卵巢癌患者血清胸苷激酶1水平及其臨床意義

趙儷梅　傅亞均　陳勇

[摘要] 目的 探討卵巢癌患者血清胸苷激酶1（TK-1）水平及其臨床意義。 方法 研究2010年3月～2014年6月重慶市北部新區(qū)第一人民醫(yī)院及重慶市西南醫(yī)院就診的初治卵巢癌患者116例（卵巢癌組），選擇同期卵巢良性腫瘤患者54例（卵巢良性腫瘤組）及健康體檢者56例（健康對(duì)照組）。記錄三組一般情況、臨床特征等資料，采集血清檢測(cè)TK-1及CA125水平。對(duì)接受治療患者定期隨訪，觀察無(wú)進(jìn)展生存情況。對(duì)影響無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間的危險(xiǎn)因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。采用Pearson和Spearman系數(shù)進(jìn)行各指標(biāo)間的相關(guān)性分析。 結(jié)果 卵巢癌組患者TK-1[（4.89±1.85）pmol/L]及CA125[（647.08±208.83）pmol/L]水平顯著高于卵巢良性腫瘤組[（0.59±0.23）、（22.71±9.62）pmol/L]及健康對(duì)照組[（0.61±0.20）、（22.11±9.94）pmol/L]，且臨床分期越高TK-1水平越高，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者TK-1較無(wú)轉(zhuǎn)移更高（均P < 0.01）。血清TK-1與CA125水平及臨床分期呈正相關(guān)（r = 0.657、0.567，均P < 0.01）。初始高TK-1水平（≥4.00 pmol/L）患者遠(yuǎn)期（30個(gè)月）無(wú)進(jìn)展生存比率較低TK-1水平（<4.00 pmol/L）患者更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.011）。臨床分期、初始CA125及TK-1水平是無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間的負(fù)性影響因素。 結(jié)論 卵巢癌患者血清TK-1顯著升高，與臨床分期及CA125水平相關(guān)。初始高TK-1水平預(yù)示預(yù)后較差，高臨床分期、初始高CA125及TK-1水平影響治療后無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間。

[關(guān)鍵詞] 卵巢癌；胸苷激酶1；糖類(lèi)抗原125；預(yù)后

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）02（b）-0039-05

[Abstract] Objective To investigate the serum thymidine kinase 1 （TK-1） level and its clinical significance of patients with primaryovarian cancer. Methods The research included 116 patients with ovarian cancer （ovarian cancer group）from March 2010 to June 2014 in the First People's Hospital of Chong Qing New North Zone and Southwest Hospital of Chongqing， while the 54 patients with ovarian benign tumor （ovarian benign tumor group） and 56 cases of healthy control （healthy controls group）were selected. The general situation， clinical manifestations of three groups were recorded and levels of serum TK-1 and CA125 were detected. Patients with treatment were followed up regularly， and the risk factors of progression-free survival time were analyzed with Logistic regression. The correlation between the indexes were analyzed by Pearson and Spearman coefficient. Results The levels of TK-1 [（4.89±1.85） pmol/L] and CA125 [（647.08±208.83） pmol/L] of patients in the ovarian cancer group were significantly higher than those in the ovarian benign tumor group [（0.59±0.23）， （22.71±9.62） pmol/L] and healthy control group [（0.61±0.20）， （22.11±9.94） pmol/L]. The TK-1 levels were higher in patients with advanced clinical stageor and distant metastasis than others （all P < 0.01）. The level of TK-1 was significant positive correlation with CA125 level and clinical stage （r = 0.657， 0.567， all P < 0.001）. The long-term （about 30 months）progression-free survival rate of patients with initial high level of TK-1 （≥4.00 pmol/L）was lower than that of the low level （<4.00 pmol/L）， the difference was statistically significant （P = 0.011）. Clinical stage， initial levels of CA125 and TK-1 were negative risk factors of progression-free survival time. Conclusion There is significant increase of serum TK-1 level in ovarian cancer patients， and it is related to the CA125 level and clinical stage. Initial high TK-1 level predicts poor prognosis. Advanced clinical stage， the initial high level of CA125 and TK-1 affect progression-free survival time after treatment.

