腎移植術后T淋巴細胞亞群和NK細胞百分比參考范圍的研究*

魏 麗,刁宏燕,吳 煒,汪超軍，李蘭娟

(浙江大學醫學院附屬第一醫院傳染病診治國家重點實驗室/

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·論 著·

腎移植術后T淋巴細胞亞群和NK細胞百分比參考范圍的研究*

魏 麗,刁宏燕,吳 煒,汪超軍△，李蘭娟

(浙江大學醫學院附屬第一醫院傳染病診治國家重點實驗室/

感染性疾病診治協同創新中心,杭州 310003)

目的 初步建立腎移植患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的百分比參考范圍。方法 67例健康對照組、169例腎移植患者于腎移植手術后1周清晨采集外周血，用流式細胞儀檢測T淋巴細胞亞群和NK細胞百分比。同時按年齡段劃分為3組進行統計：≤30歲(青年組)、31～49歲(中年組)、≥50歲(老年組)。結果 (1)建立了腎移植術后T淋巴細胞亞群和NK 細胞百分比的參考范圍：CD3+56.80%～64.54%；CD4+30.82%～36.43%；CD8+23.45%～27.32%；CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35～1.68； NK 6.04%～8.35%。(2)腎移植術后不同性別間的T 淋巴細胞亞群和NK細胞差異無統計學意義(P>0.05)。(3)腎移植術后不同年齡間的T 淋巴細胞亞群和NK細胞差異有統計學意義(P<0.05)：與老年組比較，青年組和中年組腎移植術后CD8+細胞百分比明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。結論 初步建立了腎移植術后的T淋巴細胞亞群和NK 細胞的參考范圍，同時發現腎移植術后隨年齡增長CD8+細胞百分比降低，而CD3+CD4+/CD3+CD8+升高。

腎移植； 術后； T淋巴細胞亞群； 參考范圍

腎移植是治療中末期腎病的有效手段，而移植后的機體免疫狀態對移植腎的功能影響很大，目前尚無有效的評估技術。T淋巴細胞亞群和NK細胞作為臨床判斷患者狀態的一個敏感指標，對臨床治療具有重要意義。腎移植術后的免疫狀態與健康人不同，而目前尚無腎移植術后T淋巴細胞亞群和NK細胞的參考標準，本文旨在探討腎移植患者術后淋巴細胞亞群和NK細胞的參考范圍和不同年齡組的細胞免疫狀況，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部腎移植病例為2013年1～12月在本院腎內科住院患者，均為首次尸體腎移植受者，共169例，其中男114例，女55例，年齡10～66歲。年齡段劃分：≤30歲(青年組)52例、31～49歲(中年組)83例、≥50歲(老年組)34例。所有研究病例均于術后采用驍悉、FK506、強的松三聯抗排異治療，均于接受腎移植術后1周康復出院。健康對照組67例，其中男34例，女33例，均為體檢健康的人員，年齡10～68歲。

1.2 方法 腎移植手術后1周清晨采取靜脈血2 mL(乙二胺四乙酸抗凝)并立即檢測。采用三色流式細胞術對T淋巴細胞亞群和NK細胞進行分析檢測[1]。其中，檢測T淋巴細胞亞群抗體采用PerCP標記小鼠抗人CD3、FITC標記小鼠抗人CD4、PE標記小鼠抗人CD8單克隆抗體，檢測NK細胞(CD3+CD16/56+)抗體采用FITC標記小鼠抗人CD3，PE標記小鼠抗人CD16/56單克隆抗體。T淋巴細胞亞群抗體為美國BD公司產品，NK細胞(CD3+CD16/56+)為美國Beckman Coulter公司產品，儀器為美國Beckman Coulter FC500型流式細胞儀。

1.3 統計學處理 應用統計軟件SPSS17.0對數據進行統計分析，經檢驗淋巴細胞亞群和NK細胞百分比符合正態分布，以均數、95%建立淋巴細胞亞群和NK細胞的正常參考范圍，不同性別間淋巴細胞亞群和NK細胞的比較采用獨立標本t檢驗，各年齡組淋巴細胞亞群和NK細胞組間比較采用單因素方差檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同性別腎移植患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞的差別無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同性別腎移植患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞數據的構成 ±s)

