時還發(fā)現(xiàn)，胰島素治療的2型糖尿病患者，胰島素并不能明顯地抑制PLA的形成，相反會促進(jìn)其發(fā)展。這就意味著PLA將可能成為預(yù)測2型糖尿病并發(fā)癥進(jìn)程的指標(biāo)。

本研究就是對2型糖尿病并發(fā)腎病變患者的PNA、PMA水平進(jìn)行檢測，并用ROC曲線評價二者作為預(yù)測2型糖尿病并發(fā)癥指標(biāo)的臨床應(yīng)用價值。結(jié)果顯示，2型糖尿病并發(fā)腎病變組PNA、PMA水平顯著高于無并發(fā)癥組，而后者又顯著高于健康對照組。ROC曲線顯示，PMA對2型糖尿病患者并發(fā)腎病變診斷臨界值為靈敏度96.7%，特異性為100%，截斷點為40.12%，PNA靈敏度為96.7%，特異性為88.3%，截斷點為26.98%，可見PMA優(yōu)于PNA。曲線下面積分別為0.986和0.963。統(tǒng)計學(xué)表明，PNA、PMA可以預(yù)測2型糖尿病并發(fā)腎病變，且PMA更滿意。

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Practical value of PMA and PNA for predicting complicating nephropathy in type 2 diabetes mellitus*

MENGFan-ping1,HAOPo2,WANGChang-ben1,DuHong-xin1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingThreeGorgesCentralHospital,Chongqing404000,China; 2.DepartmentofMedicalTechnique,ChongqingThreeGorgesMedicalCollege,Chongqing404020,China)

Objective To evaluate the practical value of the platelet-monocyte aggregates(PMA) and platelet-neutrophils aggregates(PNA) detection in predicting the complications of type 2 diabetes mellitus(T2DM).Methods Plasma PMA and PNA were detected in 90 cases of T2DM complicating nephropathy,30 cases of T2DM without complications and 30 healthy persons as the control.The PMA and PNA levels were compared among 3 groups and the clinical application value of this experiment was evaluated by the ROC curves.Results The plasma PMA and PNA levels in the T2DM complicating nephropathy were significantly higher than that in the T2DM without complications group,and which in the latter were significantly higher than those in the healthy controls.The ROC curves indicated that the critical values of PMA for diagnosing T2DM complicating nephropathy were the sensitivity of 96.7%,specificity of 100.0% and cut off point of 40.12%,which of PNA were the sensitivity of 96.7%,specificity of 88.3% and cut off point of 26.98%,showing that PMA was superior to PNA.The area under the curve(AUC) was 0.986 and 0.963 respectively.Conclusion PMA and PNA can be used to predict the complicating renal lesion inT2DM,the sensitivity and specificity by using the flow cytometry for detecting PNA and PMA are more satisfactory,but the specificity of PMA is better than that of PNA.

PMA; PNA; type 2 diabetes mellitus; ROC curves

重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研計劃項目(2011-2-414)；重慶市萬州區(qū)科技計劃項目(201203061)。

孟凡萍，女，主管檢驗師，在讀博士，主要從事脂代謝和2型糖尿病并發(fā)癥方面研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.010

A

1672-9455(2015)02-0164-02

2014-03-27

2014-10-06)