[Key words] Ovarian cancer； Thymidine kinase 1； Carbohydrate antigen 125； Prognosis

卵巢癌是臨床上常見(jiàn)的婦科生殖系統(tǒng)腫瘤，病理類(lèi)型復(fù)雜多樣，早期診斷困難，病死率高。每年全球約有超過(guò)22萬(wàn)女性發(fā)生卵巢癌，美國(guó)每年約新增22 500例，病死約14 600例，病死率高達(dá)67.7%[1]。卵巢癌早期與晚期預(yù)后差異巨大，且早期缺乏典型臨床癥狀及特異性診斷方法，導(dǎo)致大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是中晚期。同時(shí)，治療后復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移也是導(dǎo)致臨床上患者死亡的最重要原因。糖類(lèi)抗原125（carbohydrateantigen，CA125）是目前臨床應(yīng)用最廣，公認(rèn)的用于卵巢癌患者診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)的血清腫瘤學(xué)標(biāo)志物[2]。然而CA125的準(zhǔn)確性仍不夠理想，假陽(yáng)性率較高，臨床上亟需尋找更為準(zhǔn)確的指標(biāo)或聯(lián)合指標(biāo)來(lái)改進(jìn)對(duì)卵巢癌的診斷及預(yù)后判斷。人胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK-1）是參予DNA合成的關(guān)鍵酶之一，是嘧啶補(bǔ)救合成DNA的關(guān)鍵，與腫瘤細(xì)胞增殖密切相關(guān)[3]。大量的研究顯示，TK-1在多種惡性腫瘤性疾病（如腎癌、急性白血病、胃癌、乳腺癌等）中都有過(guò)度表達(dá)，是重要的臨床診斷及預(yù)后指標(biāo)[4-5]。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)卵巢癌患者血清TK-1并以CA125作為對(duì)照，長(zhǎng)期隨訪患者，探討TK-1水平差異的臨床意義。現(xiàn)報(bào)道如下：

1資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析2010年3月～2014年6月重慶市北部新區(qū)第一人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）及重慶市西南醫(yī)院診斷為卵巢癌的初治女性患者116例（卵巢癌組）。卵巢癌患者均經(jīng)由組織活檢病理確診。患者臨床分期及病理分型按照最新的國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)（FIGO）制訂的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[6]。患者的臨床分期情況：Ⅰ期13例（11.2%），Ⅱ期26例（22.4%），Ⅲ期29例（25.0%），Ⅳ期48例（41.4%）。病理分型情況：漿液性囊腺癌70例（60.3%），黏液性囊腺癌21例（18.1%），子宮內(nèi)膜樣癌10例（8.6%），透明細(xì)胞癌7例（6.0%），惡性畸胎瘤4例（3.4%）及分類(lèi)不明型卵巢癌4例（3.4%）。同時(shí)納入我院經(jīng)影像或組織活檢確診良性卵巢腫瘤女性患者54例（良性腫瘤組），健康體檢者56例（健康對(duì)照組）。良性卵巢腫瘤患者病理分型情況：漿液性囊腺瘤14例（25.9%），黏液性囊腺瘤8例（14.8%）、卵巢巧克力囊腫7例（13.0%），畸胎瘤13例（24.1%）及其他類(lèi)型卵巢良性腫瘤12例（22.2%）。本研究（病歷資料及標(biāo)本使用）經(jīng)由我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有檢測(cè)項(xiàng)目在檢測(cè)時(shí)均向患者進(jìn)行了告知并知情同意。

1.2 血清TK-1及CA125檢測(cè)

