HPLC法測定依托度酸膠囊的含量

王增日

（魯南制藥集團股份有限公司，山東臨沂276000）

HPLC法測定依托度酸膠囊的含量

王增日

（魯南制藥集團股份有限公司，山東臨沂276000）

目的建立高效液相色譜法測定依托度酸膠囊中依托度酸含量的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；乙腈：水＋磷酸［520∶480（500＋0.25）］為流動相，流速1.5 mL·min－1，檢測波長為274 nm。結果在選定的色譜條件下依托度酸膠囊中輔料對主藥無干擾，依托度酸在24.98～199.8μg·m L－1濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好，相關系數r＝0．999 9，平均回收率為99．6%，RSD為0．47%（n＝9）。結論本方法簡便、準確，專屬性強，可用于依托度酸膠囊中依托度酸的含量測定。

依托度酸；高效液相色譜法；含量測定；膠囊

1985年，依托度酸由Wyeth Pharms Inc（惠氏制藥公司）首次在英國上市，隨后在美國等國上市，其上市劑型為片、膠囊（200～500 mg），緩釋片（400～500 mg）［1］。依托度酸為非甾體抗炎藥，具有抗炎、解熱和鎮痛作用。其作用機理可能是通過阻斷環氧合酶的活性，從而抑制了前列腺素（PG）的合成。本品為非類固醇抗炎藥（NSAIDs），作為鎮痛及消炎藥，其療效可與阿司匹林、其他鎮痛藥及許多目前最常用的處方用NSAIDs相比［2］。文獻有報道［3～7］，用紫外分光光度法測定依托度酸片半成品的含量，依托度酸緩釋片含量及其甲基衍生物的高效液相色譜（HPLC）法測定，HPLC法測定依托度酸雙層片中主藥的含量，HPLC法測定依托度酸及其在大鼠的藥動學，HPLC法測定依托度酸緩釋片中的有關物質，有關依托度酸血藥濃度測定研究國外有報道［8～11］，作者未見有HPLC法測定依托度酸膠囊的文獻。本試驗采用HPLC法測定依托度酸膠囊含量，方法簡便、專屬性強，結果準確，制劑中的輔料對分離無影響。

1 儀器、試藥及試劑

Agilent1100高效液相色譜儀；VWD檢測器；Mettler Toledo AG285電子天平；JCX－600GZ超聲波清洗機；依托度酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100667－200401，含量：100.0%）；依托度酸膠囊200 mg樣品（山東新時代藥業有限公司，批號：012110601、012110602、012110603）；乙腈為色譜純，磷酸為分析純，試驗用水為二次蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 溶液配制

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6mm×150 mm，5μm）；乙腈：水＋磷酸［520∶480（500＋0.25）］為流動相，流速1.5 mL·min－1，檢測波長為274 nm，進樣量20μL。

2.1.2 溶液制備 對照品溶液的制備：精密稱取依托度酸對照品25 mg，置100 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使依托度酸溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成含依托度酸0.25 mg·mL－1的溶液，作為對照品儲備溶液。精密量取儲備液2 mL，置5 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得含依托度酸0.10 mg·mL－1的對照品溶液。

供試品溶液的制備：取依托度酸膠囊內容物，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于依托度酸10 mg），置100 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使依托度酸溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

空白溶液：按處方量取除主藥成分的輔料，按供試品溶液制備方法制備，作為空白溶液。

2.2 系統適用性試驗 精密量取“2.1.2”項下對照品溶液，理論塔板數不低于2 000，分離度均大于1.5。

2.3 空白試驗 取供試品溶液、對照品溶液和空白溶液，按上述色譜條件進行測定，供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致，且空白輔料無干擾，見圖1。

圖1 HPLC色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液

2.4 線性關系 精密吸取對照品儲備溶液0.5、1.0、2.0、3.0和4.0 mL，分別置5 mL量瓶中，再分別加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣。以依托度酸濃度（μg·mL－1）為橫坐標，依托度酸峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y＝70．951X＋143．66，r＝0．999 9。其中，Y為依托度酸峰面積，X為依托度酸濃度（μg·mL－1）。結果指出在24.98～199.8μg·mL－1濃度范圍內有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取同一對照品溶液，按上述試驗條件，同日內測定6次，依托度酸的峰面積的RSD為0.43%。連續5 d（每天進樣1次）進行測定，依托度酸的峰面積的RSD為0.77%。

