荷葉中總黃酮總生物堿及葉重變化規律的研究

李耀中 孟祥斌

荷葉中總黃酮總生物堿及葉重變化規律的研究

李耀中 孟祥斌

本文對蘇南所產不同生長時期的荷葉中總黃酮﹑總生物堿及平均葉重的變化規律進行研究, 結果顯示8～9月間的荷葉的總黃酮含量﹑總生物堿含量及平均葉重最高, 分別達到72.93 mg/g﹑46.32 mg/g及20.07 g/片。此結果對指導區域荷葉藥材的采摘具有一定意義。

荷葉；提取工藝；優化

中國藥典(2010版 一部)記載, 荷葉(lotus leaf)具有清暑化濕﹑升發清陽﹑涼血止血的功效, 用于暑熱煩渴﹑暑濕泄瀉﹑血熱吐衄﹑便血崩漏等癥的治療。荷葉炭收澀化瘀止血, 用于治療出血癥和產后血暈等［1］。荷葉作為食用和藥用資源自古即有廣泛應用, 近年來國內外學者加大了對荷葉的系統研究, 發現其主要含有生物堿﹑黃酮﹑揮發油﹑多糖等成分［2］,其中黃酮和生物堿類化合物的生物活性較高。藥理研究表明,荷葉主要具有調脂減肥﹑抗氧化﹑抗衰老﹑抑菌作用［3］。本文主要對蘇南所產荷葉在不同生長時間的總黃酮和總生物堿及葉重變化的規律進行了初步研究。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器設備 HZT-A200電子天平(福州華志科學儀器), UV-7504紫外可見分光光度計(上海欣茂儀器), RE-201D旋轉蒸發儀(上海聚昆儀器), FW135中草藥粉碎機(天津市泰斯特儀器), 101-1A數顯式電熱恒溫干燥箱(滬越科學實驗儀器廠)。

1.2 材料與試劑

1.2.1 試驗材料 荷葉原材料, 采于常州市新北區荷園。

1.2.2 試驗試劑 荷葉堿標準品和蘆丁標準品(北京盛世康普化工技術研究院)；分析純試劑：乙醇﹑氯仿﹑鹽酸﹑氫氧化鈉﹑亞硝酸鈉﹑硝酸鋁﹑溴甲酚綠。

1.3 試驗方法

1.3.1 荷葉的采集 5～10月期間, 在每月15日前后［4］, 選取采集產于常州市新北區荷園完整的荷葉葉片50片。

1.3.2 荷葉的處理 荷葉洗凈后, 65℃干燥, 稱總葉片重量并計算平均葉重。荷葉經粉碎過篩后進行有關活性成分檢測。

1.3.3 荷葉總黃酮的測定

1.3.3.1 繪制蘆丁標準曲線 稱取蘆丁標準品10 mg, 用30%乙醇溶解, 定容至50 ml, 制備成濃度為0.2 mg/ml的標準溶液。分別吸取上述標準溶液0﹑0.5﹑1.0﹑1.5﹑2.0﹑2.5﹑3.0 ml于10 ml比色管中, 加入一定量的30%乙醇使最終體積為5 ml；加入0.3ml濃度為5%亞硝酸鈉溶液, 混合均勻；靜置5 min,加入0.3 ml濃度為10%硝酸鋁溶液混勻；靜置6 min, 加入4 ml濃度1 mol/L的NaOH溶液, 混合均勻；用30%乙醇標定至刻度, 靜置10 min, 于510 nm處分別測定其吸光度值［6］。以吸光度(A)為縱坐標, 標準液濃度(C)為橫坐標, 繪制標準曲線, 得回歸方程：A=4.4027C+0.0105(R2=0.9986)。

1.3.3.2 荷葉中總黃酮的測定 稱取5 g荷葉粉碎物, 平行6份, 加入20倍量的70%乙醇溶液, 80℃提取2 h, 抽濾得提取液, 重復提取2次, 合并提取液, 減壓濃縮［6］, 濃縮液65℃干燥, 得荷葉總黃酮提取物, 取適量干燥提取物按2.3.1中的方法配制成待測液并測定其吸光值。根據回歸方程計算荷葉中總黃酮的含量。

