轉移抑制蛋白1及上皮鈣黏蛋白E在非肌層浸潤性膀胱癌中的作用

陳懷安，王 哲，苗文隆，張 瑛，蘇宏偉，劉 碩

（河北北方學院附屬第一醫院泌尿外科，河北 張家口075000）

非肌層浸潤性膀胱癌（non-muscle invasive bladder cancer，NMIBC）占膀胱腫瘤患者的3／4以上，臨床治療以手術切除及術后化療為主［1］。研究發現NMIBC較其他癌腫的術后復發率高［2］。因此，尋找滿意的觀察指標顯得尤為重要。本研究探討轉移抑制蛋白1（metastasis suppressor protein 1，MTSS1）及上皮鈣黏蛋白E（E-cadherin）表達與NMIBC凋亡及預后的關系，旨在為膀胱癌患者臨床治療及判斷預后提供資料。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2007年1月—2008年2月就診于我院泌尿外科的NMIBC患者63例，所有患者均在術中取膀胱肌層組織經病理檢查確診。腫瘤直徑≤3cm 31例，＞3cm 32例。腫瘤發生部位：前壁14例，后壁9例，膀胱三角區18例，兩側壁22例。根據免疫組織化學分子細胞學檢查分成A、B、C、D 4組。A 組：E-cadherin（＋）、MTSS1（-）15例，男性8例，女性7例，年齡59～94歲，平均（68.2±4.6）歲；病程4個月～16年，平均（8.2±1.4）年。B組：E-cadherin（-）、MTSS1（＋）17例，男性10例，女性7例，年齡62～95歲，平均（68.6±4.7）歲；病程3個月～17年，平均（8.4±1.2）年。C組：E-cadherin（＋）、MTSS1（＋）15例，男性11例，女性4例，年齡61～93歲，平均（67.9±4.2）歲；病程2個月～17年，平均（8.4±1.1）年。D組：E-cadherin（-）、MTSS1（-）16例，男性8例，女性8例，年齡60～96歲，平均（68.6±4.5）歲；病程3個月～17年，平均（8.3±1.6）年。膀胱肌層標本在10%福爾馬林液下制作標本并封閉，備用。每個標本均制作3份，1份進行HE染色處理，其他2份進行免疫組織化學染色（SP法）。

1.2 手術方法 所有患者均接受膀胱腫瘤切除手術。在硬膜外麻醉下使用100mL 5%葡萄糖溶液灌注膀胱至其充盈狀態，使用膀胱鏡進入尿道檢查腫瘤大小、數目、位置、形態等。在電視成像系統下電氣化切除膀胱腫瘤的瘤體和基底部，切除范圍需深達淺肌層。電切除膀胱腫瘤附近1cm處的正常黏膜組織，術中取膀胱腫瘤肌層組織送病理檢查，使用沖洗器沖洗血塊和組織碎塊。術后留置三腔導尿管進行持續沖洗，每周使用50mg吡柔比星灌注膀胱。

1.3 免疫組織化學分析 采用美國SANTA CRUZ生物技術有限公司生產的MTSS1兔多克隆抗體檢測MTSS1表達，采用美國ZYMED公司生產的鼠抗人E-cad單克隆抗體檢測E-cadherin表達，HECD-1效價1∶10。免疫組織化學所用一抗及ELIVISON試劑盒（PV-9000）和二氨基聯苯胺酶底物顯色試劑盒均購自北京中山生物技術有限公司。操作步驟嚴格按照試劑盒說明進行。

1.4 觀察指標及評價標準 取患者癌腫組織進行免疫組織化學分析，觀察MTSS1及E-cadherin在NMIBC腫瘤組織的表達程度。每個標本制作2份切片，切片計數3個視野（400倍），以視野內待檢陽性細胞數＞100為明顯陽性（＋＋），0～100為陽性（＋），視野內無陽性待檢細胞為陰性（-）。隨訪術后1年復發率及5年存活率。