2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，按上述試驗條件于配制后0、2、4、6、8 h測定，依托度酸的峰面積的RSD為0.49%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.7 重復性試驗 對同一批號樣品分別取樣6份，按“2.1.2”項下方法配制6份供試品溶液，分別按上述試驗條件測定，按外標法以依托度酸峰峰面積計算含量，含量結果的RSD為0.53%。

2.8 回收率試驗 按處方量取高（120%）、中（100%）、低（80%）3種濃度的依托度酸對照品，每個濃度分別稱3份均加入處方量輔料，制成供試樣品，按“2.1.2”項下方法配制供試品溶液。分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件，測得回收率為99.6%，RSD＝0．47%（n＝9）。

2.9 樣品含量測定 取本品3批，按“2.1.2”項下制備供試品溶液并按上述試驗條件測定，計算依托度酸膠囊中依托度酸的含量。結果見表1。

表1 樣品結果測定結果

3 討論

本文建立了HPLC法測定依托度酸膠囊含量的方法，依托度酸在225 nm、274 nm處有最大吸收，且在274 nm處輔料沒有干擾，故檢測波長定為274 nm，對測定沒有影響，保證了方法的專屬性。

［1］ 徐梅桔，方曉萍，史磊.高效液相色譜法測定依托度酸的含量［J］.廣東化工，2013，40（5）：19－20.

［2］ 朱孫祥，余良水.高效液相色譜法測定依托度酸的含量［J］.科技創新導報，2009，10：1.

［3］ 李宋平.紫外分光光度法測定依托度酸片半成品的含量［J］.廣東藥學院學報，2000，16（2）：111－112.

［4］ 黃志紅，方原.依托度酸緩釋片含量及其甲基衍生物的HPLC法測定［J］.中國醫藥工業雜志，2001，32（4）：167－169.

［5］ 吳國民.HPLC法測定依托度酸雙層片中主藥的含量［J］.現代醫藥衛生，2010，26（4）：483－484.

［6］ 石勁敏，許長江，段更利，等.高效液相色譜法測定依托度酸及其在大鼠的藥動學［J］.中國新藥與臨床雜志，2002，21（4）：193－196.

［7］ 楊婉花.高效液相色譜法測定依托度酸緩釋片中的有關物質［J］.中國藥房，2005，16（17）：1330－1332.

［8］ Cosyns L，Spain M.Kraml M.Sensitive high－performance liquid chromatographic method for the determination of etodolac in serum［J］.JPharm Sci，1983，72（3）：275－277.

［9］ Jamali F，Mehvar R.Lemko C，et al.Application of stereospecific high－performance liquid chromatography assay to a pharmacokineti study of etodolac enantiomers in humans［J］.JPharm Sci，1988，77（11）：963－966.

［10］Becker－Scharfenkamp U，Blaschke G.Evaluation of the stereoselective metabolism of the chiral analgesic drug etodolac by high－performance liquid chromatography［J］.JChromatogr，1993，621（2）：199－207.

［11］Molina－Martinez IT，Herrero R，Gutiérrez JA，et al.Bioavailability and bioequivalence of two formulations of etodolac（tablets and suppositories）［J］.J Pharm Sci，1993，82（2）：211－213.

Determ ination of etodolac in Etodolac Capsules by HPLC

WANG Zeng-ri
（Lunan Pharmaceutical Group Limited Company，Linyi276000，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of etodolac in Etodolac Capsules.MethodsHPLCmethod was adopted with Diamonsil C18column（4.6 mm×150 mm，5μm）.A mixture of acetonitrile：water＋phosphoric acid［520∶480（500＋0.25）］was used as themobile phase.The flow rate was 1.5 mL·min－1with the detection wavelength at274 nm.ResultsAt the validatedmethod，the excipienthad no interference to the principalagent.A linear range of etodolac was 24.98～199.8μg·mL－1（r＝0.999 9）.The average recovery was 99.6%with RSD＝0．47%（n＝9）.ConclusionThismethod was simple，accurate，specific and could be used for the determination of etodolac in Etodolac Capsules.

Etodolac；HPLC；Determination；Capsule

R927.2

A

2095－5375（2015）08－0451－003

王增日，男，工程師，研究方向：藥物研發與注冊，E－mail：1157014084＠qq.com