1.3.4 荷葉總生物堿的測定

1.3.4.1 繪制荷葉堿標準曲線 稱取荷葉堿對照品10 mg,以適量氯仿溶解, 定容至50 ml, 制備成濃度為0.2 mg/ml 的對照品標準溶液。分別取0﹑1.0﹑2.0﹑3.0﹑4.0﹑5.0﹑6.0 ml對照品標準溶液于10 ml比色管中, 加入0.2 mol/L的NaOH溶液1 ml﹑0.1%的溴甲酚綠溶液1ml, 加氯仿定容至刻度, 轉移至分液漏斗并振搖均勻, 靜置30 min, 取氯仿層, 415 nm測定其吸光值［7］。以吸光度(A)為縱坐標, 待測液濃度(C)為橫坐標, 繪制標準曲線, 得回歸方程：A=8.3457C+0.0044(R2=0.9978)。

1.3.4.2 荷葉中總生物堿的測定 稱取5 g荷葉粉碎物, 平行6份, 加入20倍量70%的乙醇溶液, 80℃提取2 h［8］, 過濾提取液, 重復提取2次, 合并提取液, 經減壓濃縮, 濃縮液65℃干燥, 得荷葉總生物堿提取物, 取適量干燥提取物按2.4.1中的方法配制成待測液并測定其吸光值, 根據回歸方程計算荷葉中總生物堿的含量。

2 結果

按試驗方法進行, 荷葉葉片重量在8～9月成熟期達到最高, 均重為20.07g/片, 5～8月荷葉由營養生長至成熟期間葉片逐漸增重, 9月后由于進入衰老期, 因營養消耗﹑物質流失葉重有所減少。5～7月荷葉中的黃酮和生物堿類成分含量逐漸增加, 8～9月達到較高水平, 最高含量分別為：荷葉總黃酮72.93 mg/g﹑荷葉總生物堿46.32 mg/g, 之后進入衰老期,隨著物質流失, 兩種有效成分含量都有不程度的下降。見表1,圖1。另取8月15日前后所采集的荷葉粉碎物, 按2.2荷葉總黃酮的測定和2.3荷葉總生物堿的測定方法檢測, 荷葉總黃酮含量為73.15 mg/g﹑荷葉總生物堿含量為45.85 mg/g, 重現性較好。

表1 不同時間荷葉中總黃酮含量﹑總生物堿含量及片重比較

圖1 不同時間荷葉總黃酮含量﹑總生物堿含量和片重曲線圖

3 小結

由研究結果可以發現, 荷葉生長到8～9月其片重和有效成分黃酮﹑生物堿的含量均達到較高水平, 適宜在此期間采摘荷葉作為藥材資源。本草記載的荷葉夏秋二季采摘夏季宜遲, 如此既可以保證荷葉新鮮, 又能獲得最大的資源量；秋季宜早, 這樣荷葉重量和有效成分含量還處于較高水平, 而且荷葉葉質較好。

由于本試驗所用荷葉為蘇南地區所產, 其生長情況和黃酮﹑生物堿含量及變化情況與其他區域存在一定差異, 但總體趨勢應該差異不大, 仍具有一定的參考價值。

［1］國家藥典委員會.中國藥典(2010版 一部).中國醫藥科技出版社, 2010:258-259.

［2］張國慶, 馮習坤, 曾為馳, 等. 荷葉的化學和藥理研究進展. 藥學實踐雜志, 2010, 28(5):328-330.

［3］王福剛, 曹娟, 劉斌, 等. 荷葉的化學成分及其藥理作用研究進展. 時珍國醫國藥, 2010, 21(9):2339-2340.

Research of varying pattern of total flavones, total alkaloid and leaf weight in lotus leaf

LI Yaozhong, MENG Xiang-bin. School of Pharmaceutical and Environmental Engineering, Changzhou Engineering Professional Technology Institute, Changzhou 213164, China

This paper provided research of varying pattern of total flavones, total alkaloid and average leaf weight in lotus leaf during different growth period in southern Jiangsu. Its results showed highest levels of total flavones, total alkaloid and average leaf weight during August～September, as 72.93 mg/g, 46.32 mg/g, and 20.07 g/ leaf. This result contained certain significance for guidance of collecting regional lotus leaf as medicinal material.

Lotus leaf; Extraction process; Optimization

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.214

2015-07-24］

常州市科技計劃資助(項目編號：CE20132016)

213164 常州工程職業技術學院 制藥與環境工程學院