精液沙眼衣原體感染對精液一氧化氮含量和精子頂體內透明質酸酶活性的影響

鄭立宏，楊丹，高曉勤(貴陽護理職業學院，貴陽55008；貴陽醫學院；遵義醫藥高等專科學校)

精液沙眼衣原體感染對精液一氧化氮含量和精子頂體內透明質酸酶活性的影響

鄭立宏1，楊丹2，高曉勤3(1貴陽護理職業學院，貴陽550081；2貴陽醫學院；3遵義醫藥高等專科學校)

摘要：目的 探討精液沙眼衣原體(CT)感染對精液中一氧化氮(NO)含量和精子頂體內透明質酸酶(HYD)活性的影響。方法 選擇精液CT陽性男性不育123例作為觀察組、CT陰性男性不育155例作為對照組。檢測精液常規，免疫層析法檢測CT感染情況，硝酸還原酶法檢測NO含量，精子頂體內HYD活性和陽性反應率采用自制的藥盒檢測。結果 觀察組精液NO含量為(57.98±14.78)μmol/L，精子頂體內HYD活性和陽性反應率分別為(26.48±16.97) μm和(52.98±18.98)%；對照組精液NO含量為(34.89±8.47) μmol/L，精子頂體內HYD活性和陽性反應率分別為(38.22±16.39)μm和(71.32±19.13)%，觀察組NO含量較對照組明顯偏高(P<0.01)，精子頂體內HYD活性、陽性反應率均較對照組低(P均<0.01)。結論精液CT感染導致精液NO含量偏高和精子頂體內HYD活性下降，從而影響男性生育力。

關鍵詞：沙眼衣原體；精液；一氧化氮；透明質酸酶；不育癥

育齡夫婦不能生育的一個重要原因是男性生殖道感染，其中以沙眼衣原體(CT)感染最常見[1]。嚴重的CT感染會影響精液參數并增加精子凋亡，影響男性生育能力[2]。近年研究發現，精液一氧化氮(NO)含量異常增高會增加精子凋亡率，從而導致男性生育力下降[3]。精子頂體內的透明質酸酶(HYD)是受精的關鍵酶，HYD能夠酶解透明質酸，溶解放射冠細胞外基質，使顆粒細胞松散，放射冠分解，并且還能水解透明帶表面精子尾部周圍一定區域，使得精子尾部能夠自由擺動，為精卵融合、形成受精卵創造條件。目前，CT感染對精液NO含量及精子頂體內HYD活性的影響少見報道。本研究對男性不育患者的精液進行檢測，分析精液CT感染對精液NO含量和精子頂體內HYD活性及陽性反應率的影響。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2012年3月～2013年12月在貴陽醫學院附屬醫院確診為男性不育患者278例，年齡22～40歲；其中CT感染陽性123例(觀察組)，CT感染陰性155例(對照組)。兩組年齡、不育病程等比較差異無統計學意義。

1.2方法

1.2.1檢測方法受試者禁欲3～5 d，用新潔爾滅消毒手及尿道口，以手淫法獲取1次射精的全部精液，放入一次性無菌干燥帶蓋塑料容器內，置于37 ℃恒溫恒濕箱中約30 min，待完全液化。采用偉力彩色精子質量檢測系統進行精液常規分析，精液量、精子密度、前向運動率、正常形態率的結果判定均按照WHO推薦方法和標準[4]。采用免疫層析法檢測CT，硝酸還原酶法檢測NO含量，自制藥盒檢測HYD活性及陽性反應率。HYD陽性反應：精子終止孵育后，每份孵育片于光學顯微鏡下均勻選取5～6個視野，隨機觀察200個精子頭部，出現周圍暈環者視為HYD陽性反應。HYD活性強度：測微尺測量視野下每個精子頭部暈環直徑的大小，取其均值作為判斷HYD活性強度的指標。

2 結果

兩組1次射精量、精子密度、精子前向運動率、精子正常形態率、精液NO含量、精液HYD活性及陽性反應率結果見表1。

3討論

表1　兩組精液檢測結果比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.05，△P<0.01。慢性前列腺炎的主要病因之一，因此其對男性生育的影響引起了人們的關注。鄭立宏等[5]報道，精液中高濃度NO會促使精子凋亡率增加，從而導致男性生育力下降。目前已知的人精子頂體內含參與受精的酶有24種，其中HYD與受精關系密切[6]，HYD在受精時精子與卵子的結合過程中起重要作用，它不但參與精卵識別，還可使卵丘的顆粒細胞松散，分解放射冠，在頂體蛋白酶及其他酶系的密切配合下，為精卵融合、形成受精卵創造條件[7]。

CT是一類專性細胞內生長、有獨特發育周期的原核細胞型微生物，很少從正常男性尿道中分離出來，但被認為是非淋菌性尿道炎、附睪炎和本研究顯示，CT感染導致精液NO含量增加，精子頂體內HYD活性及陽性反應率下降，其可能的機制是CT感染會引發精子凋亡率增加。研究顯示，凋亡生殖細胞內NOS活性增強，NOS參與NO的合成，由于NOS活性增強，所以精液合成NO數量增加；HYD活性和陽性反應率降低，其可能的機制是CT感染泌尿生殖系統，CT的原體不僅可以吸附在精子的表面，影響精子活力，而且可穿入精子頭、體、尾各部，在精子內部形成始體并大量繁殖，直接造成精子膜和頂體的破壞[8]，從而導致HYD活性和陽性反應率下降。Zini等[9]報道，過量的NO在結構上具有活性很強的自由基結構特性，加強了精子膜的過氧化反應程度，損害精子，導致細胞膜功能障礙及結構損傷，因而降低了精子運動、頂體反應和獲能。頂體反應能力減弱就會降低頂體內酶的釋放，因此作為頂體內酶之一的HYC活性降低。另外，CT感染可刺激睪丸生精細胞、巨噬細胞產生腫瘤壞死因子α(TNF-α)，TNF-α升高使活性氧化物質(Ros)增高[10]，過量的Ros可使精子線粒體內、外膜上的不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應，使膜的脂質排列松散，內膜脊減少，使ATP合成降低，通過誘發白細胞增加影響精子形態[11]。本研究通過精液常規分析也證實了CT感染會導致精子密度、向前運動率、正常形態率下降。據報道大部分患者的精子形態異常都是由于頂體內酶的異常所致[12]。精子頂體完整率可間接反映頂體內酶的狀況，CT感染導致精子頂體完整率明顯降低，酶的活性下降，因此HYD活性及陽性反應率下降[13]。

綜上所述， CT感染會引發精液NO含量增加及HYD活性及陽性反應率下降，導致精子凋亡率增加，降低男性生育力；而HYD活性及陽性反應率下降，導致受精率下降，從而致使男性生育力下降。

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(收稿日期：2014-09-12)

通信作者：楊丹

基金項目：貴陽市科學技術局科技計劃項目(2012-1)。

中圖分類號：R374

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)05-0087-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.05.035