良性腫瘤組及健康對(duì)照組于就診或體檢時(shí)采集靜脈血，卵巢癌組患者于首次住院時(shí)采集空腹靜脈血，離心分離血清，凍存于-20℃冰箱備用。血清TK-1的檢測(cè)使用人可溶性TK-1酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司），檢測(cè)方法按照試劑盒相關(guān)步驟進(jìn)行（每份血清標(biāo)本設(shè)置2個(gè)復(fù)孔），使用酶標(biāo)儀（Scientific Multiskan FC，Thermo公司）進(jìn)行定量檢測(cè)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算單孔TK-1濃度，患者血清TK-1濃度由復(fù)孔檢測(cè)濃度取平均值。血清CA125測(cè)定使用電化學(xué)發(fā)光法，使用COBAS6000（羅氏）電化學(xué)發(fā)光生化免疫分析儀檢測(cè)，試劑為配套試劑。

1.3 患者臨床資料收集及隨訪

初次就診時(shí)采集患者一般情況及臨床檢測(cè)信息，住院進(jìn)行B超、CT或病理活檢確定腫瘤臨床分期及病理類(lèi)型。所有接受治療患者均進(jìn)行定期門(mén)診及電話隨訪，根據(jù)臨床查體、B超、CT、實(shí)驗(yàn)室檢查等方式了解患者治療效果及腫瘤復(fù)發(fā)情況，記錄患者失訪情況。無(wú)進(jìn)展生存期定義為患者手術(shù)或藥物治療后腫瘤無(wú)復(fù)發(fā)、增大及遠(yuǎn)處（淋巴結(jié)）轉(zhuǎn)移。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，GraphPad Prism 5.0軟件繪圖。符合正態(tài)分布計(jì)量資料的均數(shù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的改用中位數(shù)或四分位數(shù)間距表示，兩組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)（秩和檢驗(yàn)）；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson和Spearman；生存曲線分析使用Log-rank（Mantel-Cox）檢驗(yàn)；影響預(yù)后因素分析使用多因素Logistic回歸。以P < 0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般情況及血清TK-1及CA125水平

各組患者年齡、體重指數(shù)（BMI）、絕經(jīng)情況、吸煙及飲酒情況之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具可比性。卵巢癌組患者血清TK-1水平高于良性腫瘤組及健康對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.01）。卵巢癌組患者血清CA125水平也高于良性腫瘤組及健康對(duì)照組。見(jiàn)表1。

2.2 不同臨床資料卵巢癌患者血清TK-1及CA125水平

不同臨床資料卵巢癌患者TK-1及CA125水平結(jié)果為：臨床分期為Ⅳ期時(shí)TK-1及CA125最高，不同病理分型中漿液性囊腺癌患者TK-1及CA125最高，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者TK-1及CA125高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。根據(jù)是否已絕經(jīng)、有飲酒史及吸煙史區(qū)分的患者之間TK-1及CA125水平相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

3 討論

TK-1是一類(lèi)在細(xì)胞周期循環(huán)中發(fā)揮重要作用的蛋白，正常生理狀態(tài)下，TK-1主要表達(dá)于成人的高增殖細(xì)胞（再生的肝組織）或胎兒組織（骨髓、脂肪組織）中。TK-1的分子量約為25 kD，在血液循環(huán)中主要以四聚體形式存在，而且在低溫環(huán)境下活性及濃度十分穩(wěn)定（超過(guò)5年）[7]。人TK-1組要參予調(diào)控細(xì)胞周期中的S期（DNA合成期），與細(xì)胞分類(lèi)增殖密切相關(guān)，其生物學(xué)功能的發(fā)揮也主要依靠四聚體的重構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)[8]。隨著對(duì)TK-1的深入研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤疾病中，病灶組織及循環(huán)中的TK-1表達(dá)可出現(xiàn)顯著升高（甚至達(dá)到生理水平的2～100倍）[9]。現(xiàn)有的關(guān)于TK-1的研究主要集中在腎癌、乳腺癌、胃癌及非小細(xì)胞肺癌等，這些腫瘤一般是存在高速惡性增生的實(shí)體腫瘤，細(xì)胞DNA合成旺盛[10-11]。