2.2 腎移植患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞的正常參考范圍，見表2。

2.3 各年齡組外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞數據的分布，見表3。由表3可見，與老年組比較，青年組和中年組腎移植術后CD8+細胞百分比明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)；與健康對照組比較，腎移植患者CD3+細胞百分比、CD8+細胞百分比、NK細胞百分比明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。

表2 腎移植患者T淋巴細胞亞群、NK細胞的正常參考范圍

表3 各年齡組外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞數據的比較 ±s)

注：與老年組比較，*P<0.05，**P<0.01；與健康對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3 討 論

T淋巴細胞是參與細胞免疫和免疫調控的樞紐，T淋巴細胞亞群的動態平衡是維持機體免疫自穩的重要因素[2]。同時T淋巴細胞亞群的變化反映了人體細胞免疫功能的改變，應用流式細胞術能快速、準確地檢測淋巴細胞亞群，并及時、準確地判斷病情，評價治療效果[3-5]。NK細胞具有抗腫瘤，抗病毒感染，抗器官移植，參與T淋巴細胞、B淋巴細胞的調節及其免疫調節的功能。NK細胞通過受體作用維持平衡、發揮殺傷效應[6-7]。

同時，人體免疫狀態中年齡也是一重要因素[8]，有報道兒童外周血T淋巴細胞高于成人[9]，本文研究亦發現腎移植術后CD3+CD8+細胞百分比隨年齡的增長呈下降趨勢。青年組、中年組CD3+CD8+細胞百分比明顯高于老年組，提示腎移植年輕患者細胞免疫功能活躍，老年患者機體本身免疫低下，細胞免疫反應降低。

本文研究發現，與健康對照組比較，腎移植患者CD3+細胞百分比、CD8+細胞百分比、NK細胞百分比明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)，可見以健康人的標準難以準確評估腎移植患者術后的免疫狀態。本文在此基礎上建立了腎移植術后的參考范圍：CD3+56.80%～64.54%，CD4+30.82%～36.43%，CD8+23.45%～27.32%，CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35～1.68，NK 6.04%～8.35%，以期為臨床診斷和治療提供更準確的參考。

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Study on reference values of T-lymphocyte subsets and NK cell percentage after renal transplant operation*

WEILi,DIAOHong-yan,WUWei,WANGChao-jun△,LILan-juan

(StateKeyLaboratoryforDiagnosisandTreatmentofInfectiousDisease,FirstAffiliatedHospital,CollegeofMedicine,ZhejiangUniversity/CollaborativeInnovationCenterforDiagnosisandTreatmentofInfectiousDiseases,Hangzhou,Zhejiang310003,China)

Objective To preliminarily establish the reference values of peripheral blood T-lymphocyte subsets and NK cell percentage in renal transplant patients.Methods Peripheral blood was collected from 67 cases of control and 169 cases of renal transplant in the early morning at postoperative 1 week.T-lymphocyte subsets and NK cell percentage were detected by the flow cytometry.169 patients with renal transplant were divided into three groups according to age section for conducting statistics:≤30 years old(youth group),31-49 years old(middle age group) and ≥50 years old(older age group).Results (1)The reference values of T-lymphocyte subsets and NK cell percentage were established:CD3+:56.80%-64.54%;CD4+:30.82%-36.43%;CD8+:23.45%-27.32%;CD3+CD4+/CD3+CD8+:1.35%-1.68%;NK:6.04%-8.35%.(2) T-lymphocyte subsets and NK cell percentage showed no statistical differences between genders(P>0.05).(3) T-lymphocyte subsets and NK cell percentage showed statistical differences among different ages(P<0.05).Compared with the older age group,the level of CD8+in the youth group and the middle age group was significantly increased,while CD3+CD4+/ CD3+CD8+was significantly decreased(P<0.01).Conclusion The reference values of T lymphocyte subsets and NK cell percentage in renal transplant patients are preliminarily established.Meanwhile it is found that the level of CD8+is decreased with the age increase after renal transplant,while CD3+CD4+/CD3+CD8+is increased.

renal transplantation; postoperation; T-lymphocyte subsets; reference values

浙江省錢江人才計劃資助項目(2012R10G2010210)。

魏麗，女，實驗員，碩士，主要從事臨床流式檢測工作。△

，E-mail:wangchaojundf@hotmail.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.006

A

1672-9455(2015)02-0155-02

2014-06-05

2014-11-13)