1.5 統計學方法 應用SPSS16.0統計學軟件進行數據處理。計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；危險因素采用Cox回歸分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 術后1年復發率、5年生存率比較 C組1年復發率最低僅13.33%，5年生存率最高達93.33%；D組1年復發率最高達68.75%，5年生存率最低僅12.50%；A、B組1年復發率和5年生存率介于C、D組之間，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。2.2 不同臨床特征間MTSS1及E-cadherin表達比較 復發者MTSS1和E-cadherin陽性表達高于未復發者（P＜0.01）；病理分級G3期 MTSS1和E-cadherin陽性表達高于G1～G2期（P＜0.01）；不同性別、年齡、進展情況、腫瘤大小、腫瘤數目間MTSS1和E-cadherin陽性表達差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 Cox回歸分析 以MTSS1（0=陰性，1=陽性）及E-cadherin（0=陰性，1=陽性）為因變量，以各臨床指標為自變量（性別：0=男性，1=女；年齡：0=≤60歲，1=＞60歲；進展情況：0=否，1=是；腫瘤大小：0=≤3cm，1=＞3cm；腫瘤數目：0=單發，1=多發；復發：0=否，1=是；病理分級：0=G1～G2，1=G3），進行Cox回歸分析，結果顯示復發和病理分級是MTSS1及E-cadherin陽性的危險因素（P＜0.01），見表3。

表1 4組術后1年復發率、5年生存率比較Table 1 Comparison of postoperative one year recurrence rate，five year survival rate among four groups（例數，%）

表2 不同臨床特征間MTSS1及E-cadherin表達比較Table 2 Comparison of clinical characteristics between MTSS1and E-cadherin expression（例數，%）

表3 MTSS1及E-cadherin與NMIBC臨床特征情況多因素Cox回歸分析結果Table 3 Multiple factor Cox regression analysis on clinical characteristics of MTSS1，E-cadherin and NMIBC

3 討 論

膀胱癌為泌尿科常見惡性腫瘤，也是全身十大癌癥疾病之一，占我國泌尿生殖系腫瘤發病率首位，在西方膀胱癌僅次于前列腺癌。我國2012年調查發現膀胱癌居于惡性腫瘤第9位并有提升趨勢。該病發病年齡處于任何年齡層，甚至包括兒童在內。但膀胱癌發病率與年齡成正比，高發人群發病年齡在50～70歲之間，且男性高于女性。膀胱癌的病因復雜，既有內在的遺傳因素，又有外在的環境因素。較為明確的兩大致病危險因素是吸煙和職業接觸芳香胺類化學物質。吸煙是目前最為肯定的膀胱癌致病危險因素，30%～50%的膀胱癌由吸煙引起，吸煙可使膀胱癌危險率增加2～6倍，隨著吸煙時間的延長，膀胱癌的發病率也明顯增高。膀胱癌臨床手術效果不徹底，復發率較高，首次術后復發率可達80%以上，其中NMIBC經電切術后復發可高達90%以上［3］。

MTSS1對于膀胱癌的影響主要作用于癌腫轉移階段，該蛋白通過過量增殖抑制細胞的生長和黏附［4］。其是否直接作用于腫瘤細胞，抑制其轉移目前機制不明。也有學者認為MTSS1可能與Rac等因子協同形成某直接蛋白，影響癌細胞轉移；MTSS1蛋白與NMIBC的細胞增殖、組織生長、轉移及凋亡存在明顯的相關性；該蛋白還與NMIBC的分期及復發有關［5-6］。E-cadherin是一種糖蛋白，主要在細胞間建立一種黏附機制，從而調節細胞間的聚集和連接［7-8］。其發揮作用的機制主要是與鈣離子特異性結合，增強細胞的黏附性［9］。NMIBC的增殖、侵襲與E-cadherin關系密切，若E-cadherin缺失，腫瘤細胞將無限增殖，出現組織渙散、侵襲性增加、腫瘤組織加速轉移［10-11］。在正常組織中，E-cadherin表達率為100%，腫瘤組織的分化程度越差，E-cadherin的缺失程度越高［12］。

本研究C組1年復發率最低，5年生存率最高；D組1年復發率最高，5年生存率最低；A、B組1年復發率和5年生存率介于C、D組之間。表明MTSS1和E-cadherin表達越高，NMIBC患者術后預后越好。Cox回歸分析顯示復發和病理分級是MTSS1和E-cadherin陽性的危險因素（P＜0.01），MTSS1和E-cadherin有望成為NMIBC術后治療和判斷預后的新型靶向研究目標。

腫瘤發生發展過程中，重要的始動因素是腫瘤因子，這對于臨床進行靶向治療，抑制腫瘤細胞分化、生長、黏附、凋亡的全過程均可發揮相當重要的作用［13-14］。MTSS1和E-cadherin均與膀胱癌的侵襲及凋亡呈負相關，表達降低是癌細胞發生惡化的重要分 子 生 物 學 基礎［15-17］。所以，通 過 檢 測MTSS1和E-cadherin的表達對于臨床進一步判斷病情十分關鍵。

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