大量的研究證明了TK-1在多種實(shí)體腫瘤中存在差異性表達(dá)，有重要的診斷價(jià)值[4]。如在Li等[12]針對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者（n = 250）的研究中，腫瘤患者血清中TK-1水平顯著高于正常對(duì)照組，而且升高水平與癌癥分期相關(guān)，轉(zhuǎn)移組也顯著高于未轉(zhuǎn)移組。Chen等[13]開(kāi)展的大規(guī)模篩查研究中（n = 35 365）發(fā)現(xiàn)，不同的血清TK-1水平可以反映腫瘤的大小、分期及是否轉(zhuǎn)移情況，而且TK-1的降低提示了抗腫瘤治療的效果。血清TK-1作為可靠的無(wú)創(chuàng)性指標(biāo)，對(duì)多種惡性腫瘤有著早期預(yù)測(cè)及診斷的重要價(jià)值。然而，針對(duì)卵巢癌患者TK-1表達(dá)情況的研究相對(duì)較少。在本研究中發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清TK-1水平是顯著高于良性腫瘤患者及健康對(duì)照，而且是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及不同的臨床分期患者之間的TK-1水平有著明顯的差別（Ⅳ期及有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者TK-1水平顯著升高），但不同病理分型患者之間差異并不顯著。同時(shí)，CA125是臨床上應(yīng)用最廣泛的卵巢癌診斷預(yù)后血清學(xué)指標(biāo)，其特異性及靈敏度都得到了大量臨床數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。本研究使用CA125作為對(duì)照觀察血清TK-1水平與卵巢癌臨床分期及預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示卵巢癌患者血清TK-1與CA125呈顯著正相關(guān)（r = 0.657，P < 0.01），也為尋找與CA125聯(lián)合來(lái)診斷及判斷預(yù)后的指標(biāo)提供了參考。因此，血清TK-1可用于作為卵巢癌的無(wú)創(chuàng)血清學(xué)診斷指標(biāo)，其水平的高低可以反映卵巢癌的臨床分期及轉(zhuǎn)移情況。

卵巢癌易出現(xiàn)復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這也是導(dǎo)致患者病死的最重要原因。臨床上一直在尋找優(yōu)良的無(wú)創(chuàng)預(yù)后判斷指標(biāo)來(lái)更好的指導(dǎo)臨床治療及評(píng)估預(yù)后[14]。本研究通過(guò)對(duì)患者遠(yuǎn)期隨訪觀察，探討了不同血清TK-1水平患者的遠(yuǎn)期預(yù)后及相關(guān)危險(xiǎn)因素。根據(jù)初始KT-1水平高低分組的隨訪顯示，中遠(yuǎn)期（30～40個(gè)月）高TK-1組患者無(wú)進(jìn)展生存比率較低TK-1組更低，預(yù)后更差。其中影響患者無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間的危險(xiǎn)因素主要是臨床分期、初始CA125及TK-1水平（均P < 0.01）。而患者的年齡、BMI、是否吸煙飲酒及病理類(lèi)型并不是影響無(wú)進(jìn)展生存比率的危險(xiǎn)因素。值得一提的是，有研究顯示漿液性卵巢癌的預(yù)后就其他病理類(lèi)型更差[15]，但在本次研究中并未顯示出相似結(jié)果。可能是因?yàn)楸狙芯繉儆诨仡櫺匝芯浚瑹o(wú)法均等納入各類(lèi)型腫瘤（包含不同階段臨床分期），造成了選擇性偏倚。并且TK-1作為反映細(xì)胞惡性增生的指標(biāo)，更與腫瘤組織的大小、增生程度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，用作區(qū)分與預(yù)后相關(guān)的腫瘤病理類(lèi)型反而不夠準(zhǔn)確[16]。

本研究檢測(cè)了卵巢癌患者血清TK-1水平，研究了TK-1與患者臨床特征的相關(guān)性，并通過(guò)長(zhǎng)期隨訪研究，分析了TK-1與患者預(yù)后的關(guān)系及相關(guān)危險(xiǎn)因素。TK-1作為近年研究關(guān)注的一類(lèi)腫瘤標(biāo)志物，其在卵巢癌患者的診斷及預(yù)后中都顯示出了重要的價(jià)值，TK-1水平與臨床分期及CA125水平有著良好的相關(guān)性，高TK-1也是影響遠(yuǎn)期預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素。然而本研究也存在樣本量較少，納入患者存在一定偏倚的不足，在后續(xù)的研究中還需對(duì)TK-1與卵巢癌的關(guān)系進(jìn)行深入探討，為更準(zhǔn)確的臨床診斷及預(yù)后提供參考。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Jayson GC，Kohn EC，Kitchener HC，et al. Ovarian cancer [J]. Lancet，2014，384（9951）：1376-1388.

[2] Meyer T， Rustin GJ. Role of tumour markers in monitoring epithelial ovarian cancer [J]. Br J Cancer，2000，82（9）：1535-1538.

[3] Huang ZH，Tian XS，Li R，et al. Elevated thymidine kinase 1 in serum following neoadjuvant chemotherapy predicts poor outcome for patients with locally advanced breast cancer [J]. Exp Ther Med，2012，3（2）：331-335.

[4] Bolayirli M，Papila C，Korkmaz GG，et al. Serum thymidine kinase 1 activity in solid tumor （breast and colorectal cancer） patients treated with adjuvant chemotherapy [J]. J Clin Lab Anal，2013，27（3）：220-226.

[5] Alegre MM，Weyant MJ，Bennett DT，et al. Serum detection of thymidine kinase 1 as a means of early detection of lung cancer [J]. Anticancer Res，2014，34（5）：2145-2151.

[6] Mutch DG，Prat J. 2014 FIGO staging for ovarian，fallopian tube and peritoneal cancer[J]. Gynecol Oncol，2014， 133（3）：401-404.

[7] Welin M，Kosinska U，Mikkelsen NE，et al. Structures of thymidine kinase 1 of human and mycoplasmic origin [J]. Proc Natl Acad Sci USA，2004，101（52）：17970-17975.

[8] Mutahir Z，Clausen AR，Andersson KM，et al. Thymidine kinase 1 regulatory fine-tuning through tetramer formation [J]. FEBS J，2013，280（6）：1531-1541.

[9] Aufderklamm S，Todenhofer T，Gakis G，et al. Thymidine kinase and cancer monitoring [J]. Cancer Lett，2012，316（1）：6-10.

[10] Bjohle J，Bergqvist J，Gronowitz JS，et al. Serum thymidine kinase activity compared with CA 15-3 in locally advanced and metastatic breast cancer within a randomized trial [J]. Breast Cancer Res Treat，2013，139（3）：751-758.

[11] Korkmaz T，Seber S，Okutur K，et al. Serum thymidine kinase 1 levels correlates with FDG uptake and prognosis in patients with non small cell lung cancer [J]. Biomarkers，2013，18（1）：88-94.

[12] Li HX，Lei DS，Wang XQ，et al. Serum thymidine kinase 1 is a prognostic and monitoring factor in patients with non-small cell lung cancer [J]. Oncol Rep，2005，13（1）：145-149.

[13] Chen ZH，Huang SQ，Wang Y，et al. Serological thymidine kinase 1 is a biomarker for early detection of tumours：a health screening study on 35，365 people，using a sensitive chemiluminescent dot blot assay [J]. Sensors （Basel），2011，11（12）：11064-11080.

[14] Arie S. Routine testing for women with ovarian cancer [J]. BMJ，2014，348：1200.

[15] Sung PL，Chang YH，Chao KC，et al. Global distribution pattern of histological subtypes of epithelial ovarian cancer：a database analysis and systematic review [J]. Gynecol Oncol，2014，133（2）：147-154.

[16] Xu Y，Shi QL，Ma H，et al. High thymidine kinase 1 （TK1） expression is a predictor of poor survival in patients with pT1 of lung adenocarcinoma [J]. Tumour Biol，2012，33（2）：475-483.

（收稿日期：2014-11-14 本文編輯：任 念）